华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系
- 作品数：113 被引量：428H指数：11
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- 相关机构：武汉工业学院生物与化学工程系河南科技大学医学院武汉科技大学医学院更多>>
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- 鼠源TRAIL真核表达质粒的构建及其抑瘤效应的初步观察被引量：1
- 2002年
- 采用 RT- PCR自小鼠脾细胞 RNA中扩增出鼠 TRAIL 基因的全长 c DNA,利用 DNA重组技术将其插入到真核表达载体 pc DNA3.1中获得重组质粒 p X1。经酶切鉴定及序列分析 ,表明成功构建 TRAIL 的真核表达质粒。通过直接肌肉内注射进行基因转染 ,p X1具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌生长的作用。表明 TRAIL
- 薛胜利冯作化张桂梅黎培员王洪涛肖徽
- 关键词：TRAIL凋亡诱导配体肝癌基因治疗
- 体外模拟脑缺血再灌注诱导神经元损伤后葛根素的保护作用(英文)
- 2005年
- 背景:葛根素在体外有抗缺血再灌注损伤的作用,改善微循环,抑制血小板聚集的作用,但葛根素保护脑缺血神经元损伤是否与细胞凋亡有关尚不清楚。目的:在细胞水平观察葛根素在体外模拟脑缺血再灌注诱导的神经元损伤中的保护作用。设计:随机对照的实验。单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。对象:实验于2002-03/11在华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系实验室完成。以培养的鼠成神经瘤细胞株N2a细胞为观察对象。方法:将培养的N2a细胞放入通有体积分数为0.05的CO2和体积分数为0.95的N2的37℃培养箱中培养90min后,加入葛根素(0.5mmol/L)后正常培养24h。采用MTT法观察细胞的生存能力,采用Annexin-V染色法检测早期细胞凋亡程度,收集培养上清分析乳酸脱氢酶酶活性反应细胞膜通透性。免疫印迹分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达;同时检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。主要观察指标:各组细胞早期细胞凋亡程度,乳酸脱氢酶酶活性,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达和活性。结果:葛根素能显著提高N2a细胞模拟缺血再灌注24h后的存活率;显著降低培养液中乳酸脱氢酶活性;显著降低缺血再灌注的N2a细胞的凋亡程度(P<0.01);与此同时,葛根素可显著降低缺血再灌注诱导的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及表达(P<0.01)。结论:葛根素具有神经保护作用,可显著抑制脑缺血再灌注诱导的N2a细胞凋亡,其作用机制与显著抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及活性有关。
- 陈娟周洁冯友梅
- 关键词：脑缺血葛根素再灌注半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 远志皂苷元通过改善内质网应激保护小鼠心肌缺血再灌注损伤被引量：5
- 2014年
- 目的观察远志皂苷元(senegenin,SEN)对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并深入探讨远志皂苷元作用的分子机制。方法实验分组:对照组(穿线不结扎,空置225min)、模型组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注180min)和SEN处理组(冠状动脉左前降支结扎45min,再灌注前10min给予静脉注射30mg/kg远志皂苷元,再灌注180min)。采用伊文氏蓝-TTC双染法测定心肌梗死面积;荧光分析法检测Caspase-12和Caspase-3的活性以评价小鼠心肌细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法检测心肌梗死区内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP的表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠心肌梗死区的面积显著增大,Caspase-12和Caspase-3活性分别增高了4.71倍和3.37倍,内质网应激相关的标志蛋白GRP78和CHOP表达水平亦显著增高。与模型组相比,SEN处理组小鼠心肌缺血再灌注损伤导致的心肌梗死面积、Caspase-12和Caspase-3的活性程度均显著降低,GRP78和CHOP的表达水平亦显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论远志皂苷元对小鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其可能的机制与改善心肌内质网应激介导的细胞凋亡有关。
- 李子希陈娟吕建新
- 关键词：远志皂苷元心肌缺血再灌注损伤内质网应激
- 雷公藤内酯酮对小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α的影响被引量：9
- 2005年
- 目的观察雷公藤内酯酮(T7)对活化的小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)分泌一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法分离、纯化巨噬细胞,给予不同浓度T7进行培养,以Griess试剂检测培养上清液中的NO含量,以MTT法检测培养上清液中的TNF-α活性.结果 T7在浓度0.4～3.2 mg/L、时间4～24 h范围内对MΦ分泌的NO和TNF-α具有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量和时间依赖关系.结论 T7可以抑制MΦ的活性.
