国家自然科学基金(30640088)
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 相关作者：郝立波王继芳张小斌邢庆昌梁茂华更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院解放军第309医院首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
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- 应用RNAⅢ抑制肽(RIP)抑制葡萄球菌毒素产生的实验研究被引量：2
- 2011年
- 通过体外实验研究RNAⅢ抑制肽(RIP)抑制葡萄球菌产生肠毒素和溶血素的效果。将200μL浓度为2.5%的二甲基亚砜(DMSO,对照组)和1mg/mL的R IP分别加入到200μL浓度1×108/mL的TECRA菌液,培养3h后,定量检测两组菌液中SEB的含量。将分别含有0.75% DMSO、100μg左氧氟沙星、40μg RIP和40μg RIP+100μg左氧氟沙星的菌液与50μL含有4%家兔红细胞的PBS液共同培养1h后,用酶标仪检测各组上清液中血红蛋白的含量。在ELLISA反应的5、10、30min三个时间点,RIP组菌液中SEB含量均明显低于DMSO组,两组数据具有极显著性差异(p<0.001);RIP组和左氧组菌液中的溶血素的含量明显低于空白组(p<0.05,p<0.01),联合用药组菌液中的溶血素含量明显低于空白组和RIP组,与左氧组相比差别不显著。说明RIP可以有效抑制金葡菌肠毒素和溶血素的产生,与抗生素联用有一定的协同功效。
- 邢庆昌郝立波王继芳
- 关键词：金葡菌毒素
- 聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的血液相容性被引量：1
- 2008年
- 目的:研究表明RNA Ⅲ抑制肽(RNA Ⅲ inhibiting peptide,RIP)是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂,作用机制与传统抗菌素明显不同,有着良好的应用前景。通过实验评价聚乳酸乙醇酸(polyaiticglycolic acid,PLGA)/RIP缓释微球的血液相容性。方法:实验于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。选择成年健康新西兰大白兔30只,按随机数字表法分组,每组6只。药品及试剂:PLGA,二甲基亚砜、MTT,DMEM,二硝基氟苯。实验方法:①PLGA/RIP微球制备:采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RIP纯品。再采用液相复乳法制备直径50～70mm的PLGA/RIP微球。②洗提液制备:PLGA/RIP微球粉末按1g/L在37℃无菌条件下用生理盐水洗提72h,制得洗提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得0.5g/L的稀释液。③溶血实验:以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5g/L洗提液的溶血率。④凝血实验及PLGA/RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验:以生理盐水为阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5g/L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响。⑤PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验:观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5g/L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响。结果:纳入动物30只,均进入结果分析。①溶血实验结果显示PLGA/RIP洗提液原液和0.5g/L洗提液的溶血率分别为3.24%和2.67%,两者的溶血率均<5%,符合医用生物材料的溶血实验要求。②凝血实验结果表明PLGA/RIP洗提液原液和0.5g/L洗提液对兔凝血时间无明显影响。③PLGA/RIP对各时间点兔凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间均无明显作用。④PLGA/RIP对兔白细胞、�
- 张小斌郝立波王继芳姚琦梁茂华
- 关键词：血液相容性生物材料
- 聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球组织相容性评价被引量：4
- 2008年
