云南省自然科学基金(2003C0046M)
- 作品数：10 被引量：25H指数：3
- 相关作者：李莲军卢克焕黎宗强何志云李卫真更多>>
- 相关机构：广西大学云南农业大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- BRL饲细胞及血清浓度对体外小鼠精原干细胞的影响被引量：2
- 2004年
- 分别以大鼠肝细胞(BRL)或小鼠胚胎成纤维细胞(STO)为饲养层,采用含5%、10%及20%胎牛血清的培养液,培养6日龄小鼠生精上皮细胞,研究饲养层和血清浓度对精原干细胞生物学行为的影响。结果表明:在培养的第1周内,2个及4个连成串的精原细胞合胞体数量明显增加,同时大多数精原细胞逐渐退化。培养1周后,大多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失,培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中,不表现明显的分裂活动,呈圆球形,表达碱性磷酸酶。不同条件培养体系中的精原细胞及精原干细胞的生物学行为无明显不同,培养20～30d时均有少量精原干细胞存活。这说明BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活,但对其更新性增殖没有明显作用;培养液中高浓度胎牛血清对精原干细胞存活和增殖无明显影响,但能促进睾丸体细胞增殖。
- 李莲军卢晟盛黎宗强杨小淦韦英明卢克焕
- 关键词：精原干细胞胎牛血清体外培养
- 温度及BRL饲细胞对体外小鼠精原干细胞的影响被引量：12
- 2004年
- 将6日龄小鼠生精上皮单细胞分别接种于BRL和STO饲养层上,于32℃或37℃培养,研究其对精原干细胞的影响。结果:在培养的第1周内,2个及4个相连的精原细胞合胞体明显增多。培养1周后,多数精原细胞经短暂的存活及分裂活动后退化消失,培养体系中仅保留下少量单个及由细胞间桥相连的双个及4个成串或成团的A型精原细胞。这些细胞在随后的培养过程中,不表现明显的分裂活动,呈碱性磷酸酶阳性反应。根据精原干细胞生物学特性,它们极有可能就是精原干细胞及其子代细胞。不同条件培养体系中的精原干细胞的生物学行为无明显不同,培养60d时均仅有少量精原干细胞存活。结论:BRL细胞能用作饲养层促进精原干细胞存活,但对其更新性增殖没有明显作用;32～37℃对精原干细胞的生物学行为无明显影响,均可用于培养精原干细胞。
- 李莲军苗永旺程美玲李卫真卢克焕
- 关键词：精原干细胞温度体外培养小鼠
- 成年小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存被引量：2
- 2005年
- 采用含不同浓度抗冻剂二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、丙二醇(PG)及丙三醇(G)的DMEM培养基作为冻存液,对成年小鼠生精小管及完整睾丸进行慢速冷冻,液氮保存,37 ℃水浴复苏,并测定细胞复苏率。结果表明,成年小鼠生精小管在50 mL/L、100 mL/L 及150 mL/L DMSO冻存液中的细胞复苏率分别为92.6%、93.4%及69.4%,在50 mL/L、100 mL/L及150 mL/L PG 冻存液中的细胞复苏率分别为94.2%,93.3%及66. 9%,在50 mL/L、100 mL/L 及150mL/L EG 冻存液中的细胞复苏率分别为87.2%、91. 0%及62. 6%,在50 mL/L、100mL/L及150 mL/L G冻存液中的细胞复苏率分别为90.0%、90.5%及67.1%。各种抗冻剂的最高细胞复苏率之间差异不显著(P> 0. 05 )。成鼠完整睾丸在含100 mL/LDMSO、PG、EG或G的冻存液中的细胞复苏率分别为56.0%、50.0%、50.2%及50.2%。结果显示,DMSO、PG、EG 及G 均适宜用作成年小鼠生精小管的抗冻剂,最佳使用浓度均为50 mL/L^100 mL/L。完整睾丸冷冻后的细胞复苏率低于60%,仍需进一步研究。
- 李莲军何志云
- 关键词：冷冻保存抗冻剂生精小管睾丸小鼠
- 哺乳动物精原干细胞及其生物学特性被引量：5
- 2004年
- 根据目前较为公认的精原干细胞理论,主要论述了生精上皮中精原细胞的分类,精原干细胞的定义、起源、分布、识别及其生物学特性。
- 李莲军卢克焕
- 关键词：精原干细胞精原细胞生殖细胞哺乳动物生物学特性
- 水牛PGC和前精原细胞的体外培养
- 2007年
