江苏省自然科学基金(BK2007051)
- 作品数：11 被引量：65H指数：4
- 相关作者：王剑文许云峰陈晶磊张臻高立文更多>>
- 相关机构：苏州大学南京大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 青蒿素与过氧化物酶作用的荧光研究
- 2009年
- 目的:研究青蒿素与过氧化物酶间的作用关系,建立青蒿素荧光检测方法。方法:以吡罗红B为指示剂,用荧光降低法研究青蒿素与辣根过氧化物酶的相互作用。结果:青蒿素与辣根过氧化物酶之间的催化反应米氏常数Km为2.72×10-5mol/L,最大反应速度vmax为1.74×10-4mol/(L·s),催化常数Kcat为24.27s-1。反应作用位点分别是青蒿素内过氧基团与酶中心离子Fe。该反应可用于对黄花蒿药材中青蒿素含量的测定,测定工作曲线为c=0.1684?F-0.8143(cartemisinin单位为1.0×10-7mol/L),相关系数r=0.9965,3σ检出限为3.58×10-8mol/L。结论:青蒿素与辣根过氧化物酶之间的作用具有酶与底物反应的特征,该特征反应可用于对黄花蒿药材中青蒿素含量的测定。
- 张犇邹婷谢洪平王剑文
- 关键词：青蒿素过氧化物酶荧光猝灭
- 中国弯颈霉提取物抗氧化和抗肿瘤体外活性研究被引量：8
- 2009年
- 中国弯颈霉(Tolypocladium sinense)分离自冬虫夏草,其生长最适温度25～28℃,最适pH6～7。在液体培养基(葡萄糖4%、蛋白胨0.5%、酵母膏1%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%)中,经过28℃下摇床(150r/min)培养4～10d后,菌丝体生物量达8.49～9.73g/L。其菌丝体石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇和蒸馏水提取率分别为3.51%、1.62%、4.84%、23.33%,菌丝体多糖提取率为5.31%。各提取物对DPPH自由基均具有清除作用,2mg/ml多糖具有较强的清除作用,清除率为49.13%;菌丝体多糖(0.08mg/ml)能显著地清除羟自由基,清除率为82.5%。MTT法检测发现乙酸乙酯提取物具有较强的抑制白血病细胞增殖作用;作用于K562和SHI-1细胞2d后,乙酸乙酯提取物IC50分别为26.55、17.75μg/ml;该提取物对正常细胞(人PBMC和小鼠骨髓细胞)的抑制作用较弱;AO/EB双染和TUNEL法检测提示菌丝体的乙酸乙酯提取物可以诱导K562细胞凋亡。上述实验结果表明,中国弯颈霉具有抗氧化和抗肿瘤方面的应用开发前景。
- 高立文张臻周建芹王剑文
- 关键词：抗氧化细胞毒性
- 内生青霉菌纤维素酶辅助提取槐米总黄酮被引量：4
- 2009年
- 研究内生青霉菌(Penicilliumsp.B-4)胞外纤维素酶在槐米总黄酮提取中的辅助应用。内生青霉菌在起始pH4.5的综合马铃薯培养基中,150 r/min,40℃下摇瓶,培养7 d,具有较高的纤维素酶比活力(3.57 U/mL)。槐米干粉投入青霉菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH对槐米总黄酮提取率的影响,发现槐米干粉以酶料比40∶1(mL/g)加入粗酶液中,在pH4.5、温度40℃下酶解处理1 h后,黄酮提取率可达12.2%,比常规提取率增加了38.7%。内生菌纤维素酶辅助提取法为槐米黄酮提取的可行新方法。
- 许云峰周建芹陈晶磊王剑文
- 关键词：纤维素酶内生青霉菌总黄酮
- 蒜氨酸酶的固定化及其酶学性质研究被引量：3
- 2009年
- 为了提高蒜氨酸酶的稳定性并实现酶的反复利用,研究了影响蒜氨酸酶固定化的因素及固定化蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的固定化以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定化的最适条件为:戊二醛浓度4%,给酶量20.2U,交联时间2h。固定化蒜氨酸酶的最适pH值7.0,最适温度35℃,米氏常数Km7.9 mmol/L,操作稳定性比较好,连续使用10次后酶活力损失低于10%。
