江苏大学临床医学院医学基础与临床医学研究中心
- 作品数：33 被引量：179H指数：9
- 相关作者：郑德明余浩钱雷鸣贡爱华刘景波更多>>
- 相关机构：苏州大学医学部基础医学系苏州大学医学部南京医科大学附属常州第二人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目镇江市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成年大鼠活体嗅粘膜原代培养细胞中神经干细胞的生长特性及形态学观察被引量：7
- 2004年
- 为建立成年活体嗅粘膜神经干细胞的简便、实用的体外培养方法 ,进而为神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的研究提供更为安全的候选细胞 ,本实验自成年大鼠活体分离剪取部分嗅粘膜经胰酶消化制成细胞悬液 ,接种于玻璃培养皿 ,用含 10 %胎牛血清的 F12培养基培养 ,动态观察神经干细胞克隆球的形成及分化过程 ,并用 nestin、NSE、GFAP、vim entin及laminin等抗体作免疫细胞化学染色 ,对阳性细胞进行形态学鉴定。结果显示 ,成年大鼠经嗅粘膜活体取材后 ,可长期存活。成体嗅粘膜细胞混合体外培养时不同类型细胞的贴壁时间存在差异 ,神经干细胞呈球形 ,不直接贴附于培养皿 ,仅粘着在首先贴壁的扁平基底细胞上分裂形成克隆球 ,球内细胞 nestin免疫细胞化学染色阳性。原代培养 14 d后克隆球不再生长 ,球周细胞逐渐向外迁移分化为嗅细胞和嗅鞘细胞。提示 ,成体嗅粘膜神经干细胞可在普通培养基中形成干细胞克隆球 ,嗅粘膜中的其它细胞作为神经干细胞的基底饲养细胞有助于干细胞克隆球的形成 ;活体分离成体嗅粘膜作混合细胞体外培养获取神经干细胞的方法简便、安全、可行 ;本结果为嗅粘膜神经干细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤的可行性研究提供了动物实验资料。
- 张志坚姜平端礼荣刘锦波龚爱华王存祖钱雷敏
- 关键词：神经干细胞免疫细胞化学嗅粘膜形态学
- 神经生长因子对内耳缺血再灌注毛细胞损伤的保护作用被引量：6
- 2003年
- 目的:探讨神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对缺血再灌注内耳损伤大鼠耳蜗毛细胞的作用。方法:选用健康SD大鼠单纯随机分5组:正常对照组;假手术组;缺血再灌组;盐水对照组(缺血再灌+生理盐水);NGF组(缺血再灌+神经生长因子)。闭塞双侧椎动脉和颈总动脉建立内耳缺血再灌注模型,于内耳缺血30min再灌注2h,1,3,7d不同时间取耳蜗制备样本扫描电镜观察。结果:缺血再灌组、盐水对照组耳蜗外毛细胞损伤严重,静纤毛散乱脱落、倒伏及粘连,外毛细胞散在或灶状坏死缺失,出现不规则空洞缺损,瘢痕形成。NGF组肌注NGF后静纤毛损伤与外毛细胞坏死明显减轻,静纤毛排列整齐,无严重散乱脱落现象,偶见底回静纤毛轻度粘连,外毛细胞表面结构基本正常,未见明显坏死缺失。结论:NGF对内耳缺血再灌注毛细胞损伤有明显的保护作用,NGF能减轻和改善缺血再灌注引起的听觉神经细胞的损伤。
- 施宁华张志坚戴树宏
- 关键词：神经生长因子内耳缺血再灌注毛细胞损伤NGF手术NGF
- 人脑源性神经营养因子基因克隆及序列分析被引量：2
- 2005年
- 刘锦波顾卫东张志坚王永忠
- 关键词：脑源性神经营养因子基因克隆聚合酶链反应
- 胃癌细胞体外药敏试验中的条件优化
- 2006年
- 目的：探讨胃癌细胞体外药敏试验中的适宜条件。方法：利用正交试验，取3个水平4个因素进行全面考察，筛选出最佳实验条件。结果：胃癌细胞体外药敏试验中应取（2～3）×10^4个／ml细胞密度，并在接种后立即加入10PPC的抗癌药物，药物作用时间为72h。结论：经正交试验筛选出的最佳试验条件可有效提高体外药敏试验的灵敏度，为临床个体化疗提供方法学依据。
- 钱小蔷汤坚张九如张志坚
- 关键词：正交试验药敏试验
- 大鼠眼挫伤后视网膜BDNF及其受体TrkB的表达被引量：1
- 2006年
- 目的探讨眼挫伤后视网膜脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体-酪氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)的表达。方法重击法致2个月龄SD雄性大鼠眼挫伤,伤后1、4、7、14d分别取材,冰冻切片,免疫组化检测BDNF和TrkB,并与正常同龄大鼠视网膜BDNF和TrkB相比较。结果正常同龄大鼠视网膜有少量BDNF和TrkB表达;而挫伤眼,在伤后不同的时间有不同程度的BDNF和TrkB表达增加。结论眼挫伤后视网膜BDNF和TrkB表达增加,说明BDNF和TrkB参与眼挫伤后视网膜的修复过程。
- 肖寿华张志坚邵倩杨勇缪竞诚
- 关键词：眼挫伤视网膜SD雄性大鼠TRKBBDNF后视网膜免疫组化检测
- 神经生长因子及其受体在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达及其生物学意义被引量：7
- 2006年
