国家自然科学基金(30470765)
- 作品数：10 被引量：45H指数：4
- 相关作者：李智滕赞封瑞承伟王嫘更多>>
- 相关机构：中国医科大学辽宁医学院中国医科大学附属第一医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 钌红、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca^(2＋)]i释放功能的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞雷诺定(Ryanodine)受体[Ca2+]i释放功能的改变及钌红(Rutheniumred)、丁卡因对肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i释放功能的影响。方法:清洁级Wister大白鼠25只,腹腔注射野百合碱,建立大鼠肺动脉高压模型,死亡2只,最终23只;原代培养肺动脉平滑肌细胞;Fura-2/AM(钙离子荧光指示剂)负载培养细胞;荧光测钙技术比较雷诺定诱导的野百合碱组(n=15)及对照组(n=8)[Ca2+]i数值,观测钌红、丁卡因对雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i变化的影响。结果:10 nmol/L雷诺定使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol/L,使野百合碱组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol/L;两组样本[Ca2+]i增加的数值比较差异有统计学意义(P<0.01)。钌红浓度为0.5～10μmol/L、丁卡因浓度为2～40μmol/L时,可使雷诺定受体激动剂雷诺定诱导的[Ca2+]i值最大下降(115.32±7.47)nmol/L和(107.97±7.11)nmol/L。结论:肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞对雷诺定受体激动剂雷诺定的敏感性增强;钌红、丁卡因对雷诺定诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i上升有明显的抑制作用。
- 承伟李智
- 关键词：肺动脉高压细胞内钙
- 肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌上calponin和TGFβ1的变化被引量：10
- 2007年
- 曹禹李智封瑞
- 关键词：调宁蛋白转化生长因子Β1肺动脉高压
- 滨蒿内酯抑制组胺诱导的哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放被引量：1
- 2011年
- 目的研究滨蒿内酯(scoparone,Sco)剂量依赖性舒张气管平滑肌及降低气道高反应性的可能作用靶点及途径,为进一步将其开发成为平喘的中药新药提供药理学理论依据。方法建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,通过离体豚鼠气管环的舒缩实验及应用倒置荧光显微成像系统测定培养的ASMCs[Ca2+]i浓度的方法,分析Sco预先给药及直接作用对ASMCs[Ca2+]i的影响。结果显示无论细胞外含钙或无钙,组胺具有收缩ASM环及升高培养的ASMC[Ca2+]i作用,哮喘组明显高于对照组(P<0.05),预先给予Sco组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);在细胞外无钙时10-4M Sco直接作用培养的ASMCs,可明显抑制各浓度组胺诱导的ASMCs[Ca2+]i的上升(P<0.05)。结论预先给予Sco及直接作用都可不同程度改善哮喘豚鼠ASMCs对不同浓度组胺的高反应性,这可能与Sco抑制哮喘豚鼠ASMCs IP3介导的内钙释放途径有关。
- 滕赞王嫘李智
- 关键词：滨蒿内酯哮喘组胺IP3
- 野百合碱对培养的肺动脉内皮细胞NO含量、eNOS蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩性的影响被引量：4
- 2007年
- 目的研究野百合碱(monocrotaline pyrrole,MCTP)对培养的牛肺动脉内皮细胞(calf pulmonary artery endothelial cells,CPAEs)一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及肺动脉平滑肌细胞收缩的影响。方法采用荧光共聚焦激光显微镜检测培养的牛肺动脉内皮细胞的NO含量;Western blot检测eNOS蛋白表达;胶原凝胶实验分析肺动脉平滑肌细胞收缩性。结果经野百合碱处理的牛肺动脉内皮细胞NO含量和eNOS蛋白表达较对照组明显减少、肺动脉平滑肌细胞收缩性增强。结论MCTP可抑制eNOS蛋白表达,肺动脉内皮细胞NO产生受到抑制,使肺动脉平滑肌细胞收缩性增强,这些改变与肺动脉高压的形成可能存在一定关系。
