扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室
- 作品数：211 被引量：594H指数：12
- 相关作者：焦新安潘志明黄金林耿士忠孟闯更多>>
- 相关机构：南京农业大学动物医学院军事医学科学院军事兽医研究所中国农业大学动物科技学院动物营养国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 柠檬酸和温度联合处理对海水鱼中副溶血性弧菌的杀灭作用被引量：3
- 2013年
- 采用响应曲面分析法对副溶血性弧菌的抑制条件进行优化。对副溶血性弧菌死亡率影响因素进行单因素分析后,以Box-Benhnken设计(BBD)评价温度、时间、pH3个因素显著性和交互作用,得出副溶血性弧菌最佳净化条件为:温度55.5℃、时间25s、pH4.96。在该条件下,副溶血性弧菌死亡率的预测值为97.36%,在三文鱼上验证该值达97.07%,并且该条件处理前后鱼肌原纤维蛋白的Ca2+-ATPase活性没有显著差异。
- 丁珊珊杨振泉李宝利潘志明焦新安
- 关键词：副溶血性弧菌柠檬酸温度减菌
- 嵌合鞭毛蛋白fliC/esat的佐剂效应研究
- ：为研究嵌合表达结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的鞭毛蛋白的免疫佐剂效应。方法：PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列，通过overlap PCR将ESAT-6编码序列插入...
- 张辉文科黄金林胡茂志申峻松潘志明焦新安
- 文献传递
- 不同副溶血弧菌的分子鉴别与生长动力学模型比较被引量：6
- 2008年
- 目的探讨不同分子亚型副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)的生长动力学特征,为建立海产品中Vp预测模型提供数据。方法应用PCR和RAPD方法对5株不同来源的Vp分离株进行了分子鉴别,并对不同菌株在适宜温度(37℃)和低温(15℃)下生长变化进行了测定,采用修正的Gompertz方程拟合细菌的生长曲线,求出不同菌株的生长动力学参数并建立预测模型。结果4株食物中毒样品来源的Vp菌株基因型均为tl+tdh+trh-toxR+,1株海产品分离株为tl+tdh-trh-toxR+,筛选的随机引物P21可以将5株不同来源的Vp菌株分成5个不同的分子亚型,不同菌株37℃的世代时间在0.210~0.238h之间,延滞时间在1.705~1.849h之间,生长曲线没有显著差异(R2>0.995),应用预测模型求得各菌株的预测值与实测值均方根偏差在0.110~0.452之间;而在15℃条件下测得不同Vp菌株世代时间在0.727~1.062h之间,延滞时间在10467~12552h之间,生长曲线具有较大的变异性(R2>0.938),其中菌株VP06003和VP06127的预测值与实测值之间均方根偏差分别为...
- 杨振泉焦新安
- 关键词：副溶血弧菌分子鉴别生长动力学模型
- 抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:获得分泌抗H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。方法:以H9N2亚型AIV为免疫原,免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14,在PEG4000的作用下进行细胞融合,通过血凝抑制(HI)试验筛选分泌抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果:经过连续3～4次克隆化,获得能稳定分泌抗H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体细胞系6株,分别命名为1B2、1C10、1G2、2B7、2E3和5E11。6株细胞培养上清HI效价为24～28,腹水HI效价为210～213。除1G2为IgM外,其余5株均为IgG1。Western blotting结果显示,1B2、1C10、2B7和2E3能与AIVH9蛋白在Mr为75000处反应,表明其是针对AIVH9亚型血凝素蛋白的单抗。特异性试验表明该6株单抗均只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而不与其他14个HA亚型的AIV及新城疫病毒、传染性支气管炎病毒发生交叉反应,显示出良好的特异性。结论:制备了针对H9亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体,为禽流感的快速诊断和病毒的抗原性分析等奠定了基础。
- 孙林季琰左为亮王秀荣潘志明焦新安
- 关键词：禽流感病毒H9亚型血凝素单克隆抗体
- 禽病原性大肠杆菌温度敏感性血凝素(Tsh)突变株的构建
- 2010年
- 运用基因重组方法将庆大霉素抗性基因(GM)连接到PCR扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间,并共同插入到pUC18载体的多克隆位点中,构建出带GM标志的载体pUC18-tshFRGM,从中切下目的片段,再将之克隆到pMEG-375自杀性载体中,构建出自杀性载体pMEG375-tshFRGM,将突变载体转化到含tsh基因的受体APECE037株中,根据同源重组原理,筛选出tsh基因缺失的E037突变株。E037和E037(Δtsh)株的LD50分别为105.6CFU和109.0CFU,动物感染性试验表明,E037(Δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有了明显降低。
- 贺生中刘静陈祥高崧
- 关键词：禽病原性大肠杆菌同源重组突变体
- 嵌合鞭毛蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中的表达与组装分析（英文）
- 2017年
