广州市科技计划项目(2010Y1-C811)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学医药卫生更多>>
- 土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE的克隆与表达
- 2011年
- 目的克隆表达土曲霉洛伐他汀合成调控基因lovE,为研究lovE蛋白的生物学功能奠定基础。方法利用原核表达载体pET21b(+)构建lovE原核表达质粒,并在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达;亲和层析法纯化重组蛋白。结果构建了pET-lovE原核表达质粒,经原核表达和亲和层析获得6×His-lovE融合蛋白,蛋白纯度在90%以上。结论原核表达可获得lovE蛋白,为lovE蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
- 朱碧云黄欣刘宝意李浩明
- 关键词：土曲霉洛伐他汀调控基因
- 土曲霉与红曲霉双灭活原生质体融合选育洛伐他汀高产菌株被引量：4
- 2012年
- 研究原生质体融合技术选育洛伐他汀高产菌株的方法。土曲霉(Aspergillus terreus)和红曲霉(Monascus anka)用混合酶液(体积分数0.5%溶菌酶,0.3%纤维素酶,0.3%蜗牛酶)分别酶解5.0h和3.5h制备原生质体,土曲霉原生质体和红曲霉原生质体在紫外线(20 W,30cm)下分别照射5min和4min灭活,灭活后混合并用PEG(体积分数30%PEG,0.05mol/LCaCl2,0.05mol/L甘氨酸)介导融合。在187株融合子中筛选得到27株洛伐他汀产量高于红曲霉出发菌株的融合子,其中有7株的洛伐他汀产量是出发菌的2倍以上。双灭活原生质体融合方法成功选育出红曲霉洛伐他汀高产菌株。
- 李桂杭朱碧云李浩明
- 关键词：洛伐他汀红曲霉土曲霉原生质体融合
- 红曲霉丙酮酸脱羧酶基因克隆及酶学性质分析
- 2011年
- 目的:研究生物乙醇发酵关键酶丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)的性质和功能。方法:从SMART技术构建的红曲霉(Monascus anka CICC 5031)cDNA文库中筛选pdc基因,亚克隆到表达载体pET-21b(+),原核表达、亲和层析纯化重组PDC。分析重组PDC和野生型PDC的酶学性质。结果:pdc基因的开放阅读框长1 713bp,编码一个570个氨基酸残基的蛋白质。重组PDC在E.coli BL21(DE3)中的表达量为菌体总蛋白的32.7%。重组PDC与野生型PDC比活分别为20.2U/mg和30.1U/mg。二者的最适反应条件均为pH6.0、30℃。重组PDC和野生型PDC的Km值分别为2.6mmol/L和0.56mmol/L。结论:红曲霉pdc基因可在大肠杆菌中高效表达,重组PDC稳定性较好,可用作生物乙醇生产的候选资源。
- 朱碧云高蓝李浩明
- 关键词：红曲霉丙酮酸脱羧酶酶学性质生物乙醇
