北京市自然科学基金(7122163)
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
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- 肾组织干细胞对人肾小管上皮细胞损伤修复的作用被引量：6
- 2013年
- 目的:研究肾组织干细胞(kidney stem cells,KSC)在急性肾小管损伤过程中的作用及其机制。方法:从大鼠肾乳头分离、提取并鉴定KSC,进行传代培养。利用0.1μmol/L抗霉素A处理人肾小管上皮细胞(human kid-ney epithelial cells,HKC)制作细胞损伤模型。将荧光标记的KSC和损伤的HKC进行共培养,观察各时间点HKC的损伤情况以及KSC的作用方式,同时采用骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)进行比较研究。结果:与BMSCs比较,在共培养体系中,KSC通过共培养体系微孔膜迁移到下室的细胞数较少。相对于空白对照,与KSC或BMSCs共培养的HKC细胞腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量以及上清液总超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)的值较高,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)值均下降,采用KSC或BMSCs培养上清液干预时这种现象更加明显,且细胞存活率较高、凋亡率较低。KSC和BMSCs对于损伤HKC的修复作用功能相似。结论:KSC对受损的HKC发挥了抗凋亡、减轻氧化应激和促进修复及增殖的作用。
- 温静程庆砾马强齐云赵佳慧杜婧王小丹刘胜李美花张晓英
- 关键词：干细胞肾小管上皮细胞
- 高糖对肾组织干细胞基本特征的影响
- 2015年
- 目的评估高糖对肾组织干细胞(KSC)基本特征的影响。方法分离肾乳头处KSC,比较其在高糖(30 mmol/L)和正糖(5.6 mmol/L)培养基的微环境下细胞形态、增殖能力、相关表型标记物的改变。结果细胞增殖检测结果提示从第4天开始高糖组细胞生长较正糖组缓慢;免疫荧光结果提示KCS经高糖处理后,纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的合成增加;q RT-PCR检测结果显示KSC经高糖干预后,纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原m RNA表达增高,间质标记物?-SMA、Vimentin基因表达进一步升高,促纤维化因子TGF-?、CTGF、PAI-1 m RNA表达均升高。结论 KSC在高糖的微环境中细胞增殖能力下降,促纤维化基因表达增高。
- 杨光程庆砾李春霖贾雅丽王静雪岳文裴雪涛刘洋杨勇
- 关键词：细胞增殖高糖细胞表型
- 老年多器官衰竭的肾脏问题被引量：5
- 2014年
- 老年多器官衰竭（MOFE）常伴有急性肾损伤（AKI），预后极差。肾脏保护是MOFE临床诊治中的一个重要问题。近年，AKI在MOFE中的发病原因和病理生理机制有不少新进展，如“血压正常的AKI”和“跨肾灌注压”等概念对理解老年AKI的发生具有重要意义。一些新的生物标志物在临床上的应用使AKI的早期诊断成为可能。肾脏专科医师的及时会诊，以及在MOFE治疗过程中对肾功能保护的各种方法，如按照肾功能水平计算用药剂量和间隔时间、采用合适的血管活性药物提升血压、调整合理的机械通气参数等，均可以改善伴有AKI的MOFE患者的预后。
- 程庆砾
- 关键词：多器官功能衰竭急性肾功能不全老年人
- 高龄老年患者270例机械通气后短期预后及危险因素分析被引量：3
- 2014年
