浙江省自然科学基金(Y2080596)
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- sCD14在内毒素诱导巨噬细胞活化中的调节机制被引量：1
- 2010年
- 目的 观察不同浓度的sCD14和脂多糖（LPS）经过孵育和不孵育同时刺激佛波醇酯（PMA）诱导分化的THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,以研究sCD14在LPS转运和活化过程中的重要调节作用.方法 通过细胞培养,实验细胞为PMA诱导分化的THP-1细胞;同时将实验分为sCD14组（终浓度分别为1、0.5、0.1、0.01μg/ml）、sCD14～LPS混合物预孵育组（LPS终浓度分别为10、1ng/ml;sCD14终浓度为分别1、0.5、0.1、0.01μg/m1）、sCD14-LPS不孵育组（LPS终浓度分别为10、1ng/ml;sCD14终浓度为1、0.5、0.1、0.01μg/ml）,并分别培养4h后,吸出上清液至1.5ml的离心管中,于-70℃内保存并采用化学发光法检测TNF-α.结果 sCD14本身不能刺激单核细胞分泌TNF-α;LPS浓度为1ng/ml、sCD14浓度为0.01μg/ml和0.1μg/ml时,与LPS单独刺激TNF-α分泌量的差异均无统计学意义（均P＞0.05）;sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时,TNF-α分泌量的差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）.在LPS浓度为10ng/ml、sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时,与LPS单独作用TNF-α分泌量均有显著性差异（均P＜0.01）.sCD14/LPS混合物预孵育组曲线低平,无明显分泌高峰.结论 适当浓度的sCD14可明显增强LPS对单核巨噬细胞的活化作用,且在LPS高浓度时尤为明显,而将sCD14和LPS混合孵育可使上述效应减少甚至消失.
- 舒旷怡杨锦红任凭杨爱平余玲玲李向阳
- 脂多糖结合蛋白和可溶性CD14对小鼠体内脂多糖结合作用的研究被引量：4
- 2013年
- 目的研究血清中脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP),可溶性CD14(soluble CD14,sCD14)对小鼠体内脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)结合作用的影响。方法 ICR小鼠分组,共5组,分别注射蛋白终浓度均为100ng/ml的LPS与LBP、LPS与sCD14的混合液作为实验组,以及分别单独注射LPS、LBP、sCD14液作为对照组,30min后检测小鼠血清LPS浓度。结果第2组LBP组和第4组sCD14组的LPS检测浓度明显低于第1组、第3组和第5组的结果(P<0.01),第3组LPS与LBP混合组的LPS浓度明显高于第1组LPS组结果(P<0.01)。第5组LPS和sCD14混合组的LPS浓度高于第1组LPS组结果(P<0.05),第3组LPS和LBP混合组的LPS浓度明显高于第5组LPS和sCD14混合组(P<0.01)。结论 100ng/ml外源性LBP比sCD14能更好地结合小鼠体内LPS,减轻了LPS对机体的损害。
- 戎红辉舒旷怡郝振华林玲李向阳
- 关键词：脂多糖脂多糖结合蛋白可溶性CD14ICR小鼠
- 脂蛋白在脂多糖诱导THP-1细胞活化中的调节机制被引量：1
- 2010年
- 目的 研究血清脂蛋白对脂多糖的影响机制,并对不同种类脂蛋白：高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）,抑制脂多糖的能力进行比较,为研究脂蛋白在治疗败血症中的应用提供理论基础.方法 通过检测经佛波醇酯刺激分化的THP-1细胞分泌的TNF-α间接反映脂蛋白对脂多糖的抑制作用.将不同浓度脂多糖与THP-1细胞在血清基质中混合孵育4 h,并与3种脂蛋白-脂多糖混合液与THP-1细胞混合孵育后TNF-α的分泌量进行对比,计算脂蛋白对脂多糖的抑制情况.结果 HDL、LDL和VLDL单独不能诱导分化的THP-1细胞分泌TNF-α（P＞0.05）.当10 ng/mL脂多糖与0.05 mg/m以上浓度的脂蛋白（HDL、LDL和VLDL）混合时,TNF-α分泌量明显降低.当脂多糖浓度为100 ng/mL时,0.1 mg/mL的脂蛋白（HDL、LDL和VLDL）对其抑制效果较低,分别为（20.7±11.1）%、（8.9±2.8）%、（4.3±1.6）%;在脂多糖浓度为10 ng/mL抑制效果明显增强,抑制率分别为（69.3±3.7）%、（42.9±5.7）%、（42.7±4.5）%.HDL对各浓度脂多糖的抑制效果均强于LDL和VLDL（P＜0.05）.结论 脂蛋白在血清中能抑制脂多糖活化巨噬细胞分泌细胞因子,但抑制效果在脂多糖浓度高时相比浓度低时差.HDL对脂多糖活化巨噬细胞的抑制作用比LDL和VLDL强.
