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国家自然科学基金(30400167)

作品数：6 被引量：9H指数：2
相关作者：曲萍刘芳娥刘利兵张秀敏隋延仿更多>>
相关机构：第四军医大学第四军医大学唐都医院烟台毓璜顶医院更多>>
发文基金：国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生

主题

  • 3篇细胞
  • 2篇蛋白
  • 2篇荧光
  • 2篇荧光蛋白
  • 2篇树突
  • 2篇树突状
  • 2篇绿色荧光
  • 2篇绿色荧光蛋白
  • 2篇基因
  • 2篇表位
  • 1篇蛋白纯化
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质类
  • 1篇电镜
  • 1篇毒性
  • 1篇性状
  • 1篇遗传学
  • 1篇增强型绿色
  • 1篇增强型绿色荧...
  • 1篇人外周血

机构

  • 6篇第四军医大学
  • 1篇烟台毓璜顶医...
  • 1篇第四军医大学...

作者

  • 6篇曲萍
  • 4篇刘利兵
  • 4篇刘芳娥
  • 3篇隋延仿
  • 3篇张秀敏
  • 3篇黄小军
  • 3篇陈健康
  • 2篇马加海
  • 1篇胡沛臻
  • 1篇黄勇
  • 1篇叶菁
  • 1篇马斌
  • 1篇铁茹
  • 1篇陈广生
  • 1篇张学策
  • 1篇李侠
  • 1篇葛伟
  • 1篇黄杨
  • 1篇司少艳
  • 1篇张云飞