- 承伟马洪林王佩琦赵文明李智
- 关键词：野百合碱内皮细胞平滑肌细胞
- 哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放通道的变化被引量：11
- 2007年
- 目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMCs外无钙情况下,不同浓度ryanodine(5×10-5,10-4,2×10-4mol·L-1)作用于原代培养正常与哮喘ASMCs,[Ca2+]i迅速升高,哮喘组明显高于正常组(P<0·01)。10-4mol·L-1的组织胺(hista-mine)作用于原代培养的正常组与哮喘组ASMCs,[Ca2+]i升高无差异(P>0·05)。②传代培养哮喘ASMCs在10-4、2×10-4mol·L-1ryanodine作用下,[Ca2+]i迅速升高,与原代细胞比较无差异(P>0·05)。在浓度为5×10-5mol·L-1时,原代明显高于传代(P<0.01)。哮喘组传代ASMCs对10-4mol·L-1的histamine反应不明显。结论哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道(RyRs)功能升高,特定条件下,哮喘传代细胞仍然保持原代细胞内钙释放通道的特性。
- 封瑞李智滕赞曹禹
- 关键词：哮喘钙离子
- 滨蒿内酯对豚鼠肥大细胞释放组胺、类胰蛋白酶及细胞内钙的影响被引量：3
- 2012年
- 目的滨蒿内酯(Soparone,Sco.)通过松弛气道平滑肌、清除气道氧自由基、抑制气道炎症等多种途径起到抗炎平喘作用,该实验基于前期所做的研究工作,进一步探讨了Sco对肥大细胞(mast cells,MCs)脱颗粒及其炎症介质的释放作用的影响及可能的调控途径。方法不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7mol/L)分别作用于正常及致敏MCs,并设立正常及致敏MCs的溶剂对照组(control,asthma),比较各组MCs脱颗粒百分数、类胰蛋白酶活力、组胺释放率及MCs细胞内钙([Ca2+])i的变化。结果 1×10-5和1×10-6mol/L Sco.组MCs脱颗粒百分数分别为(39.10±2.81)%和(11.40±2.37)%,明显低于asthma组的(78.90±4.12)%(P<0.05),且以上Sco.组MCs的组胺和类胰蛋白酶释放亦较asthma组显著减少(P<0.05);在无细胞外钙条件下,不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7mol/L)对正常MCs[Ca2+]i的影响分别为(-12.1±2.2)%、(-6.1±2.4)%和(-2.1±0.7)%,对致敏MCs[Ca2+]i的影响分别为(-75.6±2.2)%、(-33.9±2.5)%和(-4.0±0.02)%,相同浓度Sco.对正常组和致敏组MCs[Ca2+]i的降低作用的组间差异有显著性(P<0.05)。结论 Sco.可剂量依赖性抑制豚鼠MCs脱颗粒从而抑制MCs组胺及类胰蛋白酶的释放;Sco.能够抑制豚鼠正常MCs以及致敏MCs[Ca2+]i水平。
- 滕赞姜晖王嫘李智
- 关键词：肥大细胞脱颗粒组胺类胰蛋白酶细胞内钙
- 肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞内钙的改变被引量：4
- 2010年
- 目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞Ryanod-ine受体[Ca2+]i释放功能的改变。方法腹腔注射野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,原代培养肺动脉平滑肌细胞,Fura-2/AM负载培养细胞,荧光测钙技术测量Ryanodine受体激动剂对[Ca2+]i变化的影响。结果10nmol.L-1Ry-anodine使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol.L-1,使PAH组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol.L-1。两组样本[Ca2+]i增加的数值差异有显著性(P<0.01);10mmol.L-1Caffine使对照组[Ca2+]i平均增加(149.02±13.02)nmol.L-1,使PAH大鼠PASMC的[Ca2+]i平均增加(191.2±21.26)nmol.L-1,两组样本[Ca2+]i数值的变化差异有显著性(P<0.01)。结论肺动脉高压大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞对Ryanodine受体激动剂的敏感性增强,提示肺动脉高压时Ryanodine受体释放[Ca2+]i的功能发生了异常改变。
