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起始识别复合物1基因在血管平滑肌细胞DNA复制中的作用被引量：2: 2007年; 目的探讨起始识别复合物1(ORC1)在血管平滑肌细胞(VSMC)DNA 复制中的表达及其意义。方法采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉 VSMC,利用双胸苷阻断、秋水仙素阻抑法和血清饥饿法使 VSMC 达到细胞周期同步化,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和 Westernblot 检测不同细胞周期的 VSMC ORC1 mRNA 和蛋白表达。结果同步化的 VSMC DNA 含量百分比,血清饥饿法以 G_0G_1期为主(P<0.01),双胸苷阻断14 h 以 G_0G_1期为主(P<0.01),双胸苷阻断14 h 后10%胎牛血清刺激6 h 以 S 期为主(P<0.01),秋水仙素培养12 h 以 G_2/M 期为主(P<0.05)。静止状态 VSMC 的 ORC1 mRNA 和蛋白质无表达,处于 G_1/S 期 VSMC 的 ORC1 mRNA 表达量显著高于 S 期和 G_2/M 期。VSMC 的 ORC1蛋白质表达量与 ORC1 mRNA 变化规律相似。结论ORC1随细胞的分裂周期而表达,ORC1可能是启动 VSMC DNA 复制的关键因子。; 江明宏舒茂琴覃跃龙王倩; 关键词：血管细胞周期

细胞周期蛋白A对培养大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1表达水平的影响: 2014年; 目的探讨细胞周期蛋白A （Cyclin A）对培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）周期起始识别复合物1（ORC1）表达水平的影响.方法采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,利用双胸苷使VSMCs达到细胞周期同步化,应用逆转录聚合酶链反应技术和流式细胞仪检测不同细胞周期VSMCs的ORC1和Cyclin A mRNA和蛋白表达.结果经鉴定培养的细胞为VSMCs,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMCs：G0/G1期（89.22 ±3.54）％,G1/S交界期（66.74±7.16）％,S期（63.24±4.06）％,G2/M期（51.64±11.18）％,各期比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.Cyclin A在静止状态对VSMCs的ORC1 mRNA和蛋白无影响,在G2/M期达到高峰[（52.133 3 ±2.122 1）％],与G1/S期[（10.9167±0.531 1）％]、S期[（7.656 7±0.412 4）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）.ORC1在G2/M期达到最低值[（1.276 7 ±0.161 7）％],与G1/S期[（13.371 0±1.057 3）％]、S期[（3.043 3 ±0.538 0）％]比较,差异有统计学意义（P均＜0.01）,可能原因是Cyclin A阻止ORC1结合在VSMCs染色质上.结论 CyclinA可能调控ORC1在VSMCs细胞周期的启动.; 江明宏舒茂琴; 关键词：细胞周期蛋白A 血管平滑肌细胞

起始识别复合物1对血管平滑肌细胞增殖活性的影响被引量：1: 2011年; 目的起始识别复合物1(origin recognition complex1,ORC1)与血管平滑肌细胞增殖密切相关[1],文中探讨ORC1对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖活性的影响。方法用组织块贴片法培养大鼠胸主动脉VSMC;用流式细胞术测定VSMC静止期和增殖期的细胞周期,并计算出不同状态的增殖活性;用免疫荧光法测定ORC1在VSMC中的表达位置,用流式细胞术测定不同细胞周期中ORC1蛋白表达。结果静止期VSMC的增殖活性很低[(10.40±3.52)%],在VSMC中ORC1不表达或低水平表达。血清剌激24 h后,处于增殖期的VSMC的增殖活性明显增加,达(33.91±13.42)%,ORC1蛋白表达也明显增加(P<0.01)。结论 ORC1可能与VSMC增殖活性有关。; 江明宏舒茂琴覃跃龙王倩; 关键词：血管平滑肌细胞增殖活性细胞周期

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定被引量：5: 2007年; 目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。; 王倩舒茂琴江明宏李建涛康振峻; 关键词：血管平滑肌细胞细胞培养主动脉

ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：9: 2006年; 目的以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORC1基因表达抑制后VSMCs增殖的变化。方法实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性(ORC1+A、ORC1+B、ORC1+C)siR-NA组。应用W estern b lot检测ORC1基因表达的变化;应用MTT比色试验、3H-TdR掺入试验检测VSMCs增殖的情况。免疫细胞化学染色观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuc lear antigen,PCNA)表达。结果①siRNA转染后,3个阳性siRNA转染组ORC1基因表达水平均降低,尤以第2对阳性siRNA抑制效果最为显著,而空白对照组及阴性对照组间ORC1基因表达水平无显著差异。②siRNA转染使ORC1表达减弱后,VSMCs的MTT吸光度值3、H-TdR掺入量和PCNA表达量均较空白对照组及阴性对照组显著降低。结论RNA干扰介导的ORC1基因沉寂可显著抑制VSMCs增殖。; 覃跃龙舒茂琴江明宏; 关键词：RNA干扰血管平滑肌细胞细胞增殖

