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噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26表达的影响被引量：3: 2013年; 目的观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26(Cx26)表达的变化。方法成年雄性Balb/c小鼠49只随机分为噪声组(29只)和对照组(20只)。实验前两组小鼠检测听性脑干反应(ABR),随后噪声组小鼠给予高强度噪声(115dB SPL,6小时/天,共2天12小时)暴露,并在噪声暴露后0和7天分别检测ABR。对照组不做任何处理。噪声暴露后4小时,每组取2只小鼠做耳蜗冰冻切片,18只小鼠提取耳蜗外侧壁总RNA。通过免疫组化染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx26蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察缝隙连接蛋白转运相关蛋白———β微管蛋白的表达,荧光实时定量PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx26编码基因GJB2mRNA的表达。结果正常小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx26棕黄色阳性颗粒,血管纹处未见阳性表达;噪声组小鼠耳蜗外侧壁Cx26免疫组化染色较对照组减弱;Cx26编码基因GJB2mRNA表达量低于对照组,β微管蛋白排列稀疏紊乱,呈条索状排列,但未见明显浓集或断裂。结论噪声可下调小鼠耳蜗外侧壁Cx26的表达,Cx26可能参与了噪声性聋的发病机制。; 王亚菲王洁朱庆春邱建华; 关键词：噪声耳蜗 CONNEXIN26 微管蛋白小鼠

miR-182可以促进耳蜗前体细胞分化为毛细胞被引量：6: 2014年; 目的探讨miR-182诱导耳蜗前体细胞向毛细胞分化的作用及机制。方法从新生大鼠耳蜗中分离培养耳蜗前体细胞并用血清诱导分化,BrdU、Nestin免疫荧光染色鉴定细胞自我增殖能力;myosinⅦa和phalloidin免疫荧光染色鉴定其是否具有分化为毛细胞的潜能。分别利用miR-182 mimics和siRNA在新生大鼠耳蜗前体细胞中过表达和低表达miR-182,然后在细胞诱导分化7天后,用流式细胞仪检测分化细胞中myosinⅦa阳性细胞比例,用Western-blot检测支持细胞标志分子中Sox2的变化。结果使用miR-182 mimics进行过表达后,耳蜗前体细胞分化为myosinⅦa阳性表达的细胞比例显著高于对照组,使用miR-182 siRNA进行低表达后此比例显著低于对照组。Western-blot检测显示,Sox2在miR-182 mimics组较对照组降低,miR-182 siRNA组较对照组增加。结论过表达miRN182可以促进耳蜗前体细胞向毛细胞方向分化,ox2可能是此过程中的靶基因。; 邢蔚闫辉米文娟陈俊邱建华; 关键词：分化毛细胞

丁酸钠对庆大霉素耳聋保护的体内研究被引量：5: 2012年; 目的通过动物实验验证组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠是否可以保护耳蜗毛细胞免受庆大霉素引起的耳毒性损害。方法 10只听力正常豚鼠被用于本实验。向每只动物右耳的圆窗龛放置小块明胶海绵(0.3mm3)并注入10μl丁酸钠(100mg/ml)溶液,左耳圆窗龛内置放的明胶海绵则注入10μl人工外淋巴液作为对照。手术后第三天开始按照每公斤体重200mg的剂量每天一次性对豚鼠肌肉注射庆大霉素,连续用药5天。在停药后第3天检测听性脑干诱发电位,常规制备全耳蜗基底膜铺片结合鬼笔环肽染色,对全耳蜗毛细胞进行计数并制备全耳蜗毛细胞图。结果圆窗龛置放丁酸钠溶液组的听性脑干诱发电位阈值比圆窗龛置放外淋巴液组低,两组资料相比有显著性统计学差异(P<0.01),圆窗龛置放丁酸钠溶液组的耳蜗毛细胞缺失程度比圆窗龛置放外淋巴液组轻。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对庆大霉素导致的豚鼠耳聋和耳蜗损害具有一定的保护作用。; 王洁王亚菲温立婷王烨陈福权邱建华; 关键词：丁酸钠庆大霉素耳聋组蛋白去乙酰化酶抑制剂

硫酸卡那霉素联合呋塞米快速致聋大鼠模型的研究被引量：5: 2014年; 目的观察硫酸卡那霉素(kanamycin sulfate,KM)与呋塞米(furosemide,Fur)联合用药建立药物性快速致聋大鼠动物模型的效果。方法 32只SD大鼠随机分为A组(KM+Fur后1天组)、B组(KM+Fur后7天组)、C组(KM+Fur后14天组)、D组(对照组),每组8只动物。A、B、C三组分别经一次性腹腔注射KM 500mg/kg,30分钟后再经腹腔注射Fur 0.2ml/kg,空白对照组按体重给予相同剂量生理盐水。各组在相应的时间点完成听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测当天,分别行耳蜗基底膜铺片及扫描电镜观察耳蜗毛细胞损伤情况,免疫荧光染色观察螺旋神经节细胞亡情况。结果 A、B、C组各频率ABR阈值较正常对照组明显升高(P<0.05);而A、B、C组各频率ABR反应阈差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组耳蜗底回外毛细胞明显缺失,纤毛排列紊乱,螺旋神经节细胞的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的表达量较正常对照组均明显增加(P<0.05)。结论硫酸卡那霉素和呋塞米联合单次腹腔用药24小时后大鼠ABR反应阈明显增高,并可见耳蜗底回毛细胞的明显缺失,KM+Fur联合应用是简单、快速而有效的大鼠耳聋动物模型建模方法。; 闫辉邢蔚宋勇莉王人凤陈俊邱建华; 关键词：硫酸卡那霉素呋塞米耳聋动物模型

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