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酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白被引量：4: 2009年; 目的以CVB3VP1为诱饵蛋白,筛选与CVB3VP1直接作用的人心脏cDNA文库基因,并对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库;经阳性克隆的表型确定、PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等试验将阳性克隆归类,并进行测序和同源性比对分析;α-半乳糖苷酶活性定量分析VP1与各阳性蛋白之间相互作用的强弱。结果在人心脏cDNA文库中筛选到5个阳性克隆,分别为:MNAT1(CAK装配因子),GOLGA2(高尔基体基质蛋白GM130),PHR1(视网膜PH结构域蛋白1),LDB1(LI M结构域结合蛋白1),NADH脱氢酶亚单位4。将筛选的GOLGA2cDNA新序列提交给NCBI GenBank数据库,获得Accession Number:AY823636;α-半乳糖苷酶定量分析试验进一步证明了MNAT1、GOLGA2、PHR1和LDB1等4个基因与VP1均有较强的相互作用。结论本研究成功地运用了酵母双杂交技术,以CVB3VP1为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得5种不同类别的阳性基因:MNAT1、GOLGA2、PHR1、LDB1和NADH脱氢酶亚单位4。; 刘发娣余克花罗达亚徐秋芳莫冰罗军刘晶星黄孝天; 关键词：酵母双杂交柯萨奇病毒 CVB3 VP1

柯萨奇B组病毒致病性的分子生物学研究被引量：1: 2010年; 柯萨奇B组病毒（coxsackievirus group B，CVB）是微小RNA病毒科肠道病毒属成员，病毒性心肌炎的病例中大约有20％-25％是由柯萨奇B组病毒引起。CVB的致病机制十分复杂，病毒基因组以及病毒蛋白均在病毒致病过程中发挥重要作用。因此，对柯萨奇B组病毒的基因组、结构蛋白以及某些非结构蛋白与靶细胞内分子间相互作用生物信息的认识是阐述该病分子机制的基础。; 刘发娣黄孝天刘金辉; 关键词：柯萨奇B组病毒心内膜炎分子间相互作用

电针结合安脑丸对脑梗死大鼠模型的神经保护作用被引量：11: 2013年; 目的在短暂性大脑中动脉栓塞缺血再灌注(transient middle cerebral artery occlusion infarction/reperfusion,tMCAO I/R)模型大鼠中证实电针结合安脑丸治疗对其具有神经保护作用,并对脑梗死后神经保护的机制进行初步探索。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、安脑丸组和电针结合安脑丸组。线栓法制作SD大鼠左侧短暂性大脑中动脉栓塞模型。mNSS评分法对各组大鼠各个时间点进行行为学评分。实时荧光定量PCR技术对各组大鼠各个时间点Bcl-2mRNA转录水平进行分析。免疫组化法观察脑梗死后10d各组大鼠脑组织Caspase-3阳性细胞表达,Westernblot分析各组大鼠脑组织Caspase-3蛋白表达水平。TUNEL原位细胞凋亡检测脑梗死后10d各组大鼠梗死区边缘神经元细胞凋亡数量。结果假手术组(正常)mNSS评分为0,未见脑梗死,偶见生理性凋亡细胞。安脑丸组和电针结合安脑丸组在4、7、10dmNSS评分明显低于模型组(均P<0.05),其中,电针结合安脑丸组更低(P<0.05)。实时荧光定量PCR的检测结果显示脑梗死后Bcl-2mRNA转录水平升高,安脑丸组和电针结合安脑丸组与模型组相比升高更明显(均P<0.05),其中,电针结合安脑丸组较安脑丸组更高(P<0.05)。免疫组化及Western blot的检测结果都显示,脑梗死后10d安脑丸组和电针结合安脑丸组大鼠脑组织Caspase-3阳性细胞表达数及蛋白表达水平要明显低于模型组(均P<0.05),其中电针结合安脑丸组较安脑丸组更低(P<0.05)。TUNEL检测结果显示梗死后10d安脑丸组和电针结合安脑丸组的神经元细胞凋亡数量明显低于模型组(均P<0.05),电针结合安脑丸组较安脑丸组更低(P<0.05)。结论中药安脑丸治疗tMCAO I/R模型大鼠,可减少大鼠脑梗死区边缘神经元细胞凋亡数量,改善神经功能,结合电针治疗效果更为显著。其神经保护作用机制可能与针药结合治疗后上调了Bcl-2基因表达,抑制Caspase-3的表达�; 赖天宝宋艳玲余光方媛郭远瑾梅元武郑维红; 关键词：安脑丸电针脑梗死神经保护

