浙江省自然科学基金(397463)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
- 相关作者：蔡朱男余应年钱羽力罗建红王宏更多>>
- 相关机构：浙江大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌BL21 DE3中的表达被引量：11
- 2000年
- 目的 :探索水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌中的表达及其规律 ,为治疗苯丙酮尿症奠定基础。方法 :应用基因工程技术 ,将水稻苯丙氨酸氨解酶的cDNA(rPAL - 1-cDNA)重组入大肠杆菌高效表达质粒pET - 2 8c ,通过异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,在大肠杆菌中获得表达。 结果 :SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳表明 ,诱导 1,3,5 ,7h后 ,表达蛋白量占菌体总蛋白分别为 2 1.40 % ,30 .6 0 % ,35 .40 % ,35 .43% ,融合蛋白His6 -rPAL分子量为 78.6kDa ,主要以包涵体形式存在。结论
- 蔡朱男余应年罗建红钱羽力陈星若
- 关键词：质粒大肠杆菌苯丙酮尿症
- 突变形成的原核与原核-真核检测系统现状被引量：3
- 2003年
- 原核细胞检测系统在检测突变形成的过程中 ,以其简便、快捷、灵敏、价格相对低廉等特点 ,起着不可替代的作用 ,目前较为常用的方法有 :回复突变试验、修复试验、SOS相关试验等 ;supFtRNA转运系统是穿梭于原核与真核细胞之间 ,当属原核_真核检测系统 ;现就其中回复突变试验和supFtRNA转运系统及其进展作一综述。
- 王宏蔡朱男余应年
- 关键词：化学诱变剂回复突变SOS
- 由BL21DE3^(pET28C-rPAL-1-cDNA)高效表达具有酶活性的苯丙氨酸脱氨酶被引量：2
- 2000年
- 为了开辟苯丙酮尿症治疗新途径 ,本实验室构建了插入水稻苯丙氨酸脱氨酶 (PAL) c DNA的重组表达质粒 ,并用它转化大肠杆菌 BL2 1 DE3获得工程菌 BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA.经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷诱导后 ,通过 SDS- PAGE及微型蛋白双向电泳 ,证明表达的目的蛋白的分子量为 78.6ku,主要存在于破碎菌体的沉积物中 (以包涵体形式存在 ) .按 Zucker法测定 PAL酶活性 ,并进行酶动力学实验 .测得表达蛋白的酶比活性为 462 nmol·g-1·min-1,Km,vmax分别为 0 .50 mmol·L-1和3. 0 5nmol · min-1.结果证明所建立BL2 1 DE3p ET2 8C-r PAL -1-c DNA大肠杆菌菌株能高效表达有活性的 PAL .
- 蔡朱男余应年陈星若袁丽芳
- 关键词：苯丙氨酸苯丙酮尿症
