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国家自然科学基金(30400071)

作品数：18 被引量：39H指数：3
相关作者：王一飞张美英熊盛钱垂文刘秋英更多>>
相关机构：暨南大学暨南大学附属第一医院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 18篇期刊文章
  • 3篇会议论文

领域

  • 12篇医药卫生
  • 9篇生物学
  • 1篇化学工程

主题

  • 11篇细胞
  • 7篇基因
  • 6篇蛋白
  • 5篇激酶
  • 5篇核苷二磷酸
  • 5篇核苷二磷酸激...
  • 4篇中试
  • 4篇NM23-H...
  • 4篇纯化
  • 3篇蛋白酶
  • 3篇蛋白酶体
  • 3篇蛋白酶体抑制...
  • 3篇蛋白酶体抑制...
  • 3篇凋亡
  • 3篇抑制剂
  • 3篇制剂
  • 3篇细胞凋亡
  • 3篇工程菌
  • 3篇NM23-H...
  • 3篇K562细胞

机构

  • 21篇暨南大学
  • 1篇广东药学院
  • 1篇华南师范大学
  • 1篇暨南大学附属...
  • 1篇中国科学院上...
  • 1篇北京凯正生物...

作者

  • 15篇王一飞
  • 14篇张美英
  • 14篇熊盛
  • 12篇钱垂文
  • 7篇刘秋英
  • 4篇贾红玲
  • 3篇袁茵
  • 3篇孟薇
  • 3篇黄立
  • 2篇陈宇霞
  • 2篇赖新强
  • 2篇徐振
  • 2篇李丽萍
  • 2篇吴志聪
  • 2篇杨晓新
  • 2篇朱用阳
  • 1篇冉延超
  • 1篇何桂卫
  • 1篇晏光荣
  • 1篇黄文韬

传媒

  • 4篇中国卫生检验...
  • 2篇生物技术通报
  • 2篇中国药学杂志
  • 2篇生物工程学报
  • 2篇国际肿瘤学杂...
  • 1篇肿瘤防治研究
  • 1篇中国病理生理...
  • 1篇中华血液学杂...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇陕西师范大学...
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇2006年全...