- 舒旷怡李方去杨锦红杨爱平陶洪群陈慧李向阳
- 关键词：脂多糖类脂蛋白肿瘤坏死因子-Α
- LBP、sCD14与LPS相互作用对巨噬细胞释放TNF-α的影响被引量：7
- 2011年
- 目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)、可溶性CD14(sCD14)与脂多糖(LPS)相互作用后对巨噬细胞产生TNF-α的影响。方法用PMA诱导THP-1细胞为巨噬细胞;设定LPS浓度为1ng/ml,以100、10、1、0.1、0.01的比例,将LBP-LPS混合37℃孵育15min后分别加入细胞培养板中;以及混合后不孵育直接加入;同时设立LBP对照组。在LPS浓度为10ng/ml和1ng/ml两组中,分别加入1、0.5、0.1、0.01μg/ml的sCD14,混合37℃孵育15min后分别加入两组细胞培养板中;以及混合后不孵育直接加入;同时设立sCD14对照组。用免疫化学发光法检测TNF-α的释放情况。最后对数据进行统计学分析。结果 LPS浓度为1ng/ml分泌TNF-α最低(143±9pg/ml),与10、100、1000ng/ml间比较有统计学差异,P均<0.05;10、100、1000ng/ml三组间无统计学差异(P>0.05);TNF-α的释放量随着LPS的浓度增高会出现饱和现象。浓度为0.01、0.1、1、10、100ng/ml的LBP刺激巨噬细胞TNF-α的释放量分别为39.4±1.2、107±5、109±3、102±1、119±9pg/ml。LBP/LPS浓度比值≤10时,TNF-α释放量随LBP/LPS浓度比值增大而增高,在LBP/LPS浓度比值为10时释放量最高;未孵育组结果为231±10pg/ml,预孵育组结果为164±7pg/ml;两组TNF-α释放量有显著性差异(P<0.01)。在LBP/LPS比值为100时,TNF-α释放量下降;未孵育组结果为149±7pg/ml,预孵育组结果为138±2pg/ml。LPS浓度为0时,随着sCD14浓度增加,THP-1细胞释放TNF-α未见增加。LPS浓度为1ng/ml,sCD14浓度为0.01μg/ml和0.1μg/ml时,TNF-α释放量无显著性差异(P=0.515和0.566);sCD14浓度为0.5和1μg/ml,结果有显著性差异(P=0.017和P<0.01)。在LPS浓度为10ng/ml,sCD14浓度为0.5μg/ml和1μg/ml时TNF-α释放量结果均有显著性差异(P<0.01)。未预孵育组与预孵育组TNF-α的释放量结果有显著性差异(P=0.014)。结论 LBP能活化巨噬细胞,低浓度LBP可促进LPS刺激巨噬细胞释放TNF-α,且释放量随LBP浓度的增加而增加;高浓度LBP对LPS刺激巨噬细胞�
- 张颖舒旷怡王金文赵飞刘洋李向阳
- 关键词：LBPSCD14TNF-Α
- 乙酰胆碱受体阻断剂对脂多糖活化THP-1细胞作用的影响
- 2013年
- 目的观察乙酰胆碱受体阻断剂对脂多糖活化人单核细胞白血病细胞THP-1分泌细胞因子的影响,探讨乙酰胆碱通路在脓毒症中作用。方法通过细胞培养,实验细胞为THP-1细胞,分别加入不同浓度银环蛇毒素培养24h后,每孔加入100ng/ml脂多糖,同时做空白对照,CO2孵箱孵育6h,离心取上清液,检测TNF-α和IL-6,结果采用SPSS 17.0进行分析。结果 THP-1呈悬浮生长,使用不同浓度的银环蛇毒单独与THP-1细胞孵育24h后,检测上清TNF-α和IL-6分泌,比较是否加银环蛇毒两组间,P分别为0.71和0.32,结果无显著性差异。加入不同浓度银环蛇毒与THP-1细胞预孵育后,再使用LPS刺激6h,在银环蛇毒浓度为10μmol/L时,TNF-α和IL-6分泌大大增加。结论银环蛇毒单独不能明显刺激THP-1细胞分泌TNF-α和IL-6,银环蛇毒对THP-1细胞Ach受体封闭存在一个剂量效应。
- 舒旷怡戎红辉李方去杨锦红李向阳
- 关键词：乙酰胆碱受体
- LBP对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的调节作用被引量：7
- 2010年
