国家自然科学基金(30730081)
- 作品数：10 被引量：48H指数：5
- 相关作者：唐家琪潘秀珍王长军葛俊超王晶更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
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- 猪链球菌2型唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株的构建及其生物学特性被引量：8
- 2009年
- 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株。PCR和Southern杂交结果均显示neuB基因在1株转化重组体中完全被壮观霉素抗性基因替代,表明neuB基因敲除突变体构建成功。生物学特性鉴定显示,突变体与强毒株在菌落形态、溶血活性以及染色特性方面均无明显差异;电镜检查发现突变体表面结构组分与强毒株有显著差异,荚膜明显变薄,质地更加紧密;小鼠致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。研究结果提示菌体荚膜中的唾液酸对于猪链球菌2型侵袭和致病具有重要作用。
- 董瑞萍王长军程功李明王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物学特性
- 链球菌超抗原生物学特性研究进展被引量：5
- 2009年
- 链球菌超抗原在多种链球菌感染导致的疾病中发挥着重要作用。随着研究的深入,对链球菌的认识也取得了新的突破。文中对当前研究证实的链球菌超抗原成员及其结构特征、致病机制、表达调控进行了综述,并展望其在肿瘤治疗中的意义。
- 邵珠卿潘秀珍唐家琪
- 关键词：链球菌超抗原肿瘤治疗
- 沙门菌耐药性现状分析被引量：9
- 2012年
- 沙门菌(Salmonella)是引起人类食物中毒最常见的致病菌,由于抗生素的大量和广泛使用,其耐药性呈现不断增强的趋势。为了降低沙门菌对人类的危害,各国均加强了对沙门菌耐药性的监测力度,文中就沙门菌的耐药机制作一综述,并对国内近年来沙门氏菌耐药性监测报道进行总结,分析其发展趋势,提出防控措施。
- 林梅李晓华
- 关键词：沙门菌耐药性污染
- 2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究
- 目的分析猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)ZnuA基因在不同血清型S.suis菌株中的分布情况,并研究ZnuA蛋白的保护作用,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过PCR扩增,检...
- 李先富潘秀珍韩明月王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用
- 文献传递
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌克隆
- gdh基因在猪链球菌中的分布及重组GDH的抗原性研究被引量：7
- 2008年
- 目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备多克隆抗体,Western blot方法分析S.suis各血清型菌株与多克隆抗体的反应以及实验感染S.suis2型的猪血清与重组GDH的反应情况。结果在S.suis35个血清型标准株中,除了22、26、27、29、32及34型以外,其余包括1、2、1/2、7、9和14型在内的29个血清型、61株国内外S.suis2型分离株全部扩增出目的条带。用重组GDH免疫小鼠,在小鼠血清中均检测到抗GDH的抗体;Western blot结果显示,全部被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带,6份实验感染猪血清均能与重组GDH产生反应条带。结论重组GDH具有免疫原性和反应原性,该蛋白有可能作为建立诊断试验的候选抗原,为进一步开展相关的血清学诊断方法和疫苗研究奠定基础。
- 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军李先富郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶抗原
- 猪链球菌2型烯醇化酶的分子克隆与免疫学特性被引量：5
- 2008年
- 对新近测定的猪链球菌2型(S.Suis 2)05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,设计合成引物,PCR法扩增出约1.3 kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分子量约为75kD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在S.suis 2 05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。
- 孙雯潘秀珍王长军郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型烯醇化酶ELISA
- 2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建被引量：1
- 2009年
- 通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.
- 史沛举郝喜娜葛俊超王长军王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌
- 猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷菌株的构建被引量：6
- 2009年
- 目的构建猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株。方法利用同源重组基因敲除方法获得S.suis2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响。结果PCR和Southern杂交结果均显示cps2B基因完全被壮观霉素抗性基因替代,表明基因敲除突变体构建成功。电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失,小鼠致病性实验结果显示突变体毒力基本丧失。结论成功构建05ZYH33荚膜缺陷株,提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用。
- 胡丹王长军胡福泉王晶程功李明潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型荚膜多糖基因敲除
