广东省自然科学基金(06105311)
- 作品数：29 被引量：153H指数：8
- 相关作者：宋长绪杨增岐王旭荣蒋智勇张彩勤更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院西北农林科技大学内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省农业科技攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪圆环病毒2型感染裸鼠及BALB/c小鼠的研究被引量：4
- 2007年
- 用猪圆环病毒2型(PCV2)经腹腔注射BALB/c小鼠及裸鼠各15只,每隔2周1次,共感染3次。BALB/c小鼠初次、再次感染后均未出现明显的临床症状,仅有2只小鼠出现病理变化;从血清中可检测到PCV2核酸及其ORF2抗体;同时淋巴细胞增殖反应显著增强,NK和CTL细胞杀伤率显著升高;CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞及CD19+B淋巴细胞数量显著减少。裸鼠也未出现明显的临床症状,从血清中可检测到PCV2核酸,但未检测到PCV2 ORF2抗体;除NK细胞杀伤率显著升高外,其余免疫学指标无显著改变。结果表明,BALB/c小鼠比裸鼠对PCV2易感,各项免疫学指标变化与PCV2感染猪一致,但不表现临床症状,仅个别BALB/c小鼠出现病理变化,说明BALB/c小鼠对PCV2不如猪易感。
- 赵路易杨增岐宋长绪丛丽媛刘建营王建龙
- 关键词：猪圆环病毒2型裸鼠BALB/C小鼠
- 猪繁殖与呼吸综合征河南毒株Henan-1的分离及其NSP2、ORF3、ORF5的序列分析被引量：15
- 2008年
- 将2007年1月河南省某猪场送检的疑似高热病病料处理后接种于Marc-145细胞，出现细胞聚集、固缩、脱落等特异性细胞病变。根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的基因序列设计并合成针对NSP2、ORF3和ORF5基因的引物，RT-PCR扩增目的基因并将其克隆入pMD18-T载体进行测序。并与国内外已发表的毒株的序列进行比较。结果表明：分离毒株Henan-1是美洲型PRRSV，而且NSP2基因发生30个AA的不连续缺失；Henan-1的NSP2、ORF3和ORF5基因与JXA1、JX0612、HZ-X、HB-1（sh）、CH-1a、HB-2（sh）、SP、ATCC VR-2332、Henan-HN1、Resp PRRS／Repro MLV、PA8、BJ-4等毒株等位基因的核苷酸同源性分别为83．0％～99．0%、88．3％～99．2％、88．6％～99．5％，推导的氨基酸同源性分别为66．7％～97．9％、84．7％～98．8％、87．1％～99．5％；而ORF3和ORF5基因与LV4．2．1等位基因核苷酸同源性分别为64．7％和64．2％，推导的氨基酸同源性分别为56．7％和61．0％。基因系统发育树分析表明：Henan-1与JXA1、JX0612株的亲缘关系很近，与HB-1（sh）亲缘关系较近，与HZ-X、CH-1a、HB-2（sh）、SP、RespPRRS／Repro MLV等毒株处于不同的分支。
- 张彩勤王旭荣杨增岐赵炳武宋长绪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 广东省猪繁殖与呼吸综合征流行情况的调查和分析被引量：2
- 2007年
- 应用RT-PCR检测方法,对2004年至2006年珠三角、粤北、粤西、粤东等4个地区的293个规模化养猪场采集的2015份病料进行了检测,所检测样品的总阳性率为48.5%,而猪场阳性率为19.4%。其中,以珠三角地区的阳性率最高,其猪场阳性率为57.4%,样品阳性率为22.0%,而粤西地区阳性率最低,猪场阳性率为32.7%,样品阳性率为15.9%。粤北和粤东的阳性率介于珠三角和粤西之间,其猪场阳性率分别为49.1%和51.0%,样品阳性率分别为19.4%和18.9%。说明猪繁殖与呼吸综合征病毒在广东省各个地区的猪场中广泛存在,应加强针对该病毒感染的防控措施。
- 刘燕玲王旭荣黄忠宋长绪
- 关键词：RT-PCR猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：9
- 2008年
- 以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）Cap重组蛋白作为免疫原，按常规方法免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0细胞融合，经间接ELISA筛选，获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7，其染色体平均数为98～103，间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1：3125、1：3125、1：15625，小鼠腹水效价分别为1：390000、1：390000、1：1950000。ELISA结果显示，1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应，而与PET-32a载体表达的蛋白不反应。相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点。间接免疫荧光结果显示，1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应，而不与PCV1发生交叉反应。结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的，为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础。