- 目的：在前期实验证实可防治葡萄球菌感染的RNAⅢ抑制肽（RNAⅢinhibitingpeptide,RIP）具有良好的组织相容性和安全性的基础上,进一步评价聚乳酸乙醇酸/RIP（PLGA/RIP）缓释微球的组织相容性。方法：实验于2005-10/2007-10在解放军总医院骨科研究所、临床药理研究所及医学动物实验中心完成。①PLGA/RIP微球制备：采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RIP纯品。再采用液相复乳法制备直径50~70μm的PLGA/RIP微球。②组织相容性实验：以急性全身毒性实验观察PLGA/RIP的全身毒性反应;MTT细胞毒性实验观察PLGA/RIP对细胞增殖的影响;肌肉内植入实验观察材料有无肌肉刺激反应;过敏实验观察PLGA/RIP的致敏情况;热原实验观察材料对体温的影响。结果：①急性全身毒性实验结果：腹腔注射PLGA/RIP洗提原液和50%的PLGA/RIP洗提液后动物无中毒反应,无死亡,体质量无明显变化。②MTT细胞毒性实验结果：两种洗提液的平均细胞增殖率均大于85%,细胞毒等级1级,不具有细胞毒性。③肌肉内植入实验结果：RIP和PLGA/RIP植入4周后,组织未见明显充血、变性或坏死。材料周围未见明显炎症细胞浸润,材料已被纤维囊包裹。④过敏实验结果：3组动物的平均原发刺激指数分别为0.38,0.33和0.31,3组间无显著差别。⑤热原实验结果：各组动物体温升高均在0.5℃以下,证实材料无热源性,符合热原实验的评价标准。结论：PLGA/RIP不引起全身毒性反应,无细胞毒性,未见免疫排斥,不引起过敏反应,无热源性,具有良好的组织相容性和安全性。
- 张小斌郝立波王继芳姚琦梁茂华
- 关键词：组织相容性动物实验生物材料
- 人工关节生物被膜感染的诊断研究进展被引量：5
- 2007年
- 生物被膜是引起人工关节感染的主要原因,与生物被膜相关的人工关节感染临床症状通常多不典型,难以与无菌性松动鉴别,诊断棘手,常常延误治疗,带来严重后果;常规的诊断方法敏感性较低。近年研究表明超声粉碎法结合现代显微技术可明显提高人工关节置换术后生物被膜感染的细菌检出率,分子生物学技术可迅速准确地诊断人工关节生物被膜感染。该文就人工关节关节置换术后生物被膜感染的诊断进展作一综述。
- 张小斌郝立波王继芳
- 关键词：生物被膜人工关节
- 固相合成法合成葡萄球菌RNAⅢ抑制肽的鉴定被引量：2
- 2009年
- 背景:葡萄球菌感染和生物被膜形成受群体感应机制调控。葡萄球菌RNAⅢ抑制肽可以干预葡萄球菌群体感应系统,阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路,进而抑制葡萄球菌的毒素分泌和生物被膜形成,防治葡萄球菌感染。目的:探讨葡萄球菌RNAⅢ抑制肽(RIP)的人工合成方法。设计、时间及地点:单一样本观察。于2006-08/11在北京宣武医院中心实验室完成。材料:Fmoc-AA、Pipredine、TFA、HMP购自美国MERCK公司;DCC、HOBT、DMAP购自美国ABI公司。方法:采用固相合成法合成RNAⅢ抑制肽,HPLC法纯化,进行质谱分析法、酸水解法、红外光谱分析法和内酰胺酶活性测定法检测。主要观察指标:①合成和纯化结果。②分子量测定结果。③组成成分分析结果。④氨基酸序列分析结果。⑤结构分析结果。⑥生物活性鉴定结果。结果:合成的RNAⅢ抑制肽纯度为97.42%,相对分子质量为914.37,与理论相对分子质量基本一致;与天然RNAⅢ抑制肽具有相同的氨基酸组分、氨基酸序列以及空间结构;生物活性检测证明合成RNAⅢ抑制肽具有和天然RNAⅢ抑制肽相同的功效,可以有效抑制细菌产生RNAⅢ。结论:采用固相合成法成功合成RNAⅢ抑制肽,鉴定分析证实合成的多肽和天然RNAⅢ抑制肽蛋白具有相同的结构和功能。
- 邢庆昌郝立波王继芳姬志娟王蓉
- 关键词：葡萄球菌
- 聚乳酸聚乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的制备及评价被引量：1
- 2009年
- 目的探讨聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)/RNA Ⅲ抑制肽(RIP)缓释微球的合理制备方法,测定其载药率和体外释药特征。方法采用改良复乳-溶剂挥发法制备PLGA/RIP缓释微球,观察其表征,测定缓释微球的载药率和包封率。采用高效液相色谱法测定不同时点PLGA/RIP的释放速度,观察PLGA/RIP微球的体外释药特点。结果采用改良复乳-溶剂挥发法制备的PLGA/RIP缓释微球粒径均匀、表面光滑,包封率约为(68.22±6.20)%,载药率为(15.35±3.26)%。PLGA/RIP释药动力学方程为y=31.016x+59.611,符合Huguchi方程。结论采用改良复乳-溶剂挥发法制备的PLGA/RIP缓释微球粒径均匀、表面光滑,包封率和载药率较高,体外释放动力学符合Huguchi方程,是理想的缓释载药体系。
- 郝立波张小斌王继芳王岩邢庆昌
- 关键词：聚乙醇酸RNA缓释
- RNAⅢ抑制肽抑制葡萄球菌对Hela细胞的黏附
- 2014年
