内蒙古自治区自然科学基金(2010Zd11)
- 作品数：5 被引量：53H指数：4
- 相关作者：李金泉杜琛张文广付绍印郑竹清更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古医科大学附属医院学研究院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 白绒山羊PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对肌内脂肪细胞增殖分化的影响被引量：9
- 2016年
- 本研究以绒山羊肌内脂肪细胞为试验材料,通过靶向阻断过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ基因,建立稳定干扰的肌内脂肪细胞株,探讨绒山羊PPARγ基因在肌内脂肪细胞增殖和分化过程中的功能。采用慢病毒质粒包装系统构建特异靶向白绒山羊PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的肌内脂肪细胞株。利用实时定量和Western blot方法检测PPARγ基因在干扰组和对照组不同时间点的表达情况,并通过MTT和油红O染色法研究绒山羊PPARγ基因对肌内脂肪细胞增殖和分化的影响。经测序证实合成的含PPARγ-shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确,对肌内脂肪细胞的感染效率为80%以上,荧光定量和Western blot检测慢病毒介导的shRNA可以有效降低PPARγ的表达,其mRNA和蛋白水平作用的时间相隔24h。沉默PPARγ基因后,脂肪细胞内甘油三脂的浓度明显低于对照组,相反MTT检测干扰组中细胞增殖能力高于对照组。本研究构建了绒山羊shRNA-PPARγ慢病毒干扰载体,成功转染至肌内脂肪细胞后可明显抑制脂肪细胞的分化,而促进肌内脂肪细胞的增殖,为进一步研究PPARγ基因在绒山羊脂肪细胞代谢通路中的作用及脂肪沉积机制奠定基础。
- 杜琛李金泉陈秀娟
- 关键词：RNA干扰PPARΓ
- 绒山羊肌内脂肪细胞成熟前后比较转录组分析被引量：14
- 2014年
- 为了研究绒山羊肌内脂肪细胞在成熟前后差异表达的基因和主要信号转导通路,从而进一步筛选出与脂肪沉积相关的基因。本研究通过利用Illumina MiSeq对绒山羊肌内脂肪细胞在成熟前后转录组进行高通量测序,并用测序评估,基因功能注释,鉴定基因的可变剪接等生物信息学方法进行分析。组装后共获得93 930个contigs,N50为1 586nt,通过CLCGenomicsworkbench6软件找到差异基因78个(Fold Change>4,FDR<0.01)。这些差异基因基于GO功能注释可分为骨骼肌发育、胞外区、胰岛素样生长因子结合等46个分支,利用KEGG数据库作为参考,这些基因主要参与吞噬体、I型糖尿病、风湿性关节炎等通路中。本研究中分析绒山羊肌内脂肪细胞中4种主要可变剪接类型,为A3SS(Alternative 3′splice site)、A5SS(Alternative 5′splice site)、SE(Exon skipping)和RI((Intron retention),其中A3SS最为普遍。高通量RNA-seq提供了全部转录本信息,获得了在肌内脂肪细胞增殖分化过程中有重要功能的基因,其中上调基因在与胰岛素样生长因子结合和糖尿病的代谢通路中有着重要的作用,为人们进一步研究绒山羊脂肪沉积的功能基因组学及优化山羊肉品质奠定基础。
- 杜琛付绍印高鸿雁郑竹清孟宪然阿娜萨仁张文广李金泉
- 关键词：绒山羊可变剪接
- 绒山羊不同肌肉组织及肌内脂肪细胞的基因表达分析被引量：4
- 2016年