年份

  • 1篇2010
  • 3篇2009
  • 1篇2008
  • 4篇2007
  • 8篇2006
  • 4篇2005
共 18 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
K562细胞nm23-H1基因沉默对其向巨核细胞分化的影响被引量：1
2008年
目的探讨nm23-H1沉默对K562细胞向巨核细胞分化的影响。方法采用Lipo-fectamine2000将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23及空质粒转染K562细胞，经G418筛选建立该基因稳定下调的K562细胞（K562-sinm23细胞）及空质粒转染K562细胞（K562-siNC细胞），实时定量PCR、免疫组织化学、蛋白印迹反应等方法证实了nm23基因沉默细胞构建成功。NBT还原比色试验检测细胞分化能力。流式细胞术检测在诱导剂佛波酯作用下K562-sinm23细胞表面巨核细胞分化抗原GPⅡb-Ⅲa（CD41）的表达。蛋白印迹法检测细胞在佛波酯诱导后ERK1／2磷酸化活性。结果与K562细胞和K562-siNC细胞比较，pSilencer^TM 4．1-CMV-sinm23能够沉默内源性nm23-H1 mRNA的表达，基因水平和蛋白水平的沉默效率分别达到75％和70％。经佛波酯诱导，与K562-siNC细胞比较K562-sinm细胞的分化能力明显增强（NBT还原能力A值分别为0．23±0．05和0．31±0．07）。nm23-H1基因调控K562细胞向巨核细胞分化与ERK1／2磷酸化活性增强有关。结论成功构建了nm23-H1基因稳定下调表达的K562细胞株，并且证明nm23-H1参与了K562细胞向巨核细胞系的分化。
金琳刘格张传海熊盛张美英刘秋英钱垂文王一飞
关键词：基因NM23-H1K562细胞细胞分化RNA干扰
蛋白酶体抑制剂MG132的浓度对人白血病细胞K562凋亡的影响被引量：2
2009年
探讨蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人白血病K562细胞凋亡过程中作用。分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562,通过MTT法检测K562细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测K562细胞凋亡率和细胞内活性氧(ROS)水平,应用酶标仪法检测K562细胞内Caspase-3活性变化的情况。结果表明,随着MG132浓度的增加,各个指标与对照组比较差异均有显著性(P<0.05):K562细胞增殖明显受到抑制;细胞凋亡率明显增加,且当MG132浓度为900 nmol/L时,细胞凋亡率达36.5%;同时,ROS水平和caspase-3活性明显升高。因次,蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制人白血病细胞K562增殖并促进其凋亡。
贾红玲朱用阳赖新强杨晓新周辉华
关键词：蛋白酶体抑制剂MG132细胞凋亡
含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达被引量：2
2006年
目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化E.coliM15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF]。MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF。结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%。复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性。结论:以E.coliM15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段。
熊盛陈宇霞钱垂文黄立张美英黄文韬王一飞
关键词：人表皮生长因子HELA细胞
核苷二磷酸激酶A的异构及机制研究
前言:核苷二磷酸激酶(NDPK)的研究历史可以追溯到50年前,作为一种管家酶,NDPK的首要功能是通过催化NDP和NTP之间的磷酸基转移反应来维持细胞内的NTP浓度。近年来的研究发现, NDPK可以调节细胞增殖、分化、发...
熊盛钱垂文王一飞黄立严玖凤王小宁张晓伟毕志刚
文献传递
蛋白酶体抑制剂MG132诱导K562和HeLa细胞凋亡程度存在明显差异被引量：1
2009年
蛋白酶体抑制剂MG132诱导人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa凋亡,用3个不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人白血病细胞K562和宫颈癌细胞HeLa,通过MTT检测、annexinⅤ/PI双染法、流式细胞术、酶标仪和Western印迹分别检测MG132对K562细胞和HeLa细胞的生长效应、细胞凋亡率、细胞内活性氧(ROS)水平和caspase-3活性变化的影响.蛋白酶体抑制剂MG132诱导K562细胞凋亡明显,对HeLa细胞诱导凋亡不明显.结果表明,蛋白酶体抑制剂MG132特异性诱导不同肿瘤细胞凋亡的程度存在明显差异.
贾红玲赖新强杨晓新李丽萍徐振何桂卫
关键词：蛋白酶体抑制剂MG132K562细胞HELA细胞细胞凋亡
人胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞间酪氨酸磷酸化的比较蛋白质组学研究被引量：3
2009年
比较人正常胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901间酪氨酸磷酸化蛋白质的差异,筛选差异磷酸化蛋白质分子,为揭示胃癌发生发展的分子机制提供新的理论依据。采用免疫沉淀方法从人胃黏膜上皮细胞GES-1与人胃癌细胞SGC-7901总蛋白质中免疫沉淀出酪氨酸磷酸化蛋白质,用SDS-PAGE和二维凝胶电泳技术分离沉淀出的酪氨酸磷酸化蛋白质,银染,差异蛋白点进行胶内酶解,采用MALDI-TOF/TOF-MS质谱进行差异蛋白质鉴定。结果显示获得了7个差异酪氨酸磷酸化蛋白质,这些蛋白质涉及细胞骨架、细胞调控等。通过比较正常胃黏膜上皮细胞与胃癌细胞内酪氨酸磷酸化蛋白质的差异,筛选获得7个差异酪氨酸磷酸化蛋白质分子,有助于深入研究胃癌发生发展的分子机制,进而为胃癌的早期诊断和防治提供新的理论依据和作用靶标。
贾红玲朱用阳晏光荣徐振孙黎
关键词：胃癌酪氨酸磷酸化蛋白质组学
nm23-H1过表达对人白血病细胞系HL60细胞周期和分化的影响被引量：1
2007年
目的探讨nm23-H1基因过表达对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞周期及分化的影响。方法构建nm23-H1cDNA的真核表达载体pEGFP-N1-nm23H1,脂质体介导瞬时转染HL60细胞;在荧光显微镜下观察nm23-H1-EGFP融合蛋白的表达情况;流式细胞术分析细胞周期变化;NBT还原比色法检测细胞的诱导分化能力。结果转染48hnm23-H1-EGFP融合蛋白在HL60细胞内表达量最高,此时细胞周期处于S期的细胞明显增多,对分化诱导剂DMSO的敏感性下降。结论nm23-H1基因的过表达能促进HL60细胞的增殖和抑制其分化。
袁茵鲁欣张美英黄树林王一飞
关键词：NM23-H1基因白血病细胞周期
TAT-NDPK-A蛋白的构建表达及穿膜初步研究被引量：2
2007年
目的构建pET-TAT-nm23-H1质粒,表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT-nucleoside diphosphate kinase A,TAT-NDPK-A)融合蛋白,并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞。方法人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK-A引物的上游,PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上,经IPTG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT-NDPK-A蛋白,Westen-blot鉴定分析重组蛋白的抗原性,将TAT-NDPK-A蛋白加入到A549细胞中,荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内。结果TAT序列与NDPK-A正确融合并插入pET28(a)载体上,经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT-NDPK-A蛋白,在培养的A549细胞中加入重组蛋白4 h后在细胞内检测到穿膜的蛋白。结论构建表达TAT-NDPK-A蛋白,TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内,为进一步研究基因的功能奠定了基础。
刘秋英王一飞熊盛张美英钱垂文何旭君
关键词：TAT融合蛋白
pQE-hbFGF表达系统的构建及其蛋白质的表达和纯化
2005年
目的　构建pQE hishbFGF表达载体 ,通过一步纯化得到 6×HishbFGF蛋白质。方法　用PCR扩增目的基因hbFGF ,连接到pQE4 0载体上 ,转化到Top10菌株筛选重组子 ,经测序后将质粒转化到表达菌M15上 ,经IPTG诱导表达 ,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得 6×HishbFGF蛋白质 ,ELISA鉴定产物 ,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性。结果　hbFGF基因插入pQE载体中 ,在M15中 6×HishbFGF的表达量达到 2 0 % ,且为可溶性表达。经一步纯化后得到N端带 6个组氨酸的hbFGF蛋白 ,纯度为 96 % ,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性。结论　 6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达 ,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物 ,降低了生产成本 。
刘秋英王一飞熊盛胡红梅钱垂文张美英冉延超袁茵吴志聪
关键词：人碱性成纤维细胞生长因子可溶性表达
50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌
规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A).摇瓶培养一级种子至OD600为5.0～5.5，以10％比例接种二级种子培养基，在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5，然后转入80L发酵罐中进行补料分批培养，...
熊盛钱垂文黄立刘秋英张美英王一飞
关键词：核苷二磷酸激酶DNA重组中试规模发酵条件
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