- 背景:葡萄球菌导致的细菌感染和生物被膜形成可在骨科植入物或创口愈合时发生。受细菌群体感应机制调控,葡萄球菌RNAⅢ抑制肽可以干预葡萄球菌的群体感应系统,阻断葡萄球菌细胞间的信号传导通路,从而抑制葡萄球菌的生物被膜形成,防止葡萄球菌感染。目的:观察RNAⅢ抑制肽抑制表皮葡萄球菌对人宫颈癌上皮细胞黏附的效果。方法:体外培养人宫颈癌上皮细胞,实验分4组,空白组每孔加入DMSO的生理盐水,RNAⅢ抑制肽组加含RNAⅢ抑制肽的DMSO溶液,左氧组加入左氧氟沙星的水溶液,联合组用药剂量参照上述两组联合干预。通过组间对照的方法,对比研究表皮葡萄球菌在生理盐水、RNAⅢ抑制肽、左氧氟沙星及两药联合作用下对Hela细胞的黏附情况。结果与结论:空白组Hela细胞层表面有大量细菌黏附,而各用药组细菌黏附的数量均显著低于空白组(P<0.001),左氧组光点计数明显低于RNAⅢ抑制肽组(P<0.05),而联合组Hela细胞层表面黏附的细菌数量进一步降低(P<0.01)。结果证实,RNAⅢ抑制肽可以有效抑制表皮葡萄球菌对宿主细胞表面的黏附,并且与抗生素有协同作用。
- 邢庆昌郝立波王继芳
- 关键词：人工假体表皮葡萄球菌HELA细胞生物被膜
- RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层的血液相容性被引量：5
- 2008年
- 背景:将葡萄球菌的全面抑制剂RNAⅢ抑制肽和稳定、无毒、具有良好血液相容性的磷酸胆碱结合,制备出磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层,具有良好的药物传递性能,可减少生物材料表面细菌的黏附和生物被膜的形成,从而减少内置物的感染。目的:通过实验评价RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层的血液相容性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。材料:采用有机化学固相合成Fmoc法合成RNAⅢ抑制肽,以甲基丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸羟丙酯、甲基丙烯酸硅基丙酯和2-甲基丙烯酰氧基-2-三甲基氨基乙基磷酸酯为单体通过自由基溶液聚合合成可交联四元共聚物,将洁净的316L不锈钢片浸渍于5g/L的四元共聚物四氢呋喃和质量分数0.1的RNAⅢ抑制肽混合溶液中,制备聚合物涂层。方法:将聚合物涂层按1cm2/mL在37℃无菌条件下用生理盐水洗提72h,制得洗提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得50%洗提液。根据国家标准GB/T16886-1进行兔溶血实验、凝血实验、血小板聚集实验。主要观察指标:红细胞溶血率;凝血时间、凝血酶原时间、活化部分凝血酶时间;白细胞、红细胞和血小板数量;血小板聚集情况。结果:溶血实验结果显示RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层洗提液原液和50%洗提液的溶血率分别为4.88%和3.66%,两者的溶血率均<5%,符合医用生物材料的溶血实验要求。RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层洗提液原液和50%洗提液对兔全血凝固时间、凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间与生理盐水阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05);RNAⅢ抑制肽/磷酸胆碱基细胞膜仿生药物涂层洗提液原液组白细胞、红细胞和血小板数量及血小板聚集时间与50%洗提液组比较差异无显著性(P>0.05)�
- 郝立波张小斌邢庆昌王继芳姚琦梁茂华
- 关键词：血液相容性
- 兔膝关节置换假体感染模型的建立被引量：3
- 2009年
- 目的制作兔膝关节置换假体感染模型，为人工关节假体感染研究提供依据．方法成年新西兰大白兔32只，雌雄不限，体重2．5-3．5kg，平均3．0kg。将采用超高分子量聚乙烯（UHMWPE）制成的兔膝关节胫骨假体植入兔膝关节。32只动物随机分为四组，关节置换术后1周分别向膝关节内注入无菌生理盐水、1×10^4CFU、1×10^6CFU和1×10^8CFU的ATCC35984葡萄球菌菌液，模拟膝关节置换假体感染。1周后取材，进行感染率和炎症程度评定、影像学和病理学检查、细菌学评定。结果接种1×10^6CFU的细菌足以致所有动物关节感染，超过此剂量则会引起败血症，细菌接种量在0-1×10^8CFU时感染率和接种细菌量呈正相关（R^2=0．9939）。大体观察感染膝关节充满脓液，关节滑膜红肿。激光共聚焦显微镜观察：假体表面黏附大量细菌，并有片状胞外黏质物。病理学检查为急性炎症反应。细菌定量分析发现关节液内细菌量明显高于假体表面和组织内细菌量。结论制作的兔膝关节置换假体感染模型较好地模拟了临床膝关节感染情况，是一种较为成功的膝关节置换假体感染模型，可用于人工关节假体感染预防、诊断和治疗的研究。
- 郝立波邢庆昌王岩王继芳
- 关键词：葡萄球菌感染
- 复合人工骨的半膝关节系统的仿生制造
- [目的]探讨一种从 CT 图像反求建模,制造复合大段活性人工骨的人工半膝关节的方法。[方法]采用狗股骨下段为对象,应用自主开发的图像格式软件处理 CT 数据,经矢量化后,重建人工关节面、股骨下段三维模型,同时在股骨模型内...
- 张涛王臻尹庆水张余卢建熙李涤尘贺健康
- 关键词：人工骨三维模型仿生制造
- 文献传递
