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南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室: 作品数：756 被引量：3,927H指数：28; 相关作者：陈德胜刘捷刘永庆汤景元潘杰彦更多>>; 相关机构：宁夏大学农学院上海交通大学农业与生物学院宁夏大学农学院动物科学系更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因A/D区的构建及原核表达研究: 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列...; 王海震李学仁周斌陈溥言; 关键词：猪瘟病毒 E2基因; 文献传递

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建、鉴定与免疫原性的研究: 猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和核衣壳蛋白(Cap蛋白),其中Cap蛋白含有病毒主要抗...; 王先炜姜平李玉峰蒋文明; 关键词：猪圆环病毒 CAP蛋白腺病毒免疫原性; 文献传递

PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定: 以猪肾细胞(PK-15)为材料，比较真核细胞膜蛋白提取试剂盒、超声破碎法、反复冻融法、低渗裂解法4种不同方法对PK-15细胞膜蛋白提取的影响，结果表明，通过超声破碎的膜制备方法提取的PK-15细胞膜蛋白较理想。用此方法提...; 周斌刘晓东王凤鹃刘珂陈溥言; 关键词：猪瘟病毒膜蛋白表面受体

鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达及其产物纯化: 本文将鸡胚致死孤儿病毒Ⅲa蛋白原核表达,通过Ⅲa蛋白检测动物机体内的抗体水平和感染率,以便进行CELOV流行病学调查.; 周斌齐香荣杨耀武芦银华陈溥言; 关键词：鸡胚致死孤儿病毒原核表达克隆; 文献传递

质粒介导的核衣壳蛋白siRNA干扰A型流感病毒复制的研究被引量：4: 2005年; Influenza A virus is a widespread pathogen,but current vaccines and drug therapy are of limited value. RNAi may provid a novel route to control it since RNAi can inhibit gene expression high-efficiently and specificly. A recombinant plasmid with a short hairpin RNA(shRNA)targeting at the nuclear protein gene of the virus was constructed and identified by enzyme digestion and sequence analysis.The hemagglutination(HA) titre and TCID 50 of the virus in chicken embryo fibroblastic(CEF)cells transfected with the plasmid was lower than that nontransfected with the plasmid.It showed that the plasmid could specifictly inhibit the virus production in CEF cells.; 黄娟姜平顾小雪许家荣李玉峰; 关键词：A型流感病毒核衣壳蛋白基因

口蹄疫病毒实时RT-PCR检测方法的建立被引量：16: 2006年; 目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌肉、皮肤、舌、颈浅淋巴结、脾脏、喉头、食管、腹股沟淋巴结、肺脏、扁桃体、肝脏、肾脏、胸肌、心脏、鼻黏膜、后肢肌肉、脑、骨髓、软腭和血清等样品。结果(1)该方法检测FMDV下限为0.01TCID50,其敏感性比普通RT-PCR高100倍,并具有较好的特异性和重复性,(2)FMDV感染仔猪血清、淋巴结、扁桃体和肝脏中病毒含量较高是检测口蹄疫病毒很好的样品。结论建立了一种实时RT-PCR检测口蹄疫病毒的方法。; 李永东张常印姜平唐泰山杨晓伟杜以军; 关键词：口蹄疫病毒 TAQMAN 实时RT-PCR

猪链球菌2型的纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因的序列分析: 2006年; 目的为确定猪链球菌2型(SS2)江苏分离株9801是否具有纤连蛋白／血纤维蛋白原结合蛋白基因(fbps)。方法根据已发表的SS2 fbps序列,设计并合成1对引物,以SS2江苏分离株的基因组为模板,采用聚合酶链反应(PER)方法扩增fbps,克隆于pMD-T18载体。测定阳性质粒插入序列。利用DNAstar软件,比较所测序列与不同来源SS2的fbps和FBPS与链球菌属其他种同源蛋白的同源性。结果扩增的fbps为1 938 bp,江苏分离株与猪源致病性SS2荷兰分离株的fbps序列有5个碱基不同,与ATCCA3765株有3个碱基不同,同源性均达99．99％以上。推导的氨基酸序列比较,分别有4个和2个氨基酸不同,同源性均为99％以上。纤连蛋白结合蛋白(FBPS)无前导序列,无锚定序列,与链球菌属其他种的同源Fn结合蛋白的同源性为68．8％～76．0％。结论FBPS是一种无锚的黏附素。; 孙理云范红结陆承平; 关键词：猪链球菌2型克隆

马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗小鼠免疫试验被引量：4: 2006年; 为获得控制猪链球菌病安全高效的疫苗,本试验进行了马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗的研制。应用热酸法提取马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白,并分别采用羟基磷灰石(HAT)层析和冷酒精沉淀法进行纯化,结果得到较纯的类M蛋白。用热酸提取的粗制类M蛋白、2种纯化的类M蛋白及全菌苗免疫小鼠,结果保护率分别为92%(11/12)、100%(12/12)、100%(12/12)和83%(10/12),表明类M蛋白亚单位疫苗有进一步开发的必要。; 王建刘佩红沈素芳沈莉萍王永康陆承平; 关键词：马链球菌兽疫亚种类M蛋白疫苗

猪瘟病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及鉴定: 根据猪瘟病毒衣壳蛋白C基因序列设计一对引物,RT-PCR扩增获得编码猪瘟病毒衣壳蛋白的C基因片断,将其插入到含有葡萄球菌核酸酶SN基因的真核表达载体pcDNA-SN中,筛选获得重组质粒pcDNA-C-SN。脂质体转染猪肾...; 周斌刘珂陈溥言; 关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白葡萄球菌核酸酶抗病毒感染; 文献传递

插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建被引量：3: 2006年; 根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。; 王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言; 关键词：TK基因 CRE LOXP