国家科技支撑计划(2007BAD86B03)
- 作品数：4 被引量：60H指数：3
- 相关作者：田克恭王传彬胡鸿惠曹振肖燕更多>>
- 相关机构：中国动物疫病预防控制中心中国农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。
- 胡鸿惠曹振赵铁柱王斌秦亚嫚杨璐王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：NSP2单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用被引量：35
- 2008年
- 本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测?
- 韦天超田志军安同庆周艳君肖燕姜一峰郝晓芳张善瑞彭金美仇华吉童光志
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR病毒含量
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体的研制被引量：1
- 2009年
- 为制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株单克隆抗体,用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光试验(IFA)筛选,以有限稀释法克隆3次,制备单克隆抗体,并对制备的单克隆抗体进行鉴定。结果表明获得了2株分泌PRRSV膜基质蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1D12、5H5,经鉴定其抗体亚型分别为IgG2b、IgM,2株均为κ链,腹水ELISA效价分别为1∶107和1∶105。该单克隆抗体与PRV、PPV、PCV、CSFV、JEV无交叉反应。作者成功制备了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒NVDC-JXA1株膜基质蛋白单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。
- 王元胡鸿惠秦亚曼张倩邓小雨曹振王传彬冉多良田克恭
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体
- 猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立与应用被引量：20
- 2009年
- 参考GenBank中收录的猪伪狂犬病病毒gE基因序列,应用Primer5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为632 bp。进行PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性及符合性试验,建立了PRV的PCR检测方法。应用该方法对临床疑似发病样品进行了检测,PRV检出率为14.6%。表明该方法具有快速、特异、敏感、重复性好等优点,可用于PRV的临床发病诊断及流行病学监测等。
- 吴发兴郑辉亓传德高许雷张志刘爽张燕霞李晓成
- 关键词：猪伪狂犬病病毒GE基因聚合酶链式反应