起始识别复合物在细胞周期中作用的研究进展被引量：6: 2007年; 探讨起始识别复合物(ORC)在细胞周期中的作用,以确定ORC与细胞周期的关系。当前ORC对细胞周期的研究仍然很少。作者就ORC在细胞周期中的作用作一综述。; 江明宏舒茂琴; 关键词：细胞周期细胞增殖

雷帕霉素对大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1 mRNA表达的影响被引量：1: 2007年; 目的观察血管平滑肌细胞(VSMC)起始识别复合物1(ORC1)mRNA在雷帕霉素作用下的表达变化。方法采用组织块贴壁法获得VSMC并用免疫细胞化学法鉴定,含体积分数10%血清的培养基培养。血清饥饿法饥饿细胞24 h使其同步化。将雷帕霉素加入含体积分数10%血清的培养基(终浓度为10 nmol.L-1)中继续培养细胞,分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h、18 h、21 h、24 h收集细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术法检测各时间点ORC1 mRNA的表达(内参为β-actin)。用Quantity One软件计算各时间点ORC1 mRNA与内参的光密度比值,并作统计学分析。结果各时间点ORC1与β-actin光密度比值均有显著性差异(F=410.170,P=0.001)。雷帕霉素作用3～12 h ORC1 mRNA的表达持续升高(与0 h比较,P<0.05),12～18 h逐渐下降(与0 h比较,P依次为0.001,0.001,1.000),18～24 h与0 h比较,无统计学差异(P依次为1.000,0.986,1.000)。结论VSMC的ORC1 mRNA表达随雷帕霉素作用时间呈动态变化。; 王倩舒茂琴江明宏覃跃龙李建涛; 关键词：雷帕霉素血管平滑肌细胞

体外培养血管平滑肌细胞的同步方法被引量：1: 2008年; 目的:探讨体外血管平滑肌细胞(VSMC)同步化的培养及意义。方法:采用组织块贴片法原代培养大鼠胸主动脉VSMC,利用双胸苷阻断和秋水仙素阻抑法使VSMC达到细胞周期同步化。结果:经鉴定培养的细胞为VSMC,采用血清饥饿法、双胸苷阻断法和秋水仙素阻抑法分别获得了处于不同细胞周期的同步化的VSMC:G0/G1期(89·22±3·54)%,G1/S交界期(66·74±7·16)%,S期(63·24±4·06)%,G2/M期(51·64±11·18)%。结论:同步了体外培养的VSMC,为研究冠状动脉粥样硬化的发病机制奠定了实验基础。; 江明宏舒茂琴王倩覃跃龙李建涛曹雪滨; 关键词：血管平滑肌细胞细胞周期同步化

西罗莫司对大鼠血管平滑肌细胞增殖、起始识别复合物1表达的影响及机制探讨被引量：2: 2011年; 目的探讨西罗莫司对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、起始识别复合物1(ORC1)表达的影响及机制。方法细胞随机分为对照组和实验组,每组3瓶/孔,血清饥饿法培养细胞24h使其同步化。对照组采用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养,实验组采用含10μmol/L西罗莫司+10%胎牛血清的DMEM培养液培养。继续培养0～48h,采用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达,电子显微镜观察细胞超微结构,RT-PCR法检测ORC1mRNA的表达,蛋白质印迹法检测P53、cyclin D1、cyclin A和ORC1蛋白的表达。结果与对照组相比,实验组48hPCNA阳性表达率降低[(20±2.1)%vs(80±3.0)%,P<0.05],P53蛋白表达升高(P<0.05);细胞核有固缩的迹象;实验组cyclin D1蛋白表达轻微升高(P>0.05),48hcyclin A蛋白的表达下降(P<0.05)。对照组ORC1mRNA的表达在0～12h升高,24～48h降低,高峰期在12h。实验组细胞ORC1mRNA的表达始终处于高水平。与同时间对照组比较,实验组48hORC1mRNA的表达升高(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果与之相似。结论西罗莫司抑制VSMCs增殖,同时促进其凋亡;其作用环节可能是通过阻止细胞由G0/G1期向S期转化,诱导细胞处于静止状态;ORC1的作用环节位于西罗莫司作用点的上游,进一步支持ORC1参与细胞复制起始过程。; 王倩舒茂琴; 关键词：西罗莫司血管平滑肌细胞细胞增殖

ORC1与大鼠血管平滑肌细胞DNA复制的关系及意义探讨被引量：3: 2006年; 目的探讨大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖过程中DNA复制与起始识别复合物1（origin recognition complex 1，ORC1）基因表达的关系及意义。方法采用组织块贴片法培养大鼠胸主动脉VSMCs，利用MTT法绘制生长曲线，分析不同生长状态VSMCs的DNA合成与ORClmRNA和蛋白表达的关系。结果静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA及蛋白质表达，血清刺激后12—24hVSMCsDNA的合成量显著增加，ORC1 mRNA及蛋白质表达量与VSMCs DNA的合成量相一致。结论 ORC1与大鼠VSMCs增殖过程中的DNA复制密切相关。; 江明宏舒茂琴覃跃龙; 关键词：血管平滑肌细胞 DNA复制

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