- 元永平丛丽媛陈德坤蒋智勇张春红宋长绪
- 关键词：单克隆抗体
- 猪圆环病毒病(PCVD)研究进展被引量：28
- 2010年
- 猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)引起的一大类猪病的统称,该病对我国的养猪业造成了极大的危害。就猪圆环病毒病在病原学、流行病学、染毒症状及综合防控措施对其进行了阐述,以期为其后续研究提供参考。
- 宋长绪梁鹏帅
- 关键词：猪圆环病毒病病原学防控措施
- PCV-2分离新方法的建立及广东株全基因序列的分析
- 2008年
- 利用体外环化的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因的感染性,建立一种分离PCV-2的方法。根据GenBank中PCV-2的基因序列,设计合成1对扩增PCV-2全基因组的特异性引物。通过PCR方法从广东发病猪病料扩增到PCV-2全基因组片段,将该片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得阳性重组质粒pM-DT-YF并测序。将所测序列与GenBank中发表的PCV毒株序列进行同源性比较。将质粒pMDT-YF大量扩增,经SacⅡ酶切质粒得到PCV-2全基因组,通过T4连接酶体外环化后,脂质体介导转染PK-15细胞,盲传8代。用间接免疫荧光抗体试验(IFA)可检测到特异性荧光。将转染细胞稀释后接96孔细胞培养板,培养3 d。用荧光定量法检测各孔的PCV-2拷贝数,选择拷贝数最大的细胞扩大培养,经IFA法测定病毒滴度显著增加。结果表明,利用具有感染性的体外环化的全基因组的克隆转染PK-15细胞,并通过选择压力可获得较高滴度的具有感染性的PCV-2。
- 赵炳武于海霞郝永清蒋智勇宋长绪
- 关键词：猪圆环病毒2型基因组
- 华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒检测分析
- 为了解华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒的最新流行情况,采集了华南地区11个规模猪场各饲养阶段猪血清807份,用套式PCR（nPCR）检测猪圆环病毒1型（PCV-1）和猪圆环病毒2型（PCV-2）;采集了若干猪场...
- 梁鹏帅蔡汝健刘燕玲孙瑞芹张龙现宋长绪
- 关键词：猪圆环病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
- 华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系被引量：3
- 2007年
- 根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV- 1与PCV-2病毒检测。结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6％,PCV-2阳性率为27．8％;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4．9％,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率。说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染。
- 孙丽华徐维加刘燕玲蒋智勇郝永清宋长绪李旭阳
- 猪葡萄球菌感染裸鼠及BALB/c小鼠模型的研究被引量：8
- 2008年
- 用一株本室分离鉴定能够引起猪渗出性皮炎的猪葡萄球菌(S.hyicus GZ1)经肌肉注射裸鼠和BALB/C小鼠,意图研究裸鼠和BALB/C小鼠对猪葡萄球菌的易感性及猪葡萄球菌对裸鼠和BALB/C小鼠的致病性。结果表明裸鼠和BALB/C小鼠均可被感染,并表现各自的临床症状。裸鼠在感染后2到3d背部和面部皮肤开始出现大量小的红色囊泡,4到5d后部分囊泡消失,部分形成结痂。一些裸鼠眼睛还会有较多脓性分泌物渗出,感染两周后相继死亡。BALB/C小鼠感染该菌后多表现急性临床症状,感染后2到3d就相继死亡,因此表现不出明显的眼观病变,只有很少一部分小鼠皮肤上会出现炎性渗出,导致该处皮肤脱落。研究表明:BALB/C小鼠比裸鼠对猪葡萄球菌更易感,裸鼠感染后产生清晰可见的临床症状,而BALB/C小鼠在感染后往往还来不及表现明显的临床症状就相继死亡。可见,猪葡萄球菌不仅对猪有致病性,对裸鼠和BALB/C小鼠也都表现出不同程度的致病性。
- 杨彩娟蒋志勇陈德坤宋长绪
- 关键词：葡萄球菌感染BALB/C裸鼠BALB/C小鼠渗出性皮炎
- 荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒被引量：6
- 2007年
- 通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量RT-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%。对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度。
- 孙彦伟刘建营徐维加田云王晶钰宋长绪
- 关键词：日本脑炎病毒荧光定量PCRTAQMAN探针
