国际科技合作重点项目计划(2003DF000034)
- 作品数：6 被引量：30H指数：3
- 相关作者：罗小平宁琴习东刘祖黎卢强华更多>>
- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国际科技合作重点项目计划武汉市科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 金纳米颗粒基因探针同步检测HBV和HCV的初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种简单、快速同时检测HBV DNA和HCV RNA的诊断方法。方法利用PCR方法扩增HBsAg阳性合并抗HCV阳性的患者血清中HBV DNA和HCV cDNA并提取。制备Au纳米颗粒HBV DNA、HCV cDNA基因探针。在含有Au纳米颗粒HBV DNA、HCV cDNA基因探针的液相检测体系中加入HBV DNA和(或)HCV cDNA,透射电镜下观察。结果PCR可扩增HBV DNA和HCV cDNA,出现预期的431bp和323bp特异性条带。使用Au纳米颗粒基因探针通过透射电镜可同步检出乙、丙型肝炎合并感染患者血清中提取的HBV DNA和HCV RNA。结论通过透射电镜,使用Au纳米颗粒基因探针可同步检出乙、丙型肝炎合并感染患者血清中的HBV DNA和HCV cDNA,甚至可达到无需PCR水平,此方法具有敏感性高、特异性好的特点。
- 习东罗小平宁琴
- 关键词：肝炎病毒乙型肝炎丙型DNA探针
- Au纳米颗粒HBV DNA基因探针的制备及其在目视化检测HBV DNA中的应用被引量：6
- 2006年
- 制备金(gold,Au)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitis B virus deoxynucleic acid,HBV DNA)基因探针,研究其在目视化检测HBV DNA中的应用。Au纳米颗粒通过金-硫(Au-S)共价键结合烷氢硫醇修饰的寡核苷酸,制备检测探针。用荧光标记法检测Au纳米颗粒表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针,用斑点杂交法检测HBV DNA,加入银离子(Ag+)-对苯二酚液染色观察结果。制备的Au纳米颗粒粒径为(12±5)nm,分散良好,在520nm有最大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,最大吸收峰改变为524nm。Au纳米颗粒表面寡核苷酸的最大覆盖率为(132±10)条,最大杂交效率为(22±3)%。在尼龙膜上用斑点杂交法可检出低至10fmol的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBV DNA的PCR产物。Au纳米颗粒HBV DNA基因探针可用于目视化检测HBV DNA,此方法具有敏感性高、特异性好、简单、价廉的特点,可望在许多领域,尤其是在多基因检测芯片上有潜在的应用价值。
- 习东宁琴卢强华姚凯伦刘祖黎罗小平
- 关键词：金纳米颗粒基因探针乙肝病毒
- 纳米金比色芯片同步目视化检测HBV和HCV被引量：1
- 2007年
- 目的建立一种简单、快速的比色芯片可同时目视化检测 HBV DNA 和 HCV RNA。方法利用多重 PCR 方法扩增 HBsAg 阳性合并抗 HCV 阳性的患者血清中提取的 HBV DNA 和 HCVcDNA。制备 Au 纳米颗粒基因探针,检测探针与固定在尼龙膜上的捕捉探针构成双探针,用斑点杂交法检测 HBV DNA、HCV cDNA 的多重 PCR 产物,加入银离子(Ag^+)-对苯二酚液染色观察结果。结果多重 PCR 可同时扩增 HBV DNA 和 HCV cDNA,出现预期的431bp 和323bp 特异性条带。纳米金比色芯片可以同步目视化检出乙型、丙型肝炎合并感染患者血清中 HBV DNA 和 HCV RNA 的 PCR 产物。结论目视化 HBV、HCV 纳米金比色芯片诊断方法操作简单、特异性好、成本低廉、结果判定指标客观,此类基因芯片在病毒基因检测领域将会有广泛用途。
- 习东宁琴罗小平
- 关键词：肝炎病毒丙型芯片分析技术
- 纳米金标记法在HIV检测中的应用被引量：8
- 2007年
- 目的制备金纳米颗粒人类获得性免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)基因探针,研究其在检测HIV中的应用。方法采用枸橼酸还原金氯酸法制备Au纳米颗粒。Au纳米颗粒通过Au-S共价键与烷烃硫醇修饰的寡核苷酸结合制备检测探针。检测探针通过与靶序列在液相中杂交,形成Au纳米颗粒聚集体,采用电镜观察结果。结果制备的Au纳米颗粒粒径为(12±5)nm,分散良好,在520nm有最大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,最大吸收峰改变为524nm。液相杂交后采用电镜观察可检测低至1fmol/L的合成靶序列。结论Au纳米颗粒HIV cDNA基因探针,通过液相杂交技术检测HIV cDNA,可以缩短检测窗口期,做到早期诊断和预防。
- 张平习东宁琴罗小平
- 关键词：金纳米颗粒基因探针
- 金纳米颗粒基因探针检测HBV DNA被引量：3
- 2007年
- 目的制备金(gold,Au)纳米颗粒HBV DNA基因探针,通过透射电镜直接检测乙肝患者血清中的HBV DNA,实现不经过PCR扩增检测DNA。方法制备Au纳米颗粒和Au纳米颗粒HBV DNA基因探针,用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖数和杂交效率。在检测体系中加入乙肝患者血清中提取的HBV DNA,透射电镜下观察。结果制备的Au纳米颗粒粒径为(10±5)nm,水相分散良好,在520nm有Au特征性的最大吸收峰,经寡核苷酸修饰后,其最大吸收峰改变为524nm。Au纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖数目为(132±10)条,最大杂交效率为(22±3)%。在液相中与HBV DNA反应后,透射电镜下可观察到Au纳米颗粒凝聚成大的聚集体。结论成功制备了Au纳米颗粒HBV DNA基因探针,可直接用于HBV DNA的检测。
- 习东宁琴卢强华姚凯伦刘祖黎罗小平
- 关键词：乙型肝炎病毒金DNA探针
- Fe_3O_4(核)/Au(壳)纳米颗粒探针的制备及其在检测乙型肝炎病毒DNA中的应用被引量：11
- 2006年
- 目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitisBvirusdeoxynucleicacid,HBVDNA)基因探针,研究其在检测HBVDNA中的应用。方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒。通过金-硫(Au-S)共价键,将烷氢硫醇修饰的寡核苷酸结合在Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒上,制备纳米颗粒HBVDNA基因探针。用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。在尼龙膜上,使用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针通过斑点杂交法、Ag染色法检测HBVDNA。在纳米颗粒基因探针液相检测体系中加入HBVDNA,透射电镜下观察。结果制备的Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒粒径均匀,为(15±5)nm,水相分散良好,具有磁性。Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖率为(120±8)条,最大杂交效率为(14±2)%。斑点杂交法可检出低至1010copies/ml的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBVDNA的PCR产物。在液相检测体系中加入HBVDNA,透射电镜观察到纳米颗粒组装成大的网状结构的聚集体。结论成功制备了Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBVDNA基因探针,它可直接用于HBVDNA的检测。
- 习东宁琴卢强华姚凯伦刘祖黎罗小平
- 关键词：DNADNA探针