- 目的:观察神经生长因子在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达、分布及其生物学作用。方法:实验于2005-07/12在江苏大学医学院基础与临床研究中心完成。①U251培养3d后,于培养基中加入终浓度为2mmol/L羟基脲继续培养24h(≥1个细胞周期),使细胞同步化于DNA合成期。②用免疫荧光法对细胞内神经生长因子及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶受体A进行染色定位。③免疫印迹法检测U251培养上清液中的神经营养因子表达。④促胚胎脊髓神经细胞生长试验鉴定U251细胞培养上清液的神经营养因子活性。取怀孕16d的SD大鼠1只,断头处死,浸泡体积分数为0.75的乙醇20min后剖腹取胎鼠,分离脊髓组织,细胞培养2d后,分别加入无血清DMEM(对照组)及培养过U25124h的无血清DMEM(实验组)。结果:①神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A在U251中高表达,神经生长因子主要呈颗粒状分布于胞浆及胞核内,酪氨酸蛋白激酶受体A分布于胞膜及核仁部位。②U251无血清培养上清液能够促进胚胎脊髓神经细胞集落的形成,实验组集落数明显多于对照组(345.38±14.15),(145.5±12.71)/孔,P<0.01);且在浓缩的U251无血清培养上清液中检测出相对分子质量为36000的神经生长因子肽链。结论:人脑胶质瘤细胞株U251呈神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A强阳性表达,且能合成并分泌具有生物学活性的神经营养因子,相对分子质量为36000的神经生长因子是其中主要成分之一。
- 杨勇彭浩陈超波虞浩张志坚龚爱华王存祖陈永昌
- 关键词：神经胶质瘤神经生长因子受体蛋白质酪氨酸激酶类
- 脑源性神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞移植对大鼠损伤脊髓的保护作用被引量：10
- 2006年
- 我们以重组缺陷型腺病毒为载体，将脑源性神经营养因子（BDNF）基因转染的嗅鞘细胞移植入大鼠损伤的脊髓，观察脊髓修复和肢体功能恢复情况，为将来应用基因工程细胞移植治疗脊髓损伤提供依据。
- 刘锦波顾卫东贡爱华张志坚王永忠
- 关键词：脑源性神经营养因子嗅鞘细胞移植损伤脊髓基因修饰细胞移植治疗基因转染
- 丙烯酰胺对胚胎脊髓神经细胞增殖分化影响被引量：4
- 2008年
- 目的研究丙烯酰胺(ACR)对胚胎脊髓神经细胞增殖分化的影响。方法利用大鼠胚胎脊髓神经细胞进行原代培养,从细胞形态学及细胞计数学角度观察不同浓度ACR对细胞生长与分化的影响;同时测定蛋白质含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并与对照组进行比较。结果150,300μg/ml的ACR对大鼠胚胎脊髓神经细胞无抑制增殖和分化作用,当ACR浓度达到450,600,750μg/ml时作用才显现,并随着浓度的加大,其抑制作用增强。结论ACR能抑制胚胎脊髓神经细胞增殖和分化,可能与其能抑制蛋白质合成、DNA有关。
- 端礼荣邢光伟张志坚龚爱华
- 关键词：细胞增殖和分化
- 大鼠脊髓损伤后NGF及其受体TrkA在运动神经元及神经胶质细胞表达的变化被引量：7
- 2004年
- 为探讨脊髓损伤后运动神经元及神经胶质细胞内神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体(TrkA)表达的变化,用改良Allen重击法损伤SCI组动物T12脊髓,按伤后存活时间再将动物分为脊髓损1 d组、2 d组和5 d组。各组动物的脊髓切片经ABC法免疫组织化学染色,用光镜观察TrkA及NGF在脊髓前角运动神经元表达的变化和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及NGF免疫反应阳性胶质细胞的反应性增生程度,并进行图像分析。结果显示:脊髓损伤后前角运动神经元TrkA及NGF的表达随脊髓损伤后动物存活时间的延长逐渐上调;脊髓白质和灰质内尤其是皮质脊髓束内GFAP及NGF阳性胶质细胞明显增生;与此同时,室管膜细胞内亦可见明显的NGF免疫反应产物。上述结果表明,脊髓损伤可刺激脊髓前角运动神经元表达TrkA及NGF,通过自分泌维持受损神经元的存活;损伤部位反应性增生的胶质细胞亦可产生NGF,通过旁分泌作用于脊髓前角运动神经元或皮质脊髓束的轴突末梢,以维持运动神经元的存活及促进皮质脊髓束的再生;适时补充外源性神经营养素或改变损伤局部的微环境将有利于受损脊髓的修复和再生。
- 姜平张志坚刘锦波李君荣任春兰许燕钱雷敏
- 关键词：脊髓损伤胶质纤维酸性蛋白运动神经元神经胶质细胞
- bFGF和丹参对缺血再灌注兔心肌琥珀酸脱氢酶活性的影响被引量：9
- 2003年
- 目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和丹参对缺血心肌病理改变的影响以及bFGF和丹参的抗损伤作用机制。方法 :采用组织化学的方法观察实验性缺血再灌注 (I R)损伤后心肌琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性的改变以及bFGF和丹参的影响 ,并用图像分析仪检测酶活性的变化。结果 :缺血再灌注损伤后心肌琥珀酸脱氢酶的活性和对照组相比明显下降 ,bFGF和丹参组SDH活性下降明显轻于I R组。结论 :bFGF和丹参能有效地减轻I
- 张征仙任春兰陈素仙王海波
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子丹参缺血再灌注心肌