- 何为潘建青曾叶任燕王辉丽杨业金
- 关键词：雷公藤内酯酮巨噬细胞肿瘤坏死因子
- 截断型载脂蛋白E4对培养神经元细胞中神经细丝磷酸化的影响(英文)被引量：2
- 2006年
- 背景:神经细丝的磷酸化程度与阿尔茨海默病的发生密切相关,载脂蛋白E4是阿尔茨海默病公认的易患因子,但载脂蛋白E4对神经元细胞内神经细丝磷酸化的影响及机制尚不十分清楚。研究显示在阿尔茨海默病患者脑组织和体外培养的神经元细胞中,载脂蛋白E4蛋白C末端的272～299位氨基酸残基可被水解截去,产生truncated-apoE4片段,且与阿尔茨海默病的特征性病理改变神经纤维缠结中的磷酸化神经细丝相互作用。目的:在细胞水平观察truncated-ApoE4过度表达对培养的神经元中神经细丝磷酸化的影响。设计:非随机对照实验观察。单位:华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系。材料:实验于2005/12在华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学实验室完成。小鼠成神经瘤贴壁生长细胞株N2a由许华熙博士提供。方法:构建pEGFP-T-apoE4真核表达重组体,采用脂质体介导的方法分别将pEGFP-c3、pEGFP-apoE4和pEGFP鄄T-apoE4瞬时转染小鼠成神经瘤细胞株(N2a),24～48h后,免疫印迹技术检测神经细丝的磷酸化状态,测定糖原合酶激酶3、细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)的活性。主要观察指标:神经细丝的磷酸化程度及糖原合酶激酶3、细胞周期依赖性蛋白激酶5的酶活性。结果:转染组细胞内磷酸化神经细丝含量显著增多,糖原合酶激酶3酶活性显著增加,以pEGFP-T-apoE4转染组最为显著(P<0.05),细胞周期依赖性蛋白激酶5酶活性与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论押Truncated鄄ApoE4过度表达可通过激活糖原合酶激酶3而非细胞周期依赖性蛋白激酶5引起成神经瘤细胞株(N2a)细胞中神经细丝过度磷酸化,提示truncated鄄ApoE4可能参与了阿尔茨海默病的病理过程。
- 周洁陈娟肖志宏金光耀冯友梅
- 关键词：载脂蛋白E类糖原合酶激酶3细胞周期蛋白质依赖激酶类
- 6His-VP3融合蛋白的表达、纯化及其捕获细胞中相关蛋白的初步探讨被引量：1
- 2007年
- 目的研究人肝癌细胞HepG2与人胎肝细胞L-02中与VP3蛋白相互作用的蛋白组分,以探讨VP3特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用PCR方法克隆vp3的DNA片段,将其插入质粒pET-28a(+)构建含6个组氨酸标签6His-VP3融合蛋白的原核表达载体。利用亲和层析技术制备纯化的6His-VP3融合蛋白作为诱饵,分别从肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02的总蛋白中,通过pull-down技术捕获与VP3相互作用的特异性蛋白质组分。结果获得了高纯度的6His-VP3融合蛋白;以其作为诱饵从HepG2细胞和L-02细胞中捕获到的与VP3作用的相关蛋白质组分存在差异。结论肿瘤细胞HepG2及正常细胞L-02中,与VP3作用蛋白的差异与其在不同细胞中的生物学行为相对应。
- 王阿慧孙军毕昊彭冬君田俊狄勇宗义强屈伸
- 关键词：凋亡素相关蛋白肿瘤特异性
- 重组FN多肽CH50抑制黑色素瘤短效侵袭能力的实验研究
- 2006年
- 纤维连接蛋白（FN）是多结构域分子，FN的双结构域重组多肽（CH50）是以基因工程方法将人FN的CellⅠ和HepⅡ两个结构域进行重组，在大肠埃希菌中表达、制备的一种双结构域重组多肽，此多肽不再受FN分子中其他结构域的影响。本文通过对CH50在生物体内短期效应的观察，进一步证实CH50抑制黑色素瘤的生长，探讨其对肿瘤的抑制作用。
- 隗佳吴丰华张桂梅冯作化
- 关键词：CH50黑色素瘤短效基因工程方法
