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国家高技术研究发展计划(2003AA241110): 作品数：46 被引量：256H指数：10; 相关作者：刘湘涛谢庆阁田宏尚佑军宋长绪更多>>; 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所中国农业科学院哈尔滨兽医研究所西北农林科技大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建被引量：11: 2006年; 通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.; 龚真莉刘湘涛刘磊尚佑军尹双辉田宏郑海学陈国栋; 关键词：口蹄疫病毒

猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立被引量：17: 2006年; 通过条件优化，以定量的10倍系列稀释质粒pMD—ORF2（含PCV2-ORF2全基因）为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线，建立了猪圆环病毒2型（PCV2）的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1．0×10^6拷贝／μL，线性范围为10^9～10^0，达10个数量级；对起始浓度为1．0×10^6、1．0×10^5、1．0×10^4拷贝／μL的标准品的最终实际测得值分别为1．000×10^6、0．935×10^5、0．987×10^4拷贝／μL，变异系数分别为2．527％、2．067％、2．092％。该方法的检测灵敏度与套式PCR（nPCR）相当，甚而高于常规PCR。; 张福良宋长绪杨鸣琦朱道中蒋智勇林志雄刘燕玲宋志军; 关键词：猪圆环病毒2型荧光定量PCR TAQMAN探针

NDV F_(48) E_9和La Sota毒株F蛋白B细胞抗原优势表位区段的鉴定和免疫原性比较被引量：4: 2006年; 对预测的NDVF48E9强毒株和LaSota疫苗株F蛋白优势表位进行比较分析。根据预测结果设计克隆了两个毒株F蛋白各4段表位区,分别将每个毒株的4段表位区连接到原核表达载体上进行了体外表达,鉴定得到4段多肽的大小分别是P1∶8.0kDa、P2∶10.8kDa、P5∶13.5kDa、P6∶10.5kDa。应用F48E9和LaSota特异性抗血清对表达各肽段进行了抗原性鉴定,P1、P2、P5、P6段均呈阳性反应,表明其中含有线性B细胞表位。其中F48E9P5(FP5)和LaSotaP5(LP5)与血清反应时有明显差异。FP5和LP5与鸡IL-18成熟肽(mChIL-18)蛋白以不同组合免疫SPF鸡,ELISA检测各组的免疫活性,结果发现FP5与mChIL-18蛋白联合免疫组的抗体水平高于LP5与mChIL-18蛋白联合免疫组、FP5、LP5单独免疫组;用NDVF48E9株攻毒结果显示FP5具有20%的保护率,说明P5段与F蛋白免疫原性相关,而LaSotaP5不能抵抗强毒的攻击,证明该表位区域在两个毒株之间存在着免疫原性差异。; 张海玲刘培欣曹殿军闫丽辉孙建宏冉多良; 关键词：新城疫病毒融合蛋白抗原表位肽段

来源于E.coli和CHO表达系统的重组人β-NGF性质比较被引量：7: 2006年; 基于原核表达系统极难表达具有正确三级结构的重组人β神经生长因子(rhNGF-β),E.coli是否能作为其工业化生产菌株存在争议。为此,将构建于E.coli体系,经表达体外复性后的rhNGF-β与中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达体系分泌的rhNGF-β,运用HPLC、SDS-PAGE、质谱、N-末端分析等手段以及鸡胚背根神经节(DRG)、PC12细胞体外测活法对制备产物进行分析、测定。结果表明:二者具有一致的理化性质和生物学活性,HPLC纯度均大于95%、生物学比活均不低于1.8ng/U;经添加赋型剂制成冻干粉后,在温度37℃±2℃、相对湿度75%±5%条件下进行3个月加速试验,活性均不变。说明E.coli表达体系可生产质量均一、高生物学活性的rhNGF-β,且具有明显成本优势。; 姜静姜桂香; 关键词：复性稳定性

连续热裂解法大规模制备质粒DNA: 作为新一代治疗方法的基因治疗和核酸疫苗进展迅速,显示出了广阔的应用前景,质粒DNA作为基因治疗和核酸疫苗的常用载体被广泛应用,因而对质粒DNA的需求量很大。大规模制备质粒 DNA的技术对基因治疗和核酸疫苗的应用和发展是必...; 朱开春王宾; 文献传递

一种分离猪Ⅱ型圆环病毒的新方法: 设计合成一对扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)全基因组的特异性引物,从2份患断奶后仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中,PCR扩增和克隆了2株PCV2全基因组。将所测序列与已公布的PCV毒株序列进行同源性比较。结...; 蒋智勇宋长绪黄忠刘燕玲张春红王浩文蔡汝健; 关键词：克隆; 文献传递

牛疱疹病毒1型作为活病毒载体的研究进展被引量：4: 2005年; 牛疱疹病毒1型(BHV 1)是牛的易感病毒,作为大分子量DNA病毒,它具有插入并表达外源基因成为活病毒载体的潜力。随着对BHV1分子生物学的深入研究,BHV1已被广泛用于研究宿主范围狭窄而且安全的活病毒载体。; 郭巍朱远茂薛飞相文华

猪Ⅱ型圆环病毒ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2004年; 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)0RF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(942 bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒,命名为pMD-ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD／gⅢC,得到重组子,命名为pBAD／gⅢ-ORF1。测序分析表明克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性高达99.5％。与其它PCV2核苷酸序列同源性为92.1％-99.9％,推导的氨基酸序列同源性为90.2％-99.5％。同时,测序结果表明所克隆的ORF1准确插入pBAD／gⅢC的多克隆位点,未改变读码框架。用L-Arabi-nose进行诱导表达,收集茵液进行SDS-PAGE和Western blotting分析,显示PCV2 ORF1在pBAD／gⅢC中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为4.1万。; 蒋智勇宋长绪王贵平高向阳赵亚华; 关键词：ORF1基因基因克隆大肠杆菌基因表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株ORF6基因重组腺病毒的构建: 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的美洲株ATCC VR-2332设计并合成针对PRRSVORF6基因的两条引物,通过RT-PCR方法从广东省送检的可疑病料中扩增得到大小为550bD cDNA片段,...; 王旭荣宋长绪杨增岐王贵平张春红祝卫国黄忠; 关键词：重组腺病毒; 文献传递

国家高技术研究发展计划(2003AA241110)