国家自然科学基金(30171063) 作品数:18 被引量:36 H指数:4 相关作者: 周云峰 周福祥 谢丛华 刘诗权 骆志国 更多>> 相关机构: 武汉大学 华中科技大学 郧阳医学院附属人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
端粒酶抑制剂叠氮胸苷对HeLa细胞放射性DNA损伤修复的影响 被引量:3 2007年 背景与目的:研究端粒酶抑制剂叠氮胸苷(Azidothymidine,AZT)对人宫颈癌HeLa细胞DNA放射性损伤修复的影响,探讨端粒酶在放射诱导的DNA损伤修复中的作用。材料与方法:实验分为空白组,AZT组(400μmol/LAZT处理HeLa细胞24h),放射组(2Gy60Coγ射线照射),AZT放疗组(400μmol/LAZT处理HeLa细胞24h后,用2Gy60Coγ射线照射)。照射后于0、5、10、30、60、180及360min分别收集细胞,用端粒重复序列扩增法(PCR-based telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-联合酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)即TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性。用单细胞凝胶电泳法检测DNA单链断裂损伤,以彗尾DNA百分含量表示DNA单链断损伤量。结果:HeLa细胞受2Gy60Coγ射线照射后10min,端粒酶活性即开始增加,60min后增加明显,360min时达到最高。AZT处理HeLa细胞后,能使端粒酶活性下降约50%,而且能抑制HeLa细胞照射后端粒酶活性的增加(P<0.05)。单细胞凝胶电泳实验表明,2Gy60Coγ射线照射HeLa细胞后0~10min,AZT放疗组与放射组的彗尾DNA百分含量无明显差异(P>0.05),照后30~360minAZT放疗组彗尾DNA百分含量均高于放射组(P均<0.05)。结论:AZT能阻抑照射后30~360min DNA单链断裂的修复,说明端粒酶可能在放射性DNA损伤修复中具有重要作用。 高敏 周福祥 谢丛华 肖创映 周云峰关键词:叠氮胸苷 HELA细胞 端粒酶 DNA修复 AZT联合放射线对人喉鳞癌裸鼠移植瘤的作用 被引量:2 2009年 目的:观察逆转录酶抑制剂叠氮胸苷(齐多夫定,Azidothymidine,AZT)联合放射线对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法:建立人喉鳞癌荷瘤裸鼠模型,应用AZT联合放射线治疗人喉鳞癌裸鼠移植瘤,观察其对肿瘤体积、端粒酶活性、hTERT蛋白表达效率及凋亡的影响。结果:与对照组相比,放射组和AZT+放射组肿瘤生长速度受到明显抑制(P<0.05),提示放疗、AZT联合放疗均能抑制肿瘤生长,且后者抑瘤率显著高于前者(P<0.05)。端粒酶活性(TA)及hTERT蛋白检测结果一致,即放射组>对照组>AZT+放射组>AZT组,提示低剂量放疗能够引起肿瘤细胞端粒酶活性的升高,而AZT能够有效抑制抑制辐射所致的端粒酶活性增高。凋亡指数为AZT+放射组(9.60±0.97%)>单纯放射组(6.91±1.65%)>AZT组(5.17±0.71%)>对照组(0.77±0.27%)。结论:AZT联合放射线能有效的抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,AZT能增加肿瘤的放射敏感性。 刘艳屏 周福祥 徐禹 张喜梅 黄成虎 廖正凯 谢丛华 刘诗权 周云峰关键词:端粒酶抑制剂 喉鳞癌 以端粒酶为靶点的肿瘤治疗进展 被引量:2 2005年 端粒酶是维持端粒长度的逆转录酶,对细胞增殖、衰老及永生化和癌变起重要作用,在多数肿瘤中表达增高。以端粒酶为靶点的反义寡核苷酸、核肽酸及锤头状核酶已成为潜在的肿瘤抑制剂。现就这方面的研究进展作一综述。 纪雪梅 周云峰关键词:肿瘤 核糖核酸酶类 不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系 被引量:1 2005年 目的:研究人类不同癌细胞株放射敏感性与端粒长度的关系,寻求放射敏感性预测的可行指标。方法:以不同层次的人类癌细胞株为实验对象,既包括鳞癌(Hep-2)、腺癌(ZR-75-30、MCF-7、MDA-MB-435S、T-47-D、F539-1590)、胶质瘤U251,又含有同一病理类型的不同亚株(5种不同的乳腺癌细胞株),还包括辐射诱导建立的放射抗拒细胞株(Hep-2R),用克隆形成实验拟合细胞存活曲线测定8株细胞的放射生物学参数,Southernblotting法测量各细胞株的端粒限制片断长度(TRF),分析放射敏感性与端粒限制片断长度的关系。