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重庆医科大学检验医学院: 作品数：2,501 被引量：8,989H指数：31; 相关作者：涂植光康格非张彦胥文春罗进勇更多>>; 相关机构：重庆医科大学附属第一医院临床学院第三军医大学大坪医院野战外科研究所广西医科大学公共卫生学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>

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HBs-shRNA重组腺病毒构建及鉴定: 目的构建表达HBV S区短发卡RNA(shRNA)的重组腺病毒,并在体外验证其干扰效果方法(1)从真核表达载体pGenesil-HBs-shRNA中酶切得到U6启动子及S区shRNA片段。构建穿梭质粒pAdTrack-C...; 张靖南邹程程曹漪伊盛艳蕊王森张云栋汤华

comE基因缺陷影响肺炎链球菌体内诱导基因的表达: 2010年; 【目的】筛选受comE调控的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)体内诱导基因。【方法】通过插入失活构建基因comE缺陷的S.pn菌株,与野生菌株分别腹腔注射BALB/c小鼠,经过体内诱导后取小鼠血,分离细菌提取RNA,用RT-PCR法检测13个体内诱导基因mRNA水平差异。【结果】将RT-PCR结果通过Quantity-one灰度分析,进行配对t检验,显示8个体内诱导基因在缺陷菌株和野生菌株中mRNA表达水平具有统计学差异(P<0.05),其中spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873受转化上调,spd-1672受转化下调。【结论】筛选出受转化调控的体内诱导基因spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873、spd-1672,它们可能参与生长调节、温度感应、糖脂代谢等环节,表明细菌转化可通过调节某些体内诱导基因的表达来增强细菌的毒力。; 刘鑫尹楠林张雪梅杨晓亮庞丹王虹尹一兵胥文春; 关键词：肺炎链球菌 COME 毒力

膀胱移行细胞癌尿脱落细胞和血细胞中hTERT及c-myc的表达被引量：3: 2003年; 目的 :探讨hTERT和c mycmRNA在膀胱移行细胞癌 (TCC)患者尿脱落细胞和外周血细胞的表达、临床意义及关系 .方法 :采用RT PCR法同时检测膀胱肿瘤细胞株 ,2 8例TCC患者和 15例正常对照尿脱落细胞和外周血的hTERT和c mycmRNA表达 .结果 :尿脱落细胞hTERT和c myc阳性表达率分别为 85 .7%和 71.4 % ,对照组为 13.3%和 2 6 .7% ;血细胞两指标的阳性表达率分别为 78.6 %和 5 7.1% ,对照组为 6 .7%和 33.3% ;肿瘤组与对照组比较具有显著性差异 (P <0 .0 1) ,两指标不同组间比较具有相关性 (P <0 .0 1) .结论 :hTERT和c mycmRNA在TCC中的表达具有相关性 ;二者可作为膀胱癌的良好诊断指标 ,hTERT较c myc特异和灵敏 ;; 邹琳罗春丽涂植光张鹏辉; 关键词：人端粒酶逆转录酶 MYC 逆转录-聚合酶链反应膀胱移行细胞癌尿脱落细胞外周血细胞

卵巢癌相关抗原CA125单克隆抗体的制备: 2013年; 目的制备卵巢癌相关抗原CA125R单克隆抗体,并进行鉴定。方法将CA125一段串联重复序列(CA125R)基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-CA125R,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-CA125R融合蛋白。表达的融合蛋白经GST亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备CA125单克隆抗体,Western blot法鉴定抗体的特异性,单克隆抗体亚类测定试剂盒分析单抗的亚类。腹水诱生法大量制备单抗,SDS-PAGE分析单抗的纯度,间接ELISA法检测单抗的效价。结果重组原核表达质粒pGEX-CA125R经双酶切及测序,证实构建正确;纯化的GST-CA125R融合蛋白相对分子质量约44 000,纯度约为95%,可与小鼠抗GST单克隆抗体发生特异性反应;获得1株可稳定分泌抗CA125单克隆抗体的杂交瘤细胞株3-B2,其分泌的单抗能特异识别GST-CA125R融合蛋白和天然CA125糖蛋白,其抗体亚型为IgG2a型;纯化的腹水单抗纯度约为90%,效价达1×106以上。结论成功获得1株能特异性识别天然CA125糖蛋白的单克隆抗体细胞株,并经腹水诱生法大量制备了抗体,为CA125临床检测试剂盒的研发奠定了基础。; 梁勤东马婷婷董晋豫李武县汪先桃李紫微王秦熊海玉涂植光; 关键词：卵巢癌肿瘤相关抗原 CA125 单克隆抗体