- 一种血管内皮生长因子变异体的结构与功能的初步探讨
- 2006年
- 目的针对发现的一种血管内皮生长因子变异基因(h′VEGF),利用计算机软件模拟预测其空间结构,并对其功能进行初步探讨。方法将pCD-hVEGF165及pCD-h′VEGF165重组真核表达载体导入CHO细胞,收集培养上清,进行ELISA分析、血管通透性实验(Miles实验)、内皮细胞增殖实验(MTT法)。结果h′VEGF165能使豚鼠的血管通透性增高,并促进ECV-304细胞增殖,但ELISA实验结果显示h′VEGF165与抗hVEGF165单抗未发生抗原抗体反应。结论h′VEGF165与hVEGF165在空间结构上可能存在差异,但现有的实验结果未见两者在功能上的明显差异。
- 王玉田俊过健俐屈伸
- 关键词：变异体血管内皮生长因子
- 游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及缺陷位点研究被引量：14
- 2005年
- 目的研究游离脂肪酸诱导人肝细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及信号转导缺陷位点。方法用含0.25mmol/L的软脂酸(PA)或100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HepG2细胞24h后,用100nmol/L胰岛素刺激不同时间后,分别测定培养液的葡萄糖浓度,细胞内的糖原含量,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性以及磷酸化的蛋白激酶B(P鄄Ser473PKB)的蛋白水平。磷酯酰肌醇3激酶(PI鄄3K)的抑制剂Wortmannin加入培养基,终浓度10-6mol/L。结果与正常对照组相比,PA处理组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量增高(P<0.05);PA处理组胰岛素刺激的PEPCK活性高于正常对照组(P<0.01),P鄄Ser473PKB蛋白水平低于正常对照组(P<0.01)。用Wortmannin处理后,正常对照组中PEPCK活性差别有统计学意义(P<0.01),PA处理组中的PEPCK活性差别无统计学意义(P>0.05);正常对照组和PA处理组中P鄄Ser473PKB差别均有统计学意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的AP培养24h后,细胞产生了胰岛素抵抗并且胰岛素信号转导途径存在障碍,可能蛋白激酶B(PKB)及下游分子缺陷参与了肝胰岛素抵抗的形成。
- 万学东王西明夏炎枝段秋红秦莉关中宏
- 关键词：胰岛素抵抗游离脂肪酸磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶蛋白激酶BHEPG2细胞
- 褪黑素在缺血再灌注引起神经元凋亡的保护作用被引量：2
- 2006年
- 目的探讨模拟缺血再灌注引起神经元凋亡的途径和褪黑素(m elaton in,MT)抗凋亡的作用机理。方法建立原代培养大鼠小脑颗粒细胞的体外模拟缺血(Oxygen G lucose Deprivation,OGD)再灌注模型,测定培养液LDH活性和细胞DNA琼脂糖凝胶电泳;利用Rhodam ine123和激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位的变化;ELISA检测细胞浆中细胞色素C水平;用同样指标观察MT对其损伤的保护作用。结果在体外模拟缺血再灌注模型中培养液LDH活性增加(P<0.05),琼脂糖凝胶电泳DNA出现梯状条带,线粒体膜电位明显降低,细胞浆中细胞色素C含量增加(P<0.05),MT对上述现象有明显的抑制作用。结论(1)缺血再灌注引起的神经元凋亡机理之一是通过线粒体凋亡途径;(2)MT可通过阻止线粒体凋亡途径而保护模拟缺血再灌注诱导小脑颗粒细胞的凋亡。
- 卢涛王西明段秋红韩义香鲁志强
- 关键词：褪黑素小脑颗粒细胞缺血再灌注线粒体细胞凋亡