- 目的采用脂多糖结合蛋白(LBP)和脂多糖(LPS)以不同比例、不同方式刺激THP-1细胞分泌细胞因子,探讨LBP在LPS转运和活化过程中的调节作用,以及单核巨噬细胞受LPS活化后其炎性和负炎性因子分泌的平衡情况。方法将THP-1细胞进行增殖和传代后,经PMA刺激,转化为巨噬细胞。实验分为4个组:LPS组(用不同浓度LPS单独刺激)、LBP组(用不同浓度LBP单独刺激)、LBP/LPS预孵育组(LBP和LPS以不同浓度比例混合,37℃孵育15min)、LBP/LPS不孵育组(先加一定浓度LPS,再以不同浓度比例加入LBP)。分别培养4、12、24h后,吸出上清液,发光法检测TNF-α,IL-10和IL-6水平,并进行统计学分析。结果 THP-1细胞为悬浮生长,用PMA诱导转化后变为巨噬细胞,变为贴壁生长。分别用1、10、100、1000ng/mlLPS单独刺激巨噬细胞分泌TNF-α,1ng/ml和其他组间均有统计学差异(P<0.05),其余3组间无统计学差异(P>0.05)。用LBP刺激巨噬细胞,LBP浓度为1000ng/ml时,TNF-α和IL-6分泌达到最高。LBP/LPS不孵育组中,TNF-α和IL-6分泌曲线在LBP/LPS为10出现最高峰。LBP/LPS预孵育组的TNF-α和IL-6分泌曲线较平缓,无明显分泌高峰。LPS浓度为1000ng/ml时IL-10为8±0pg/ml,其余组IL-10均小于5pg/ml。经析因分析,LPS和LBP之间有交互关系(F=3.425,P<0.01),两者是否预孵育和培养时间有交互作用(F=4.240,P=0.026),LBP浓度和是否预孵育之间有交互作用(F=4.896,P<0.01)。LPS浓度和是否预孵育,LPS浓度和培养时间,LBP浓度和培养时间均无明显交互作用(P>0.05)。结论 LPS是活化单核巨噬细胞的重要物质,LPS在高浓度时刺激巨噬细胞分泌细胞因子具有饱和现象。LBP本身在高浓度时具有刺激巨噬细胞的活性,低浓度的LBP能增强LPS对巨噬细胞的活化,高浓度LBP则起到负性调节作用。体外单核细胞经PMA分化成巨噬细胞后,再用LPS刺激,IL-10无明显分泌,引起炎性和负炎性因子的严重失衡。
- 舒旷怡张颖杨锦红任凭杨爱平余玲玲李向阳
- 关键词：脂多糖类脂多糖结合蛋白白细胞介素-10
- BPI在不同水平的内毒素下对诱导单核细胞活化的调节作用
- 2010年
- 目的探讨杀菌/渗透增强蛋白(BPI)在内毒素血症中对脂多糖(LPS)体内转运以及对单核巨噬细胞活化过程的调节作用。方法本实验通过BPI单独及与LBP共同作用于单核巨噬细胞,检测细胞因子TNF-α的分泌情况。结果 BPI本身能引起单核巨噬细胞分泌少量TNF-α,但TNF-α分泌量与BPI浓度无关(F=0.590,P=0.584)。BPI在LBP存在情况下抑制作用更明显。2ng/ml BPI和LBP混合即可以完全抑制1ng/ml LPS作用。结论 BPI能抑制LPS作用,但与BPI作用浓度无明显关系;LBP对BPI抑制LPS起协同作用。
- 任凭舒旷怡李向阳
- 关键词：脂多糖肿瘤坏死因子-Α脂多糖结合蛋白
- 内毒素血症中脂多糖相关蛋白的混合调节机制
- 2011年
- 目的:研究内毒素血症发生时多种脂多糖(LPS)相关蛋白在LPS转运及活化中的调节作用。方法:培养佛波醇酯(PMA)诱导分化的THP-1细胞。选取LPS、脂多糖结合蛋白(LBP)、可溶性CD14(sCD14)、杀菌/渗透增强蛋白(BPI)、高密度脂蛋白(HDL)5因素2水平采用L16(215)正交设计。配制实验体系,培养4 h后,留取上清液,发光法检测TNF-α分泌量。结果:混合体系中,BPI和HDL存在负向效应,LBP、LPS和sCD14存在正向调节效应。TNF-α分泌量与sCD14、BPI的单独主效应有关(P<0.05),并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP的交互作用有关(P<0.05)。结论:在体内多种相关蛋白同时存在时,LPS对单核巨噬细胞的活化与sCD14、BPI的单独效应有关,并与LBP和sCD14、LBP和HDL、LPS和LBP交互作用有关。
- 舒旷怡李方去杨锦红杨爱平陈慧陶洪群李向阳
- 关键词：脂多糖类内毒素血症