结果:8株细胞的放射敏感性各不相同,Hep-2(人喉鳞癌细胞株)的SF2=0.4148,U251(人恶性胶质瘤细胞株)的SF2=0.7520,腺癌细胞株介于二者之间;端粒长度在放射抗拒细胞株Hep-2R中达11.12kb,数倍长于鳞癌亲本株或腺癌细胞株。端粒长度与放射敏感性参数SF2(r=0.786,P<0.05)、D0(r=0.905,P<0.01)均成正相关关系。结论:端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性描述参数SF2、D0成正相关关系,故端粒长度与人癌细胞株的放射敏感性成负相关关系,它可以作为放射敏感性预测指标之一。 曹振 周云峰 骆志国 周福祥 谢丛华 代静 潘东风 张弓 刘诗权关键词:端粒 细胞存活曲线 The Effects of Reverse Transcriptase Inhibitor on Radiosensitization of Human Malignant Glioma Cells 2005年 Jing DAI Fu-Xiang ZHOU Cong-Hua XIE Zhi-Guo LUO Yun-Feng ZHOU~Δ(Department of Radio-Chematherapy of Zhongnan Hospital and Cancer Research Center, Wuhan University, Wuhan 430071, China)关键词:AZT 人喉鳞癌细胞端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性的关系 被引量:1 2005年 背景与目的:肿瘤细胞的端粒长度、端粒酶活性与其增殖能力和恶性程度关系密切,而且端粒和端粒酶还可能参与放射诱导的DNA损伤的修复;由此推测肿瘤细胞的端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性之间可能存在联系。本研究旨在探讨人喉鳞癌细胞端粒长度、端粒酶活性与放射敏感性的关系。方法:体外长期传代的人喉鳞癌细胞系Hep鄄2经0、2、4、8、12Gy剂量照射3次后的存活后代体外培养20代,以克隆形成实验测定其放射敏感性参数SF2,Southernblot法测定其端粒长度(meanlengthoftelomererestrictionfragments,TRF),TRAP鄄ELISA法测定其端粒酶活性(telomeraseactivity,TA)。结果:人喉鳞癌细胞不同放射剂量存活后代的SF2:0.47~0.64,TRF:3.76~9.43kb,TA:2.606~1.761,且它们各自的SF2、TRF、TA存在差异(P均<0.05);而且,SF2与TRF呈现明显的正相关(r=0.921,P<0.01),SF2与TA呈现明显的负相关(r=-0.929,P<0.01),TRF与TA呈现明显的负相关(r=-0.944,P<0.01)。结论:人喉鳞癌细胞接受不同放射剂量存活后代的放射敏感性与其端粒长度和端粒酶活性具有一定的相关性,提示端粒长度与端粒酶活性检测对预测肿瘤细胞放射敏感性有一定意义。 肖创映 周福祥 刘诗权 谢丛华 代静 周云峰关键词:喉肿瘤 HEP-2细胞系 端粒长度 端粒酶活性 RNA干扰抑制端粒酶反转录酶联合γ射线对人喉癌细胞的作用 被引量:1 2009年 目的观察人端粒酶反转录酶特异性干扰载体(pshRNA-hTERT)联合放射线在细胞和动物模型水平上对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,研究抑制hTERT在放射增敏中的作用。方法细胞水平:联合pshRNA-hTERT和γ射线作用于人喉癌细胞Hep-2,用TRAP-PCR,ELISA法检测端粒酶活性,彗星电泳检测DNA损伤;动物水平:建立Hep-2和Hep-2R移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-hTERT并联合放射线观察对移植瘤的抑制作用,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤内hTERT蛋白的表达。