- 分别对取自50～95日龄水牛胎儿的原生殖细胞和前精原细胞进行体外培养，观察其生物学行为，并检测其碱性磷酸酶（AP）活性和Oct-4蛋白特性，探讨利用这些生殖细胞建立干细胞系的可行性和检测方法。结果表明：水牛原生殖细胞及前精原细胞分别在体外培养时，均能形成细胞克隆；克隆与周围细胞分界明显，但克隆中细胞相互间界限不清；部分克隆有分隔现象，形如多个克隆共同组成一个大克隆；细胞克隆均至少能培养4代以上；原生殖细胞和前精原细胞及其来源的细胞克隆均呈AP阴性和Oct-4蛋白阴性，其中部分克隆表现为AP假阳性。研究结果显示：水牛原生殖细胞和前精原细胞均可用于建立千细胞系；体外培养时，AP活性和Oct-4蛋白不适宜用来检测这些细胞及其来源的细胞克隆。
- 李莲军卢盛晟韦精卫梁兴伟卢克焕
- 关键词：生殖细胞水牛碱性磷酸酶
- 山羊雄性胎儿生殖细胞建立干细胞系初探
- 2007年
- 体外培养山羊50～68日龄雄性胎儿生殖细胞，并检测它们的碱性磷酸酶（AP）活性和Oct-4蛋白，探讨性别分化后的生殖细胞用于建立干细胞系的可行性及检测指标。当山羊胎儿睾丸细胞体外培养时，生殖细胞及其来源的细胞克隆均呈AP阴性和Oct-4蛋白阴性，其中有部分细胞克隆表现为AP假阳性。山羊胎儿生殖细胞克隆呈隆突状生长，多为圆形，与周围细胞界限分明，但克隆内细胞间界限不清。细胞克隆至少可以培养3代以上。研究结果显示，山羊雄性胎儿生殖细胞可以用于建立生殖系来源的干细胞系；AP和Oct-4蛋白不适宜用来检测体外培养的山羊胎儿生殖细胞及其来源的细胞系。
- 李莲军何志云苗永旺程美玲卢克焕
- 关键词：干细胞生殖细胞山羊碱性磷酸酶
- 用雄性新生仔猪生殖细胞建立干细胞系初探
- 2006年
- 体外培养雄性新生仔猪生殖细胞,并检测其碱性磷酸酶活性及O ct-4蛋白,探讨用雄性新生仔猪生殖细胞建立干细胞系的可行性及检测方法。结果表明,雄性新生仔猪生殖细胞在BRL细胞饲养层上培养2 d,大部分生殖细胞呈碱性磷酸酶阳性(AP+),而全部呈O ct-4蛋白阴性(O ct-4-);培养1周后,生殖细胞及细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞体外培养时出现2类细胞克隆,一类体积较小,数量众多,形成1周后又开始分化,仅能传至第2代;另一类细胞克隆的形态与猪原生殖细胞来源的胚胎生殖细胞(EGC)克隆相似,细胞克隆与周围细胞分界明显,而克隆中细胞相互间界限不清,这类细胞克隆易于分化,可以传至第3代;2类细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞可作为干细胞系的建系材料,AP和O ct-4蛋白均不适宜用来检测体外培养的雄性新生仔猪生殖细胞及其来源的细胞克隆。
- 李莲军韦精卫黎宗强卢盛晟卢克焕
- 关键词：干细胞生殖细胞碱性磷酸酶
- 七日龄小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存被引量：1
- 2005年
- 在DMEM培养液中添加10%小牛血清(NBS)及10%二甲基亚砜(DMSO)作为冻存液,慢速降温冷冻,液氮保存7日龄小鼠生精小管及完整睾丸,37℃水浴复苏,0 25%胰蛋白酶消化成单细胞,台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果:生精小管及完整睾丸冷冻复苏后细胞复苏率分别为87 3%及85 0%,两复苏率之间无显著差异,与生精小管单细胞对照组相比也无显著差异。冷冻损失率分别为10 1%及12 4%。结果表明,对于7日龄小鼠生精小管及完整睾丸,以10%DMSO为抗冻剂,慢速降温冷冻,液氮保存,37℃水浴复苏是一种适宜的冷冻保存方法。
- 李莲军李卫真尹革芬龚伟何志云
- 关键词：冷冻保存生精小管睾丸小鼠
- 精原细胞分化与凋亡的影响因素被引量：2
- 2005年
- 人们对哺乳动物精子发生过程已经有了相当多的了解,但对精子发生过程的调控机制仍然了解甚少。生殖激素及原癌基因和肿瘤抑制基因的表达产物对维持正常精子发生中各类细胞的存活、增殖和凋亡,以及各类细胞受损伤后的清除均具有十分重要的作用。本文论述了促卵泡激素、雌激素、雄激素、干细胞因子、Bcl-2家族蛋白及p5 3蛋白在原细胞的分化和凋亡中的作用。
- 李莲军卢克焕
- 关键词：精原细胞激素干细胞因子BCL-2家族蛋白P53蛋白
- 精原干细胞更新分化的影响因素被引量：3
- 2005年
- 精原干细胞可以体外培养、冷冻保存、遗传操作及移植,因而在医学、生物学及动物科学方面均有广泛应用前景。根据现有资料阐述一些因素,包括c Kit受体及其配体SCF、白血病抑制因子(LIF)、维生素A(VA)、表皮生长因子(EGF)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、激素和温度,对精原干细胞更新分化的影响。
- 李莲军卢晟盛黎宗强杨小淦卢克焕
- 关键词：精原干细胞干细胞因子白血病抑制因子VA表皮生长因子胶质细胞源神经营养因子
