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福建省教育厅资助项目(JXK200709)
作品数:
3
被引量:8
H指数:2
相关作者:
方航荣
刘景丰
陈丽红
邱明链
曾金华
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相关机构:
福建医科大学
西安医学院附属医院
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机构
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福建医科大学
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西安医学院附...
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邱明链
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陈丽红
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刘景丰
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方航荣
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吴燕斌
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曾金华
传媒
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2篇
2011
1篇
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人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共修饰树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的研究
被引量:5
2011年
目的联合人凋亡相关因子配体(hFasL)及人转化生长因子-β1(hTGF-β1)基因共修饰大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(imDC),提高imDC诱导大鼠同种异体原位肝移植免疫耐受的能力,以延长受鼠生存期。方法行以DA大鼠为供体、近交系Lewis大鼠为受体的同种异体原位肝移植140例,随机均分为7组:未给移植受鼠注射DC组(对照组)、mDC组、imDC组、空载体组、FasL组、TGF组及共转染组;分别于移植前5d每天给Lewis大鼠腹腔注射mDC、imDC、空载体转染的imDC、hFasL修饰的imDC、hTGF-β1修饰的imDC、hFasL和hTGF-β1共修饰的imDC各2×10^6个,于肝移植术后3、7、10d各处死4只,观察外周血肝功能变化[丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)],肝脏病理改变,肝脏凋亡,外周血清细胞因子,并进行生存分析。结果肝脏病理示术后7d,7组差异有统计学意义(P〈0.01),共转染组排斥反应均轻于TGF组和FasL组;10d时,7组差异有统计学意义(P〈0.01),共转染组排斥反应轻于TGF组和FasL组,TGF组轻于FasL组。肝功能示共转染组于7d时就已基本恢复正常,FasL组于7d时有所降低,但10d时反而升高,ALT及TBIL的浓度均高于共转染组(P〈0.01,P〈0.05);TGF组到10d时,肝功能已恢复正常,ALT及TBIL的浓度均低于FasL组(P〈0.01,P〈0.05),但与共转染组比较,差异无统计学意义(P〉0.05)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测示,术后7d共转染组和TGF组的血清白细胞介素(IL)-1、IL-10及IL-12与FasL组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);但共转染组和TGF组之间差异无统计学意义(P〉0.05)。TUNEL显示FasL组的肝、脾及腹腔淋巴结中淋巴细胞凋亡指数与共转染组比较,差异均无统计学意义(P〉0.05),但多于TGF组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。FasL组中位生存期20d与imDC组(23d)�
曾金华
邱明链
陈丽红
吴燕斌
方航荣
刘景丰
关键词:
树突状细胞
免疫耐受
FASL
转化生长因子-Β1
肝移植
人凋亡相关因子配体及人转化生长因子-β1基因共转染大鼠未成熟树突状细胞对其生物学活性的影响
被引量:3
2011年
目的观察人凋亡相关因子配体(hFasL)及人转化生长因子-β1(hTGF-β1)基因共转染的大鼠未成熟树突状细胞(imDC)对其生物学活性影响。方法实验分6组:mDC组、imDC组、空载体组、hFasL基因转染组、hTGF-β1基斟转染组及hFasL—hTGF-β1基因共同转染组(即共转染组)。用hFasL或(和)hTGF-β1真核表达载体(pIRES2-EGFP—hFasL、pIRES2-EGFP-hTGF-β1)转染培养6d后大鼠骨髓来源的imDC,转染24~48h后应用荧光显微镜、酶联免疫吸附试验(ELISA)、Westernblot、流式细胞术及混合淋巴细胞反应(MLR)检测不同基因修饰的imDC的生物学活性。结果荧光显微镜观察显示pIRES2-EGFP—hFasL及pIRES2-EGFP-hTGF-β1质粒转染imDC后可见绿色荧光;ELISA检测共转染组和转化生长因子(TGF)组TGF-β1基因表达均高于mDC组、imDC组、空载体组及FasL组(P值均〈0.01),imDC组、空载体组及FasL组的TGF-β1基因表达均高于mDC组(P〈0.05)。hFasL基凶表达各组间的差异均无统计学意义(P值均〉0.05);经Westenblot检测hFasL及hTGF-β1基因转染组有均有相应蛋白表达(相对分子质量分别为31×10^3和43×10^3);流式细胞术显示表面分子CD86、CD80在mDC表达高于imDC及各基因转染组和空载体组;转染后混合淋巴细胞反应(MLR)显示,共染组T细胞的增殖反应均明显弱于TGF组和FasL组(P〈0.05)。结论联合FasL和TGF-β1基因转染的imDC存体外诱导同种异体免疫耐受的能力强于FasL或TGF-β1单基因转染。
邱明链
吴燕斌
陈丽红
方航荣
曾金华
刘景丰
关键词:
树突状细胞
FASL
转化生长因子-Β1
基因修饰
pIRES2-EGFP-hIL-10真核表达载体的构建及鉴定
2009年
目的构建带有报告基因EGFP的hIL-10真核表达载体。方法通过RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增出IL-10基因,构建IL-10基因和报告基因EGFP基因真核表达载体pIRES2-EGFP-hIL-10,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度。结果酶切、PCR及测序证实pIRES2-EGFP-hIL-10载体序列正确。结论成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hIL-10,可为后续器官移植免疫耐受的研究奠定基础。
陈丽红
刘景丰
方航荣
邱明链
关键词:
基因
IL-10基因
真核表达载体
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