江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目(06-B-021)
- 作品数：5 被引量：21H指数：2
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- 应用定量PCR方法动态检测膀胱癌患者尿脱落细胞中survivin mRNA的表达及其临床意义被引量：1
- 2009年
- 背景与目的:膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,目前临床上缺乏理想的早期诊断方法。本研究通过检测膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)患者手术前后尿脱落细胞中survivin mRNA的表达,探讨其在BTCC患者早期诊断和术后监测肿瘤复发中的意义。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测10例健康志愿者、15例膀胱炎患者和30例初发BTCC患者术前及术后1周、1个月、6个月定期随访至15个月尿脱落细胞中survivin mRNA的表达情况。结果:30例BTCC患者术前尿脱落细胞中survivin mRNA的相对拷贝数为96.01±42.33,明显高于正常对照组及膀胱炎组(P<0.05)。术后1周(25.30±1.51)较术前显著下降(P<0.05);术后1个月(13.20±1.49)、术后6个月(13.90±1.36)与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);随访至15个月,3例复发患者复发时的相对拷贝数为97.83±27.47,与术后6个月相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:尿脱落细胞中survivin mRNA的表达作为诊断膀胱移行细胞癌的指标敏感性高,术后动态随访survivin mRNA表达变化可监测复发。
- 孙健侯建全何军何雪峰温端改
- 关键词：膀胱移行细胞癌SURVIVIN实时荧光定量
- 原位膀胱癌动物模型的建立及应用被引量：15
- 2007年
- 背景与目的:表浅性膀胱癌术后膀胱灌注丝裂霉素等药物进行化疗,肿瘤仍有较高的复发率。有研究报道往膀胱内灌注小型干扰RNA(siRNA)可抑制裸鼠膀胱肿瘤生长。本研究目的是建立荷人膀胱癌的原位动物模型,通过磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)监测肿瘤生长过程,并利用此模型评价靶向Survivin的干扰质粒对丝裂霉素的增效作用。方法:直视下经尿道机械损伤BALB/c裸鼠膀胱粘膜,将人膀胱癌细胞T24经尿道种植于25只裸鼠膀胱,建立荷人膀胱癌原位动物模型。以钆-二乙三胺五乙酸作为膀胱造影剂,用MRI监测肿瘤的生长,同时取裸鼠膀胱组织标本行HE染色进行病理学检查。同法建立膀胱癌裸鼠动物模型18只,分为对照组、丝裂霉素组和联合组3组,每周两次膀胱灌注,联合组为靶向Survivin的干扰质粒和丝裂霉素交替用药;膀胱灌注6次后荷瘤膀胱称重。结果:25只裸鼠在种植T24细胞后均形成膀胱肿瘤。种植后7天裸鼠膀胱MRI检查无明显变化,l4、21、28天MRI检查均可发现膀胱不同程度的充盈缺损,MRI图像与肿瘤实际大小吻合。病理检查显示:种植后7天,肿瘤生长于裸鼠膀胱粘膜或浅层肌肉;14～28天局限于肌层;35天时侵及浆膜层。丝裂霉素组和联合组的抑瘤率分别为33.45%、56.34%,联合组优于丝裂霉素组(P<0.05)。结论:成功建立了裸鼠原位膀胱癌动物模型,肿瘤生长基本模拟了人膀胱癌的发生、发展过程;MRI检查可作为对裸鼠膀胱原位肿瘤动态观察的可靠方法。靶向Survivin的干扰质粒增加了丝裂霉素的抗肿瘤作用。
- 杨慎敏温端改侯建全何军岑建农陈剑华
- 关键词：膀胱肿瘤动物模型磁共振成像SURVIVIN裸鼠
- 靶向生存素基因的shRNA抑制膀胱癌细胞裸鼠移植瘤生长
- 2007年
- 目的观察稳定转染靶向生存素（survivin）基因短发夹RNA（shRNA）对膀胱癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法将靶向生存素基因的shRNA真核表达载体转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞,实时定量PCR检测转染后生存素mRNA表达的变化;分别将转染和未转染细胞种植于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;通过免疫组化检测肿瘤组织生存素蛋白表达的差异。结果RNA干扰使T24细胞生存素表达下调92.86%;未转染组在20～29d均形成体积超过2000mm3的肿瘤,转染组在43d时经病理证实3只裸鼠形成肿瘤,最大体积62.5mm3;免疫组化显示转染组形成的肿瘤生存素蛋白表达明显减弱。结论靶向生存素基因的shRNA明显下调了生存素表达,并抑制了膀胱癌细胞T24裸鼠移植瘤的生长。
- 杨慎敏温端改侯建全何军岑建农
- 关键词：生存素核糖核酸干扰膀胱癌
- survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究被引量：5
- 2007年
- 目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论siRNA．survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。
- 侯建全何军温端改王小林
- 关键词：SURVIVIN基因小分子干扰RNA膀胱癌
- RNA干扰Survivin基因对裸鼠原位膀胱癌的治疗作用
- 2008年
- 我们利用原位膀胱癌动物模型评价通过RNA干扰下调Survivin表达对膀胱癌的治疗作用，并探讨其作用机制。
- 杨慎敏侯建全何军温端改
- 关键词：原位膀胱癌SURVIVIN基因RNA干扰SURVIVIN表达裸鼠
