广东省教育厅重点学科建设基金(GX0301)
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- 抑癌基因PTEN抑制乳腺癌ZR-75-1细胞转移作用机制的探讨
- 2008年
- 目的探讨抑癌基因PTEN抑制乳腺癌细胞ZR-75-1转移的作用机制。方法用脂质体介导法分别将野生型PTEN质粒(wt)、磷酸酶活性缺失的PTEN质粒(G129R)和只具蛋白磷酸酶活性的PTEN质粒(G129E)转染PTEN基因缺失的乳腺癌细胞ZR-75-1。转染细胞以嘌呤霉素筛选后,用PCR和Western-blot分别检测PTEN基因及其蛋白;通过黏附、侵袭实验,比较3种质粒转染细胞和未转染细胞之间的黏附、侵袭能力的差异;用Western-blot法检测各组转染细胞总的黏着斑激酶(FAK)和磷酸化黏着斑激酶(P397-FAK)的表达水平;以免疫组化法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和E-钙连素(E-Cd)的表达,并用RT-PCR检测各组转染细胞的p53 mRNA水平。结果3种质粒均成功转染ZR-75-1细胞,并证实3种转染细胞内均有PTEN基因存在及PTEN蛋白表达;wt、G129R、G129E等3种质粒转染的细胞黏附抑制率分别为65.7%、8.8%和43.5%;侵袭抑制率分别为70.4%、6.9%和63.5%。将wt或G129E转染细胞的黏附抑制率及侵袭抑制率与G129R转染细胞的比较,均有显著性差异(P<0.05);但wt与G129E转染细胞比较,均无显著性差异(P>0.05)。3种转染细胞总FAK水平虽无显著性差异(P>0.05),但wt和G129E转染细胞其P397-FAK和MMP-2水平都显著低于G129R转染细胞(P<0.05)。3种转染细胞间的E-Cd水平未见显著差异。RT-PCR分析显示,wt、G129E和G129R3种转染细胞p53 mRNA水平无显著性差异,但均显著高于未转染细胞。结论野生型PTEN基因所表达的蛋白具脂质和蛋白双特异磷酸酶活性,对乳腺癌细胞ZR-75-1的转移具有抑制作用,其机制与磷酸酶活性有关,其中蛋白磷酸酶活性可能起主要作用。
- 林观平黄金文李祥勇熊亮周克元
- 关键词：抑癌基因PTEN