- 鞭毛蛋白根据能否组装可以表达为单体或多聚体。目前,关于它们之间的区别少有报道。文中,将重组质粒p ET-fli C/M2e2分别导入大肠杆菌BL21(DE3)和沙门菌SL5928中来表达嵌合鞭毛蛋白mfli C/M和pfli C/M,然后分析它们的组装特性。SDS-PAGE结果表明,两重组菌成功表达了嵌合鞭毛蛋白。透射电镜观察显示,在重组大肠杆菌表面未见鞭毛,而重组沙门菌表面呈现鞭毛。将嵌合蛋白纯化后,圆二色谱(Circular dichroism,CD)分析表明,两者的CD信号明显不同,pfli C/M的CD信号与野生型鞭毛蛋白一致,而mfli C/M基本上没有CD信号出现。动态光散射分析表明,mfli C/M的聚集程度明显低于pfli C/M。将嵌合蛋白转染小鼠腹腔细胞3 h后,两者均能诱导产生IL-1β,但mfli C/M组高于pfli C/M组。以上结果对于鞭毛蛋白表达形式的选择具有重要的参考价值。
- 胡茂志潘志明杨芸孟闯张磊耿士忠焦新安
- 关键词：鞭毛蛋白白细胞介素1Β
- 副溶血性弧菌Vop T蛋白的表达及其抗体的毒力菌株特异性研究
- 2015年
- 目的研究副溶血性弧菌VopT蛋白的菌群特异性,为建立致病性副溶血性弧菌的快速检测方法以及探讨VopT的作用机制奠定基础。方法根据副溶血性弧菌VopT蛋白基因(VPA1327)序列设计合成引物,通过PCR从副溶血性弧菌致病株WX06152(血清型O3∶K6)中扩增出目的基因,构建原核表达载体pET-30a(+)-VPA1327并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,重组蛋白应用MALDI-TOF-MS/MS鉴定和His镍柱纯化,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清,建立副溶血性弧菌VopT蛋白的间接ELISA检测方法,并分析其敏感性和毒力菌株特异性。结果成功表达了大小为33kDa融合蛋白,肽指纹图谱与副溶血性弧菌VopT蛋白一致。重组VopT抗血清能够特异性检测副溶血性弧菌毒力株的全菌细胞及其裂解蛋白,与环境株及其它种属菌株无明显交叉反应,灵敏度达到105 CFU·mL-1。结论重组VopT的抗血清具有良好特异性,为探讨VopT致病机理和分泌机制研究提供了一定的参考依据。
- 杨振泉饶胜其高璐薛峰李平方维明焦新安
- 关键词：副溶血性弧菌多克隆抗体特异性
- 密码子优化的鸡IL-17在昆虫细胞中的表达
- 为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡IL-17，在前期研究工作基础上，将其编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造，经全基因合成后插入到转座载体pFastBacnTM I中，构建重组转移载体pf...
- 康喜龙潘志明杨芸赵雯焦新安
- 关键词：杆状病毒编码基因真核表达昆虫细胞
- 梅花鹿γ干扰素双单抗夹心ELISA方法的初步建立被引量：2
- 2013年
- 为利用抗牛γ干扰素(BoIFN-γ)特异性单克隆抗体(MAb)建立检测梅花鹿γ干扰素(CerIFN-γ)的双抗体夹心ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法从双阳型梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA中扩增出CerIFN-γcDNA,通过原核表达系统表达重组CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通过间接ELISA方法评价其与抗BoIFN-γMAb的反应性,筛选出与之反应最佳的两株MAb建立双抗体夹心ELISA检测方法。基因序列比对显示CerIFN-γ(JQ408441)与BoIFN-γ的同源性为95.6%,氨基酸序列的同源性为91.6%;SDS-PAGE检测结果显示CerIFN-γ在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效可溶性表达,大小为23 ku;间接ELISA结果显示42株MAb中有15株与rHis-CerIFN-γ反应性较好,其中1C12和5E11两株抗体结合活性最高;采用MAb 1C12为捕获抗体,以生物素标记的MAb 5E11为检测抗体建立的用于检测CerIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法可检出3.05 ng/100μL的rHis-CerIFN-γ。本研究所建立的检测CerIFN-γ双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究CerIFN-γ及相关疾病提供了实验手段。
- 解晓莉徐正中孟闯单锋丽单法陈祥焦新安
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
- 一株针对H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白茎部的单克隆抗体的表征被引量：3
- 2022年
- 流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的茎部区相对保守,是广谱疫苗、抗体与病毒检测制剂的重要靶点。前期研究获得了一株与H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白茎部多肽(aa428–452)反应的单克隆抗体(5D3-1B5)。为系统评价其生物学特性,本研究测定了5D3-1B5的抗体效价(IgG、血凝抑制与病毒中和滴度),鉴定了抗体识别的抗原表位与编码基因的序列及结构,并评价了抗体与不同亚型流感病毒的交叉反应性。结果显示,5D3-1B5不具有针对H7N9病毒的血凝抑制与病毒中和活性,但是与HA蛋白的反应性较强;基于多肽的酶联免疫吸附试验与噬菌体表面展示随机多肽文库筛选的方法,鉴定了5D3-1B5识别的表位是位于HA茎部C螺旋区的^(431)W-^(433)Y-^(437)L基序,且含有该表位突变的重组H7N9病毒失去了与抗体的反应性;测定了抗体可变区的基因序列并定位了轻链与重链可变区的互补决定区;抗体可变区的结构模拟与分子对接则验证了抗体与HA蛋白茎部C螺旋区的结合;值得注意的是,5D3-1B5与group 1和2不同亚型的流感病毒具有广谱反应性。因此,5D3-1B5具有作为流感病毒广谱检测与抗体治疗制剂的应用潜力,研究结果也为认识H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的抗原表位特征提供了新的信息。
- 赵江艳朱颜笑胡娇胡增垒刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒单克隆抗体抗原表位交叉反应性