- 目的：对行机械通气的老年患者进行随访观察，分析机械通气的短期预后及危险因素。方法选择2008年1月至2013年6月就诊于解放军总医院老年病房的270例机械通气患者为研究对象，根据机械通气后28d时和29d至3个月时患者的生存情况，将患者资料分成死亡组（n＝126）和存活组（n＝144）进行分析，采用单因素分析筛查出影响预后的因素，以有统计学意义的因素作为自变量进行多因素logistic回归分析，判断各因素对死亡风险的影响。结果270例老年机械通气患者，年龄（89.0±4.8）岁。肺炎（70.7%）为最常见病因，其次为急性左心衰（10.7%）和慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD，7.8%）等。28d内死亡86例（31.9%），3个月内共死亡126例（46.7%）。多因素logistic回归分析显示低氧合指数（PO2/FiO2）、前白蛋白降低、血尿素氮（BUN）增高、血清肌酐（SCr）增高（〉165.2μmol/L）、使用呼气末正压（PEEP）是影响机械通气患者28d预后的危险因素（均P＜0.05）；慢性肾脏病（CKD）、C-反应蛋白（CRP）是影响机械通气患者29d至3个月时预后的危险因素（均P＜0.05）。结论肺炎、急性左心衰、AECOPD等是老年患者机械通气最常见的原因；CKD、低PO2/FiO2、前白蛋白降低、CRP、BUN增高、SCr增高（＞165.2μmol/L）及使用PEEP是影响机械通气患者预后的危险因素。
- 李青霖程庆砾马强敖强国赵佳慧杜婧王小丹刘胜张晓英
- 关键词：预后老年人
- 健康老年人群血浆可溶性血栓调节蛋白和肾小球滤过率的关系
- 2014年
- 目的：探讨老年人群血浆可溶性血栓调节蛋白（sTM）与估算的肾小球滤过率（eGFR）的相关性。方法采用整群随机抽样的方法对北京市9个社区283名≥65岁健康老年人进行研究，酶联免疫吸附法测定血浆可溶性血栓调节蛋白水平，应用CKD-EPI公式评估eGFR，同时行人体学测量及血清生化指标测定，并做相关和回归分析。结果北京社区健康老年人群eGFR水平与sTM、年龄、尿素氮、肌酐、C反应蛋白（CRP）及收缩压呈负相关，与白蛋白、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平呈正相关；在校正了年龄、血压、血糖（GLU）、CRP、血脂、尿酸（UA）等指标后，健康老年人血浆sTM仍然和eGFR呈负相关（B＝-3.340，P＝0.000）。在进一步的研究中，将入组的北京社区健康老年人分为老年（65～80岁）和高龄老年（＞80岁）两组；两组之间eGFR和sTM水平差异均无统计学意义（P＞0.05），老年组和高龄老年组eGFR均与sTM水平呈负相关（r＝-0.229，P＝0.000；r＝-0.3613，P＝0.02），校正了年龄、血压、GLU、CRP、血脂、UA等指标后差异仍有统计学意义（B＝-3.26，P＝0.000；B＝-4.45，P＝0.013）。结论 sTM可作为判断老年人群肾功能下降的指标。
- 马强敖强国程庆砾
- 关键词：血栓调节蛋白肾小球滤过率老年人
- 糖尿病大鼠肾小管间质早期病变及肾康注射液的干预治疗被引量：12
- 2015年
- 目的 制作2型糖尿病大鼠模型,观察肾小管间质损伤是否为2型糖尿病的早期肾脏病理改变并探讨其干预方法及可能的机制.方法 采用高糖高脂饮食诱导联合小剂量链脲佐菌素（STZ）的方法建立2型糖尿病模型,同时设立正常对照组,采用肾康注射液（SKI）进行治疗,观察大鼠的一般状态、生化指标、尿微量白蛋白及尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的改变;应用高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验评估大鼠的胰岛素抵抗情况,肾组织高碘酸-雪夫染色（PAS染色）反应观察其病理变化;应用免疫组化方法检测肾组织Toll样受体4（TLR4）表达及肾间质CD68^＋细胞数.结果 糖尿病大鼠体质量减轻,尿微量白蛋白和尿NAG明显升高,胰岛素抵抗明显,肾小球体积增大,肾小管广泛空泡样变性,肾组织TLR4表达及肾间质CD68^＋细胞数明显增加[TLR4的累积吸光度（A）值：6 289.86±272.45与207.14-22.37,CD68^＋细胞数：8.79±0.79与1.23±0.52],SKI治疗后上述情况均有不同程度改善（均P ＜0.05）.结论 肾小管间质病变是2型糖尿病早期肾损害表现,SKI可以减轻肾脏的损伤,其机制可能与减少肾组织TLR4表达,抑制炎症介导的巨噬细胞浸润有关.