- 试验旨在研究脂肪沉积关键基因在内蒙古白绒山羊的表达规律,以期深入分析绒山羊肌内脂肪沉积特征。利用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ、FTO、Lipin、LPL、HSL、A-FABP和Perilipin 7个基因在绒山羊10个不同肌肉组织及肌内前体脂肪细胞分化的3个时期(早期(D3)、中期(D7)、末期(D11))、诱导分化关键时间点(24、48、72和96h)的变化,分别从组织和细胞角度对其进行分析,并研究其与肌内脂肪含量的关系。结果表明,FTO基因的表达水平高于其他基因;Lipin基因的表达量最低;LPL和HSL是脂肪合成和分解的关键酶类,其表达趋势大致相同,仅仅在腰大肌和斜方肌这两个部位的表达模式相反。A-FABP和Perilipin基因表达模式也较为特殊,整体表达量较低,前者仅仅在胸下矩肌中有较高表达,后者在股二头肌中有较高表达。从细胞水平分析发现Lipin、PPARγ、A-FABP和Perilipin的表达模式相似,随着前体脂肪细胞培养日龄的增加和甘油三酯的积聚,其表达量逐渐升高;Lipin基因在各个时间点的表达丰度极低;HSL基因的表达量随分化程度的升高而逐渐降低;Perilipin基因仅仅在诱导分化的后期有较高表达。相关性统计分析发现,PPARγ基因mRNA与肌内脂肪多呈负相关;而其他成脂基因HSL、LPL、FTO、Lipin、Perilipin、A-FABP mRNA与肌内脂肪含量多呈正相关。因此,脂肪沉积关键基因的表达具有特异性,总体上看基因表达量为FTO>PPARγ>LPL>HSL>A-FABP>Perilipin>Lipin,该结果为进一步研究脂肪沉积机制及优化山羊肉品质奠定基础。
- 杜琛李金泉陈秀娟
- 关键词：绒山羊肌内脂肪含量基因
- 基于RNA-Seq识别山羊肉品质候选基因被引量：13
- 2015年
- 通过研究不同年龄和不同性别绒山羊背最长肌之间的差异表达基因,筛选影响绒山羊肉品质的候选基因。本研究基于RNA-Seq技术对4个绒山羊背最长肌的转录组进行高通量测序,在测序评估的基础上,对差异表达基因进行筛选、功能注释和富集分析。本研究通过CLC Genomics Workbench 6.0软件共找到263个候选基因,其中包含123个高表达有利基因和140个高表达有害基因。GO功能注释结果显示,高表达有利基因主要与骨骼肌的生长发育、细胞器的形成和蛋白结合功能有关;高表达有害基因主要与脂质代谢、细胞骨架以及结合功能有关。利用KEGG数据库作为参考,这些基因主要参与糖酵解/糖异生、丝裂原活化蛋白激酶、凝血-补体级联反应和色氨酸代谢等通路中。结合其他家畜基因组学研究,ADIPOQ、PDK4和CD36可能作为参与肉品质重要的候选基因。该结果为绒山羊肉品质的改善以及候选基因的研究提供了理论依据。
- 孟宪然杜琛王静付绍印郑竹清张文广李金泉
- 关键词：绒山羊背最长肌肉品质RNA-SEQ候选基因
- 绒山羊肌内前体脂肪细胞的基因表达分析被引量：15
- 2013年
- 本研究建立了山羊肌内前体脂肪细胞的体外培养模式,以期深入研究山羊肌内脂肪组织发育和脂肪沉积过程中标志基因的表达情况。试验采集1日龄羔羊背最长肌,Ⅱ型胶原酶消化1.5h后依次通过80目、400目筛网过滤,离心,通过差速贴壁法得到增殖旺盛肌内前体脂肪细胞,观察其形态学变化,油红O染色检测细胞内脂肪含量。实时定量PCR法检测LPL、PPAR、FTO、LIPIN基因的表达量。结果表明:原代培养的细胞成分均一,贴壁生长呈短梭状或棱形,具有肌内前体脂肪细胞的形态特征。通过定量分析,FTO mRNA在早期就有较高表达,在分化5~7d达到最高水平,之后维持较高水平,11d表达量显著下降(P<0.05)。LIPIN mRNA在加入诱导剂后出现波动现象。PPARmRNA在整个细胞分化和增殖过程中维持一个较稳定的水平。LPLmRNA在分化早期高表达,随着分化程度的增加表达量逐渐降低。本研究成功建立了山羊肌内前体脂肪细胞原代培养方法,并在体外重现了增殖和分化的过程。基因表达量为FTO>LPL>PPAR>LIPIN,这可为进一步研究脂肪沉积机制及优化山羊肉品品质奠定基础。
- 杜琛付绍印韩志玲孟丽云爱伦高娃高丽霞成立新张文广李金泉
- 关键词：绒山羊细胞分化
