河南省科技攻关计划(092102110161)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：河南科技学院河南师范大学安阳工学院更多>>
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- 两类猪ADP-核糖基化因子的克隆分析与原核表达载体构建
- 2012年
- 哺乳动物小G结合蛋白——二磷酸腺苷-核糖基化因子(ADP-ribosylation factors,Arfs)除在囊泡运输、细胞骨架重排和调节细胞吞噬等方面起重要作用外,还与病毒的感染有关.前期研究发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染早期ARFs基因表达明显上调,然而在猪只中ARFs与PRRSV的感染至今知之甚少.本研究中,猪ARF1和ARF4分别被克隆,序列分析发现:ARF1包含一个长度为546bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码181个氨基酸,理论分子质量为20.70kDa,pI为6.62;ARF4包含一个长度为543bp的开放阅读框,预测编码180个氨基酸,理论分子质量为20.50kDa,pI为5.46.蛋白序列结构分析显示猪ARF1和ARF4蛋白含有典型的p loop,switch区,interswitch区和N端疏水区的Hasp,在第二位都含有可被肉豆蔻酰基化的甘氨酸.猪ARF1和ARF4的原核表达载体也被构建,为进一步研究其在PRRSV感染过程中的调控提供基础.
- 朱岩昆余燕卢全伟吴世秀张建新马金友
- 关键词：原核表达PRRSV
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用被引量：5
- 2013年
- 根据GenBank登录的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)血清1～14型的表面抗原蛋白D15和16SrRNA基因序列,设计2对特异性引物,分别扩增出637、431bp两条核苷酸片段,建立了APP的多重PCR检测方法。特异性结果表明,血清1、3、5a、8、10型能扩增出两条与预期大小的片段,而扩增的大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌、链球菌、葡萄球菌均成阴性。敏感性试验结果表明,最低检出浓度为50/μL。对临床分离的5株疑似APP菌株进行PCR,结果表明,其中4株为阳性,1株为阴性。提示,该方法的特异性和敏感性均良好。
- 张建新朱岩昆马金友赵杰余燕韩科芳
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎RRNA
- 猪繁殖与呼吸综合征组织病理学变化被引量：1
- 2010年
- 利用冰冻切片、H.E染色技术,对实验室确诊患猪繁殖与呼吸综合征病猪的皮肤、甲状腺、胸腺、肺脏、心脏、肝脏、脾脏、淋巴结和肾脏等器官进行了组织病理学研究.光学显微镜下可以观察到肺脏间质明显增宽,有浆液性渗出物,肺脏各管腔和肺泡内含有大量粒细胞、淋巴细胞、脱落的黏膜上皮细胞及组织细胞坏死崩解产物,肺泡Ⅱ型细胞代谢旺盛;脾脏呈急性脾炎变化,脾小体及脾索中有许多细胞碎片;淋巴结呈急性淋巴结炎或坏死性淋巴结炎变化,皮质和髓质内含有红细胞;皮肤、甲状腺、肾脏和肝脏内毛细血管出现出血现象.结论:PRRS可引起肺脏间质水肿及全身各组织器官广泛性充血和出血;巨噬细胞和淋巴细胞等变性、坏死擞量减少;淋巴器官内出现许多嗜酸性粒细胞等组织病理学变化.
- 马金友刘俊伟余燕徐之勇王天有
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征组织病理学
- 猪二磷酸腺苷-核糖基化因子6的克隆与原核表达被引量：1
- 2013年
- 为了探索二磷酸腺苷-核糖基化因子6(ADP-ribosylation factor 6,ARF6)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的关系及ARF6在PRRSV感染过程中的调控作用,本试验克隆猪arf6基因和构建PGEX-4T-arf6融合蛋白质原核表达载体。结果显示:arf6包含一个长度为528bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码175个氨基酸,理论分子质量为20 080,pI为8.97。结构特征分析显示,猪ARF6蛋白质含有典型的p loop、switch区、interswitch区和N端疏水区的Hasp,在N端第二位含有可被肉豆蔻酰基化的甘氨酸。arf6分布没有组织特异性。经过表达和纯化的ARF6-GST融合蛋白质可作为制备抗血清的抗原。
- 马金友余燕吴世秀张金洲赵恒章徐之勇
- 关键词：原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒
