浙江省自然科学基金(Y3110268)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：浙江农林大学浙江省农业科学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技攻关计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鹅胆固醇7α-羟化酶基因克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 为进一步研究胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)在胆汁酸合成和胆固醇代谢过程中的调节机制,采用RT-PCR和RACE方法从鹅(Anser anser)肝组织克隆CYP7A1基因全长cDNA序列,亚克隆其CDS区并构建原核表达载体pET-28a-cyp7α1。重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导表达。经His-Bind纯化试剂盒纯化的His-CYP7A1免疫Bal b/c小鼠,制备小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,Western blotting验证His-CYP7A1免疫原性和抗体的特异性。序列分析结果表明,该蛋白与鸡、大鼠、人、短尾猊、小鼠的CYP7A1蛋白氨基酸序列同源性分别为93%、66%、67%、68%、66%。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白His-CYP7A1得到正确高效表达,该His-CYP7A1分子质量约为59ku,经纯化获得高纯度重组His-CYP7A1蛋白。制备了小鼠抗鹅CYP7A1多克隆抗体,效价达1∶104。Western blotting检测表明,该蛋白能够被小鼠抗His抗体和小鼠抗CYP7A1抗体所识别,小鼠抗CYP7A1多克隆抗体具有较好的特异性。试验结果为进一步研究CYP7A1基因结构和CYP7A1在鹅肝脏脂类代谢中的作用提供了基础和技术手段。
- 杜雪岳万福赵阿勇王晓杜
- 关键词：分子克隆原核表达多克隆抗体
- 胆固醇7α-羟化酶基因研究进展被引量：4
- 2013年
- 胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。
- 杜雪李进军卢立志赵阿勇
- 关键词：动物学基因表达调控胆汁酸代谢