- 刘洋马强杨光赵佳慧刘胜敖强国杜婧王晓华程庆砾
- 关键词：肾小管间质病变TOLL样受体4肾康注射液
- 高糖减弱肾组织干细胞条件培养液对缺氧损伤肾小管上皮细胞的修复作用
- 2017年
- 目的:评估高糖对肾组织干细胞(kidney stem cells,KSC)条件培养液修复缺氧损伤肾小管上皮细胞(renal tubular epithelium cells,RTEC)作用的影响。方法:分离肾乳头处的KSC,分别用正常糖浓度(简称"正糖",5.6 mmol/L)和高糖(30 mmol/L)培养基对KSC进行预处理后制备KSC条件培养液。建立大鼠RTEC缺氧/复氧模型,比较高糖与正糖刺激后KSC条件培养液对缺氧/复氧RTEC修复作用的差异。结果:(1)缺氧4 h/复氧2 h为RTEC缺氧/复氧模型的最佳时间。(2)缺氧后,RTEC早期凋亡率和晚期凋亡率均升高,采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组RTEC的凋亡率均明显降低(P<0.01)。正糖组和高糖组比较,干预24 h后,正糖组RTEC的总体凋亡率显著低于高糖组(P=0.02)。(3)缺氧后,RTEC上清液的乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平明显升高(P<0.01),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平明显降低(P<0.01)。采用KSC条件培养液干预12 h和24 h后,与缺氧/复氧对照组相比,正糖缺氧/复氧组和高糖缺氧/复氧组的LDH和MDA水平均显著降低(P<0.01),SOD水平均显著升高(P<0.01)。正糖组和高糖组比较,高糖组的LDH和MDA水平要显著高于正糖组(P<0.05),SOD水平要显著低于正糖组(P<0.01)。结论:KSC条件培养液对缺氧损伤的RTEC有修复作用,这种作用主要是通过减少氧化应激、抑制细胞凋亡来实现的,而经高糖预处理的KSC条件培养液的抗氧化应激、抗凋亡作用减弱。
- 杨光程庆砾李春霖贾雅丽岳文裴雪涛刘洋赵佳慧杜婧敖强国
- 关键词：缺氧肾小管氧化性应激
- 肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化被引量：1
- 2015年
- 目的探讨肾组织干细胞向肾小管上皮细胞的诱导分化。方法分离肾乳头肾组织干细胞,对照组加入正常干细胞培养基,诱导组应用含activin A、BMP-7、维甲酸3种细胞因子的诱导培养基与肾上皮细胞培养基交替诱导,同时与缺氧损伤的肾小管上皮细胞共培养,通过细胞流式、免疫荧光、q RT-PCR的方法评估诱导效率。结果细胞流式结果提示,对照组肾组织干细胞CK-18阳性率为6.5%,诱导组CK-18阳性率为44.2%;免疫荧光结果提示,诱导组成熟上皮细胞标记CK-18、E-cadherin、ZO-1部分阳性表达;q RT-PCR结果提示,诱导组成熟上皮细胞标记E-cadherin、AQP-1基因表达水平较对照组显著升高(P<0.01)。结论肾组织干细胞在体外可以诱导分化为肾小管上皮细胞。
- 杨光程庆砾李春霖杨勇贾雅丽王静雪岳文裴雪涛刘洋
- 关键词：诱导分化肾小管上皮细胞共培养
- 大鼠肾组织干细胞的分离培养与鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的分离培养及稳定扩增大鼠肾组织干细胞(kidney stem cell,KSC),并鉴定其生物学特征及干细胞特性。方法从4周龄雄性SD大鼠双肾肾乳头处分离培养KSC,倒置显微镜下观察细胞形态特征,通过流式细胞、免疫荧光技术鉴定KSC的表型特征,通过成骨、成脂诱导分化鉴定其分化能力,并通过实时定量荧光PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)比较KSC与大鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)基因表达的差异。结果 KSC呈纺锤形或树枝状生长;免疫荧光结果显示KSC可表达平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙粘蛋白(N-Cadherin)、神经巢蛋白(Nestin)、CD133,不表达钙粘蛋白-E(E-Cadherin)、细胞角蛋白(cytokeratin-18,CK-18)、紧密连接蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1);细胞流式结果显示,CD29、CD90、CD73表达比率分别为99.0%、95.8%和99.9%,CD45阳性率为3.4%;干细胞标记CD133和Nestin阳性率分别为33.2%和70.2%,双阳性率为31.4%;成脂诱导后油红O染色呈红色,成骨诱导后早期成骨细胞分化标志茜素红染色呈橙红色;qRT-PCR结果显示,与RTEC相比,原始胚胎干细胞标记物Nanog、Oct4/pou5f1、Sox2/sry-box-2的mRNA表达量在KSC中增高(P<0.01),间质标记物α-SMA、Vimentin mRNA表达量在KSC中增高(P<0.01),而成熟的上皮细胞标记物E-Cadherin、CK18mRNA表达量在KSC中降低(P<0.01)。结论肾乳头部位可以分离培养并稳定扩增出具有间充质干细胞特性的KSC。
- 杨光程庆砾李春霖贾雅丽王静雪岳文裴雪涛
- 关键词：肾乳头