结果转染pshRNA-hTERT后Hep-2细胞hTERT的mRNA表达抑制率为60.78%;pshRNA-hTERT不仅能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性,而且抑制照射后DNA损伤的修复;在移植瘤模型中,pshRNA-hTERT与放射线有协同抑制移植瘤生长的作用(Hep-2:EPO=1.79;Hep-2R:EPO=2.01)。结论pshRNA-hTERT在细胞和动物实验水平均具有放射增敏作用,表明抑制端粒酶及其亚单位可以增加在体肿瘤的放射敏感性,这为喉癌的基因放疗研究提供了依据。 胡柳 周福祥 雷晗 张喜梅 邱慧兵 戴静 黄成虎 谢丛华 刘诗权 周云峰关键词:DNA损伤修复 移植瘤 端粒酶抑制剂联合辐射对人胶质瘤细胞存活的影响 被引量:4 2004年 目的 :观察端粒酶抑制剂AZT联合60 Coγ 射线对人脑胶质瘤细胞U2 5 1端粒酶活性及细胞存活的影响 ,探讨AZT的放射增敏作用。方法 :实验分 4组 :A、空白对照组 ;B、放射组 ;C、加药组 ;D、加药放射组。用克隆形成分析法观察AZT对U2 5 1细胞放射敏感性的影响 ,通过拟合生存曲线计算放射增敏比SERD0 、SERDq、SERSF2 。用端粒重复序列扩增 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) PCR ELISA方法检测端粒酶活性的动态变化。结果 :照射前经 0 .8mmol·L-1AZT处理 2 4h明显降低了 2Gyγ 射线照射后U2 5 1细胞的存活分数 ,SERD0 、SERDq、SERSFM2 分别为 1.2 94 ,1.2 5和 1.36 5 ;表明AZT具有放射增敏的作用 (P <0 .0 5 )。端粒酶活性分析显示A、B、C、D组细胞的端粒酶活性分别为 1.5 6 3± 0 .0 2 2 ,1.92 3± 0 .188,1.0 5 7± 0 .12 6 ,1.2 0 9± 0 .15 3,各组之间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :AZT能明显抑制 2Gy照射诱导的U2 5 1细胞端粒酶活性升高 ,并显著增加U2 5 1细胞的放射敏感性 ;AZT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。 戴静 周福祥 肖创映 刘诗权 潘东风 骆志国 周云峰关键词:端粒酶 逆转录酶抑制剂 细胞系 胶质瘤 人不同乳腺癌细胞株端粒酶活性与放射敏感性的关系 被引量:1 2004年 目的 :通过检测人不同乳腺瘤细胞株的端粒酶活性及其 2Gy的存活分数 (SF2 )的相关性 ,探讨端粒酶活性是否能成为检测肿瘤细胞放射敏感性的一个指标。方法 :8株人不同肿瘤细胞株 (Hep 2、Hela、U2 5 1、ZR 75 30、MCF 7、MDA MB 4 35S、T 4 7 D、F5 39 15 90 )在指数增长期留取细胞 ,然后分别用TRAP ELISA检测其端粒酶活性 ,克隆形成实验检测其放射敏感性参数SF2 。结果 :8株人乳腺癌细胞株端粒酶活性各不相同 (P <0 .0 1) ,其中ZR 75 \|30端粒酶活性检测呈阴性 ,余 7株细胞端粒酶活性检测呈阳性 ,SF2 亦不相同 (P <0 .0 1) ,但端粒酶活性与SF2 之间无明显的直线相关关系 (P =0 .341)。结论 :8株人不同肿瘤细胞株的端粒酶活性及其放射敏感性各不相同 ,但其端粒酶活性不能成为检测其放射敏感性的指标。 潘东风 周福祥 谢丛华 刘诗权 彭纲 戴静 骆志国 肖创映 周云峰关键词:端粒酶 乳腺癌 顺铂和放疗联合应用在人喉鳞癌细胞中相互作用的研究 2005年 目的 研究CDDP和放疗联合应用于人喉鳞状细胞癌细胞的相互作用,以探讨放、化疗两种处理方式应用的顺序及与端粒酶活性的关系。方法 Hep 2 细胞分别经放化疗不同剂量及顺序处理,实验设对照组、CDDP组、放疗组、CDDP+放疗组及放疗+CDDP 组,分别用 MTT 法、端粒酶活性检测PCR ELISA法及聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法分析各种处理后的细胞存活率及端粒酶活性的变化。结果 CDDP+放疗组比同等处理剂量的放疗+CDDP组的细胞存活率低,且有显著差异。CDDP及放疗均能使端粒酶活性明显增高,并表明为浓度依赖性。但在加入另一种处理后,端粒酶活性降低,其降低的程度与细胞存活率的变化一致(r=0.9445,b=13.61)。结论 对Hep-2 细胞先化疗后放疗的治疗效果优于先放疗后化疗,联合治疗后的端粒酶活性可反映治疗效果。 纪雪梅 周云峰 周福祥 谢丛华 房明浩 夏明童关键词:细胞存活率 端粒酶活性 顺铂 放疗 喉肿瘤