转基因生物新品种培育专项(2011ZX08006-003)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张冬杰汪亮孙亚蒙张旭解宇更多>>
- 相关机构：东北农业大学黑龙江省农业科学院吉林大学更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪MSTN基因敲除载体的构建及细胞筛选被引量：3
- 2013年
- 构建猪肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因的打靶载体并获得敲除MSTN基因的猪胎儿成纤维细胞。以Puro为正筛选基因,白喉毒素-A(DT-A)为负筛选基因。将同源长臂和同源短臂分别插入Puro基因的两侧。同源长短臂分别为4 294bp和1 015bp,定点敲除MSTN基因的部分内含子2和部分外显子3。采用FugeneHD转染法将打靶载体转入37d的猪胎儿成纤维细胞中,转染后的细胞采用嘌呤霉素筛选。结果显示,成功构建了对猪MSTN基因部分区域进行敲除的打靶载体,共得到48个具有药物抗性的细胞克隆,经PCR检测,获得2个正确同源重组的细胞克隆。
- 高飞唐成程全龙泉戴祯苏佰通赖良学逄大欣欧阳红生
- 关键词：MSTN基因基因敲除打靶载体
- 卵泡抑素基因过表达对其通路上相关基因表达的影响被引量：4
- 2013年
- 为了探讨过表达卵泡抑素(follistatin,FST)基因对其通路上相关基因表达量的影响,本研究采用PCR方法扩增了民猪的FST基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Dsig-FST,对转染了重组质粒的成纤维细胞进行了鉴定,并采用实时荧光定量PCR检测通路上相关基因表达量的变化。结果表明,本研究成功克隆了民猪的FST基因,并在猪胎儿成纤维细胞中显著过表达,结果导致了ActRⅡB和BMP4基因显著下调(P<0.05),Smad4和Myostatin基因有下调趋势,ActRⅡA基因有上调趋势。由此可见,FST基因的表达变化对其通路上部分相关基因的表达有不同程度的抑制或促进作用。
- 孙亚蒙张冬杰张旭汪亮解宇刘娣
- 关键词：通路基因
- 猪卵泡抑素基因特异表达载体的构建及鉴定
- 2014年
- 采用RT-PCR方法扩增猪的FST基因完整编码区,采用双酶切和连接方法构建可在肌肉细胞中特异表达的真核载体,并转染C2C12细胞系进行验证。结果表明,猪FST基因全长1 032 bp,与网上已提交序列相似度为99.13%,成功构建可在肌肉细胞中特异表达的真核载体pEGFP-C1-α-actin-FST,转染C2C12细胞后,通过实时定量PCR检测,表明FST基因过表达可抑制MSTN基因表达。
- 刘娣尹雪张冬杰汪亮孙亚蒙张晓卉
- 关键词：实时定量PCR过表达