- 周建芹王剑文
- 关键词：蒜氨酸酶固定化酶学性质
- 定向固定化葡萄糖氧化酶及其酶学性质的研究被引量：4
- 2009年
- 戊二醛将伴刀豆球蛋白(ConA)和载体壳聚糖膜交联,然后利用ConA与葡萄糖氧化酶糖链的特异性结合作用,实现酶的定向固定化。定向固定化的最适条件为戊二醛浓度0.1%、ConA浓度0.02mg/ml、葡萄糖氧化酶浓度0.08mg/ml。定向固定化葡萄糖氧化酶的最适pH4.0、最适温度57℃,米氏常数K_m为15.84mmol/L,与游离酶及非定向固定化葡萄糖氧化酶比较,定向固定化葡萄糖氧化酶的最适pH值向酸性范围发生了偏移并有更宽的pH值适用范围,最适温度提高,与底物的亲和力较大。
- 周建芹陈韶华王剑文
- 关键词：葡萄糖氧化酶伴刀豆球蛋白
- 以伴刀豆球蛋白为介质定向固定化脲酶的研究被引量：6
- 2008年
- 将戊二醛将伴刀豆球蛋白(ConA)和壳聚糖载体交联,然后利用ConA与脲酶糖链的特异性结合作用,实现脲酶的定向固定化。定向固定化的最适条件为戊二醛浓度3.5%、ConA浓度1 mg/mL、ConA溶液pH值7.0、脲酶浓度0.4 mg/mL。定向固定化脲酶的最适pH 5.0～6.0、最适温度77℃、米氏常数Km11.76 mmol/L,与游离酶及非定向固定化脲酶比较,定向固定化脲酶的最适pH向酸性范围发生了偏移并有更宽的pH适用范围,最适温度提高,与底物的亲和力较大,且有较好的操作稳定性。
- 周建芹陈韶华王剑文
- 关键词：脲酶伴刀豆球蛋白
- 琥珀酰壳聚糖的制备及其与HL-60细胞亲和性的研究被引量：2
- 2009年
- 以粘均相对分子质量700000和17500的高脱乙酰度壳聚糖为原料,通过吡啶催化制备N-琥珀酰壳聚糖(N-SUCC-CTS),通过甲磺酸保护氨基制备O-琥珀酰壳聚糖(O-SUCC-CTS)。应用异硫氰酸荧光素黄(FITC)对合成的2种琥珀酰壳聚糖进行标记,荧光标记率分别为0.97%(O-SUCC-CTS1.75)、0.66%(N-SUCC-CTS1.75)和0.34%(N-SUCC-CTS70)。用流式细胞仪测定琥珀酰壳聚糖与人白血病HL-60细胞的结合能力,亲和性能力顺序为O-SUCC-CTS>N-SUCC-CTS>N-SUCC-CTS。O-SUCC-CTS是一种很有潜力的抗肿瘤靶向载体。
- 欧阳海燕高立文王剑文孙晓飞
- 关键词：壳聚糖琥珀酸酐FITCHL-60细胞细胞亲和性
- 酶法辅助强化中药提取过程研究进展被引量：20
- 2008年
- 利用酶法强化中药提取已成为中药开发的重要手段,酶法提取因其反应特异性强、高效、条件温和、易于控制等优点而具有广阔的应用前景。介绍了应用于中药材提取过程中的酶法辅助技术,归纳了酶法在中药材重要活性成分提取、中药提取液的澄清纯化中的应用,分析了酶法辅助提取对中药活性组成的影响,提出了酶法与超声技术的结合应用方法。
- 王剑文许云峰周建芹陈晶磊
- 关键词：中药材酶法
- 芦荟原生质体的电融合研究被引量：2
- 2009年
- 目的：探讨芦荟原生质体电融合条件，为芦荟种质改良提供细胞工程技术。方法：以芦荟无菌苗为材料，用化学酶解法处理芦荟幼叶得到原生质体，并且进行电融合。结果：在交流电电场强度（E）1．60×10^5V／m作用时间20s，直流脉冲强度（E）0．90×10^6V／m、脉冲宽幅30μs，施加1次脉冲后，可使细胞有效融合率达到17．78％。结论：芦荟原生质体经过一定电场刺激，可实现原生质体的融合，供抗感染药用植物资源的种质改良提供参考。
- 邢朝云王剑文
- 关键词：芦荟原生质体电融合
- 内生镰刀菌漆酶辅助提取槐米中总黄酮的研究被引量：15
- 2008年
- 目的研究内生真菌胞外漆酶在槐米总黄酮提取中的应用。方法内生镰刀菌在起始pH7.0的综合马铃薯培养基中,20℃下摇瓶培养6d,具有较高的漆酶活力(36.1U/mL)。槐米干粉投入真菌发酵液中进行酶解处理,比较酶料比、酶解温度、酶解时间和酶解液pH值对槐米总黄酮提取率的影响。结果槐米干粉以酶料比40∶1加入粗酶液中,在pH7.0、20℃下酶解处理1h后,总黄酮提取率可达11.4%,比常规提取法提高了28.7%。结论内生菌漆酶辅助提取法为槐米总黄酮提取的可行新方法。
- 许云峰张臻周建芹陈晶磊王剑文
- 关键词：槐米漆酶总黄酮