酵母双杂交筛选与CVB33A相互作用的人心脏蛋白被引量：1: 2014年; 目的以CVB3非结构蛋白3A为诱饵,从人心脏cDNA文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对阳性cDNA克隆进行初步分析和鉴定。方法构建pGBKT7-3A重组质粒,Western Blot检测3A融合蛋白的表达;利用酵母双杂交技术筛选人心脏cDNA文库,经PCR扩增cDNA插入片段和Alu I酶切等实验将阳性克隆归类,并通过测序、相似性比对分析和回返配合实验去除假阳性蛋白。结果成功构建诱饵质粒pGBKT7-3A,Western Blot结果表明,pGBKT7-3A重组质粒在酵母菌中成功表达3A融合蛋白;经双杂交筛选和回返配合实验,获得了7个相互作用的蛋白,分别为:兰尼碱受体2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信号肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),细胞色素c氧化酶亚基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脱氢酶亚基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。结论应用酵母双杂交技术,以CVB3 3A为诱饵蛋白,从人心脏cDNA文库中获得7种不同的阳性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。; 张静怡赵颖洁李秀珍方舒何冰清刘曦罗军黄孝天; 关键词：酵母双杂交 CVB3

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化的调节作用被引量：5: 2010年; 目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G_2/M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3.0、1.0、0.3μmol/L Nocodazole处理Hela细胞(Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组)18 h。于Nocodazole撤除后0(处理18 h)、3、6、9 h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G_2/M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白(α-tubulin)排列。以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组。结果Nocodazole处理18 h,Nocodazole 3.0、1.0、0.3μmol/L处理组Hela细胞G_2/M期细胞百分比分别为55.95%、51.09%和47.81%,均显著高于对照组的9.54%(P<0.05)。在Nocodazole撤除后3、6、9 h时间点,Nocodazole 3.0μmol/L和1.0μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比无明显变化;而Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞百分比下降明显(30.43%、12.91%、10.23%),撤除后6 h时间点的G_2/M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义(P>0.05)。α-tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Nocodazole撤除后Nocodazole 0.3μmol/L处理组G_2/M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰。结论Nocodazole对Hela细胞G_2/M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0.3μmol/L Nocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小。; 徐秋芳余克花易婷黎帆刘发娣应颖邹伟文何平黄孝天; 关键词：NOCODAZOLE HELA细胞纺锤体 G2/M期

假丝酵母菌1070株对3种药物药敏分析被引量：2: 2011年; 目的分析假丝酵母菌临床分离株的流行病学及其耐药性特点,为临床合理选择药物提供依据。方法采用CHROMagar显色培养基和Vitek2 YST鉴定条进行菌株鉴定,根据美国国家临床试验标准化研究所(CLSI)推荐的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案第二版》(M27-A2)方案进行药敏试验。结果共收集假丝酵母菌1 070株,其中白假丝酵母菌最常见,占69.9%,其次为光滑假丝酵母菌和热带假丝酵母菌;假丝酵母菌对氟康唑的敏感率为87.8%,对5-氟胞嘧啶的敏感率为99.5%,对伊曲康唑的敏感率为40.3%。结论药敏结果显示假丝酵母菌临床分离株对5-氟胞嘧啶有高度的敏感性,而对伊曲康唑的耐药率很高。; 余勍余克花章清萍应颖金桂林张志勤徐建青王昊罗军黄孝天; 关键词：假丝酵母菌抗生素敏感性流行病学

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国家自然科学基金(30660010)

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