SAHA与顺铂联合用药对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响被引量：3: 2016年; 该文研究了组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)联合顺铂(cisplatin,DDP)对骨肉瘤细胞的作用。骨肉瘤143B细胞分别经不同浓度的SAHA、DDP、SAHA+DDP作用48 h。利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;分别采用MTT法、流式细胞术、细胞划痕实验、克隆形成实验检测SAHA、DDP及二者联用对143B细胞活力、细胞凋亡、细胞迁移和集落形成能力的影响。利用Western blot检测143B细胞中cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果显示,SAHA+DDP组143B细胞大量坏死,抑制细胞增殖的现象明显高于单药组;中低剂量SAHA与DDP联用表现为协同作用,而较高剂量的联用表现为单纯相加作用;SAHA+DDP组较单药组细胞早期凋亡率增加、迁移率明显降低,且SAHA+DDP组的细胞集落形成能力明显降低;SAHA+DDP组能够促进cleaved-Caspase-8、cleaved-PARP的蛋白表达。以上结果表明,SAHA联合顺铂对骨肉瘤细胞143B细胞有协同增敏作用,能够明显抑制其增殖和迁移并促进其凋亡。; 侯梦一姚娟王豪张章严树涓左国伟; 关键词：SAHA 顺铂骨肉瘤联合用药

新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用被引量：3: 2011年; 目的开发新型二聚体突变荧光引物技术，建立一种能广泛应用于临床检测HCV的实时PCR方法。方法构建重组质粒pMD18-T—HCV5’NCR作为标准品，设计二聚体突变荧光引物，优化定量PCR体系，并进行方法学评价。将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果进行比较。结果建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法，检测的线性范围为20-10^9IU／ml；批内CV在1．37％-4．59％之间，批间CV在1．58％-4．81％之间；对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性，检测特异性为100％（60／60）；对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性，相关系数R2=0．9501。结论建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法，具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点，可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持。; 夏乾峰文阳安刘靳波李朴涂植光; 关键词：肝炎病毒属聚合酶链反应 RNA 病毒

乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子的活性被引量：3: 2013年; 目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)抑制分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)启动子活性的分子机制。方法:扩增不同长度的SFRP5启动子区片段,构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,并将构建好的重组质粒转染入正常肝细胞系LO2细胞,再分别感染编码HBx的腺病毒(Ad-HBx)或编码绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP),荧光显微镜下观察病毒感染效率,检测萤光素酶活性以观察HBx对SFRP5启动子活性的影响。结果:(1)含不同长度的SFRP5启动子区截短突变报告质粒构建成功。(2)截短突变报告质粒的萤光素酶活性与pGL3-Basic对照组相比,分别为(6.32±0.04)倍(-478 bp～+47 bp)、(5.79±0.32)倍(-811 bp～+47 bp)、(3.59±0.34)倍(-1 235 bp～+47 bp)、(3.86±0.39)倍(-1 677 bp～+47 bp)、(3.26±0.42)倍(-2 072 bp～+47 bp)(均P<0.05)。过表达HBx可以明显抑制SFRP5启动子活性,抑制率分别为44%(-478 bp～+47 bp)(P<0.05)、46%(-811 bp～+47 bp)(P<0.05)、28%(-1 235 bp～+47 bp)、24%(-1 677 bp～+47 bp)和40%(-2 072 bp～+47 bp)。结论:HBx可以明显抑制SFRP5启动子区活性,可能导致SFRP5基因表达下调。; 陈林林谢青单晓亮权会琴陈庆美周帆聂丹唐霓; 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白

基于轨迹分析模型的男男性行为人群无保护性行为特征分析被引量：5: 2017年; 目的:通过轨迹分析模型了解男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群无保护性行为情况及其影响因素。方法:采用非概率抽样法在重庆和新疆地区招募并筛选出390名MSM进入研究,并在第12、24、36、48周进行随访问卷调查。利用轨迹分析模型对MSM人群进行无保护性行为轨迹特征分组并描述不同亚组轨迹特征,通过二元logistic回归分析其影响因素。结果:轨迹分析模型结果显示,调查对象可分为艾滋病病毒,即人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染"高风险组"和"低风险组",其中"高风险组"146人,"低风险组"244人,其2周无保护性行为次数分别为1.38次和0.43次。多因素分析结果显示,年龄、婚姻和月均收入具有统计学意义(P<0.05),低年龄者较高年龄者有更高可能被纳入"高风险组"(OR=0.95,95%CI=0.92~0.99);低收入人群相较于高收入的更易被纳入"高风险组"(OR=0.53,95%CI=0.34~0.82);和已婚相比,离异/丧偶的MSM更容易进入"高风险组"(OR=3.35,95%CI=1.34~8.37)。结论:轨迹分析模型直观地反映了MSM人群在无保护性行为上不同的发展轨迹,其中低年龄、低收入、离异/丧偶的MSM是HIV防治中的重点关注人群。; 林倚伊钟晓妮彭斌张燕叶孟良孔翠娥曾馨荆少华幸箐筠黄爱龙; 关键词：男男性行为者

检验数据临床意义查询系统的研制被引量：1: 2003年; 通过数值进制计数的方法 ,将检验报告的数据转换为对应的特征代码S ,用S快速地查询临床意义 ,建立了一套检验数据临床意义查询系统。; 向华蔡晓钟曾照芳; 关键词：自动数据处理计算机辅助诊断数学模型

重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响被引量：1: 2015年; 目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒Ad E-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响。方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变Ad E-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(Sm C)组、病毒空载Ad EGFP(CM V)组和PBS对照组。荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平。结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡。; 王林王林费嫦黄峥兰李会刘张玲; 关键词：细胞凋亡 BCR-ABL融合蛋白 SH2结构域

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