传媒

  • 2篇陕西医学杂志
  • 2篇现代肿瘤医学
  • 1篇第四军医大学...
  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2009
  • 1篇2008
  • 3篇2007
  • 1篇2006
共 6 条 记 录，以下是 1-6
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排序方式：
连续贴壁法分离培养人外周血来源树突状细胞及其超微结构的观察被引量：4
2007年
目的改进人外周血单个核细胞分离培养树突状细胞的方法,电镜观察树突状细胞超微结构。方法利用连续贴壁法分离获得CD14+前体细胞,经人重组粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白介素-4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导产生成熟DC,流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平,透射电镜(TEM)观察树突状细胞超微结构。结果连续贴壁法体外分离培养人外周血DC,所获得DC数量和纯度均都多于以往一次贴壁分离培养的DC。培养1周的DC高表达CD1a、CD40、HLA-DR、CD80、CD86。透射电镜观察到不同状态树突状细胞的超微结构。结论连续贴壁法可分离培养数量较大、纯度较高的人外周血来源DC。
马斌曲萍张秀敏张云飞胡沛臻葛伟司少艳黄杨李侠隋延仿
关键词：树突状细胞透射电镜
融合蛋白HSP70-EGFP的表达、纯化及其在树突状细胞内化抗原中的应用
2007年
目的:研究树突状细胞(DCs)对热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白的内化作用.方法:首先原核表达并分离纯化HSP70和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白HSP70-EGFP.实验中所用DCs来源于人外周血.内化实验分3组进行:将1,2组DCs分别与融合蛋白HSP70-EGFP和蛋白EGFP孵育30min;第3组先将DCs与HSP70孵育30min,再与HSP70-EGFP孵育30min.之后将3组DCs转至37℃孵箱内,培养0.5,1,2和24h,应用流式细胞仪检测含HSP70-EG-FP或EGFP的DCs数量.应用IL-12Eli-spot法检测HSP70-EGFP等抗原促进DCs分泌IL-12的效果.结果:①成功获得了重组蛋白HSP70-EGFP,Mr约为97000,HSP70-EGFP表达量占总蛋白的35.7%.纯化后的融合蛋白HSP70-EGFP溶液经紫外线灯照射时发出鲜绿色的荧光.②流式细胞仪检测结果显示在37℃孵育0.5h后,HSP70-EGFP孵育的DCs组阳性率为63.3%,其余两组为阴性.在37℃孵育1,2和24h后,3组阳性率均大于80.0%.IL-12Eli-spot检测结果显示,在刺激DCs活化及分泌IL-12的水平上,HSP70-EGFP与脂多糖(LPS)之间的差别无统计学意义(P>0.05),而HSP70-EG-FP的活化DCs能力明显高于EGFP(P=0.001).结论:①受体介导的吞噬作用在DCs内化HSP70-EGFP的初始阶段起主要作用,随孵育时间的延续,吞饮作用占主要地位.②HSP70-EGFP可促进DCs分泌特征性细胞因子IL-12.
曲萍隋延仿刘利兵马加海陈广生陈健康刘芳娥
关键词：受体介导重组融合蛋白质类热休克蛋白质70绿色荧光蛋白质类
人肝癌组织伴生成纤维细胞的体外培养及其生物学性状的初步探讨被引量：1
2007年
目的:体外培养人肝癌组织伴生成纤维细胞,观察其生长状态,为进一步研究其功能奠定基础。方法:应用组织块培养法进行人肝癌伴生成纤维细胞的原代培养,细胞铺满培养瓶底后首次传代,通过胰酶消化法和反复贴壁法进行成纤维细胞的纯化;通过倒置显微镜观察细胞形态、免疫组织化学方法检测细胞膜波形蛋白(v im entin)、角蛋白(keratin)表达情况,对细胞进行鉴定。结果:组织块法原代培养约1周可见纤维样细胞从组织块周围游出,5周左右细胞基本长满培养瓶底。首次传代时应用胰酶消化法进行成纤维细胞的初次纯化,第2次转种时先后应用酶消化法和反复贴壁法再次进行细胞纯化,第3代以后基本可获得呈典型克隆性生长、长梭形纤维样细胞,生长周期短。免疫组化染色结果为v im entin染色阳性,keratin染色阴性。结论:在体外成功培养了人肝癌组织伴生成纤维细胞,并对其生物学性状进行了初步探讨,为进一步研究其与肝癌细胞生长、浸润及转移的关系等机制奠定了基础。
曲萍刘利兵张学策陈健康刘芳娥黄小军
关键词：肝肿瘤成纤维细胞
增强型绿色荧光蛋白的基因克隆、表达及蛋白纯化被引量：4
2006年
目的研究增强型绿色荧光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)基因在大肠杆菌中的基因克隆、重组表达及纯化。方法采用PCR方法克隆EGFP全长cDNA序列,构建原核表达载体pGEX4T-1-EGFP,经过DNA序列测定证实其序列正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,用谷胱甘肽-Sepharose4B层析法纯化GST-EGFP融合蛋白。结果成功地克隆了EGFP全长cDNA序列,并进行原核表达以及蛋白的纯化,GST-EGFP的表达量占菌体蛋白量的40%以上。经纯化后纯度高于90%。菌体超声裂解后上清液及其纯化产物在长波紫外线的照射下,发出明亮的绿色荧光。结论本研究为应用EGFP追踪细胞吞噬功能等动态活动奠定了实验基础。
曲萍隋延仿叶菁张秀敏
关键词：基因复制基因表达调控
乙型脑炎病毒E蛋白HLA—A＊0201限制性细胞毒性T细胞表位的预测
2009年
目的:预测乙型脑炎病毒E蛋白(Japanese encephalitis virus envelope protein,JEVE蛋白)的HLAA2限制性CTL表位。方法:采用SYFPEITHI超基序法、量化基序多项式方案分析及延展基序方案联合应用,筛选JEVE蛋白HLA-A2限制性的九肽细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)表位。结果:通过预测获得了9个JEVE蛋白HLA-A0201限制性的九肽CTL表位。结论:超基序法与量化基序多项式方案分析及延展基序方案的联合应用所产生的JEVE蛋白CTL表位,为进一步研制新型乙脑肽疫苗奠定了重要的基础。
曲萍张秀敏刘利兵陈健康刘芳娥黄小军
关键词：细胞毒性T淋巴细胞表位
肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达
2008年
目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因。方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/EPVTKAEML-HSP70。经限制性内切酶BamHI、XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果。结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端。经BamHI、XhoI酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a(+)上;转入重组质粒的E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72000处有表达量明显增多的蛋白条带。结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVT-KAEML)与人HSP70的融合基因。
曲萍马加海黄勇刘利兵铁茹刘芳娥黄小军
关键词：抗原表位
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