- 承伟李智
- 关键词：肺动脉高压RYANODINE受体肺动脉平滑肌细胞细胞内钙激动剂
- 肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌RyR结合特性及基因C-末端序列的研究被引量：4
- 2008年
- 目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌Ryanodine受体(ryanodine receptor,RyR)的结合功能改变及基因序列的变化。方法梯度离心法提取肺动脉平滑肌肌浆网膜蛋白组分,放射配基结合方法测定平衡解离常数(Kd)、最大结合容量(Bmax)的变化;体外提取肺动脉平滑肌细胞总RNA,反转录合成RyR2cDNA,以cDNA为模板使用特异性引物对目的片段进行PCR扩增,切胶回收后Sanger双脱氧末端终止法测定序列。结果野百合碱(monocrotaline,MCT)所致肺动脉高压组RyR最大结合容量(Bmax)为(197±21.4)nmol.g-1protein,较对照组(168±13.7)nmol·g-1protein明显增加(P<0.01);平衡解离常数(Kd)为(0.276±0.026)nmol·L-1与对照组(0.282±0.031)nmol·L-1相比差异无显著性(P>0.05);野百合组RyR2C-末端基因序列与对照组无差异。结论MCT所致肺动脉高压大鼠RyR最大结合容量(Bmax)增加,提示受体的数量发生了上调;Kd无明显变化,说明与受体的亲和力无改变。MCT所致肺动脉高压大鼠2型RyR(RyR2)C-末端基因序列无变化。
- 承伟叶兆伟王佩琪赵文明张壮李智
- 关键词：肺动脉高压RYANODINE受体肌浆网放射配基
- 滨蒿内酯对原代和传代培养豚鼠气道平滑肌细胞内钙的影响被引量：9
- 2009年
- 目的探讨滨蒿内酯(scoparone,Scop)对原代及短期传代培养的豚鼠气道平滑肌细胞(airway smooth musclecells,ASMCs)内钙的影响,同时,比较原代与传代ASMCs在形态、生长曲线及内钙释放受Scop及caffeine影响的异同。方法细胞计数法绘制原代及传代培养ASMCs的生长曲线,应用Fluo-3/AM为细胞内Ca2+示踪剂,通过倒置荧光纤维镜观察和记录原代及短期传代培养的ASMCs的细胞形态及其细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果原代和传代培养ASMCs的倍增时间分别为(31.89±1.24)h和(22.91±6.82)h,传代培养ASMCs的倍增时间明显缩短(P<0.05),传代培养的ASMCs相对原代培养ASMCs体积增大。在细胞外液无钙条件下,不同浓度的Scop(10-6、10-5、10-4mol.L-1)可降低静息状态下培养的ASMCs的[Ca2+]i,并与给药浓度有关,原代与传代培养的ASMCs比较,对不同浓度的Scop的降钙反应无明显异同(P>0.05);不同浓度咖啡因(caffeine,10-4、10-3、10-2mol.L-1)在10-4mol.L-1Scop存在下,可升高ASMCs的[Ca2+]i,传代培养的ASMCs[Ca2+]i较原代对caffeine的反应下降(P<0.01)。结论Scop可降低培养的ASMCs的[Ca2+]i,并且不受细胞传代影响。短期传代培养的ASMCs相对于原代细胞,形态及内钙释放通道特性发生了改变。
- 滕赞封瑞魏文娟赵金生于秀华王嫘李智
- 关键词：滨蒿内酯气道平滑肌细胞内钙
- 兰尼碱受体mRNA在哮喘豚鼠气道平滑肌细胞中表达的改变被引量：3
- 2007年
- 目的明确兰尼碱受体(RyR)与哮喘发病的关系,为哮喘的防治提供一条新的途径。方法以酶消化法分离培养正常与哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),应用RT-PCR方法测定每组细胞RyR各亚型RyR1,RyR2和RyR3的mRNA表达。结果正常与哮喘豚鼠ASMCs中,RyR1和RyR2的mRNA均见表达,未见RyR3mRNA的表达,并以表达RyR2mRNA为主。哮喘时,RyR1和RyR2的mRNA相对吸光度值分别为0.43±0.05和1.5±0.6,明显高于正常组RyR1mRNA的吸光度值0.34±0.03(n=6,P<0.01)。结论RyR1mRNA表达上调可能与哮喘发病相关。
- 封瑞滕赞赵美眯郝丽英李智
- 关键词：哮喘受体气道
