贵州医科大学医学检验学院 作品数:300 被引量:886 H指数:12 相关作者: 张亚莉 肖芸 张春阳 杨国珍 左雅敏 更多>> 相关机构: 贵州大学医学院 吉林医药学院基础医学院 湖北民族大学附属民大医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 贵州省科技计划项目 贵阳市科学技术计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 理学 更多>>
原发性干燥综合征并发血小板减少的危险因素分析 被引量:1 2022年 目的探讨原发性干燥综合征并发血小板减少患者外周血淋巴细胞亚群变化及危险因素。方法选取就诊于贵州医科大学附属医院的43例原发性干燥综合征患者作为研究对象,按血小板计数分为血小板减少组(16例)和血小板正常组(27例),收集所有患者外周血淋巴细胞亚群[CD3^(+)T、CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(+)CD8^(+)T、CD3^(-)CD19^(+)B、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)自然杀伤(NK)细胞]绝对计数、血清免疫球蛋白、补体、自身抗体等免疫学指标及临床资料。采用独立样本t检验分析两组淋巴细胞亚群及免疫学指标的差异,采用多因素Logistic回归分析评估原发性干燥综合征并发血小板减少的独立危险因素。结果血小板减少组患者外周血CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(-)CD19^(+)B淋巴细胞绝对计数及血清IgM表达水平均明显高于血小板正常组,而CD3-CD16+CD56+NK细胞绝对计数及补体C4表达水平均明显低于血小板正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,CD3-CD19+B淋巴细胞绝对计数和IgM表达水平升高是干燥综合征并发血小板减少的独立危险因素(OR=1.011、5.693,95%CI:1.001~1.020和1.376~23.557),补体C4表达水平降低是干燥综合征并发血小板减少的保护因素(OR=0.981,95%CI:0.965~0.998)。结论外周血CD3^(+)CD4^(+)T、CD3^(-)CD19^(+)B、CD3^(-)CD16^(+)CD56^(+)NK细胞绝对计数及血清IgM、补体C4表达水平可能与原发性干燥综合征并发血小板减少的发病有关,其中CD3^(-)CD19^(+)B淋巴细胞绝对计数和IgM表达水平升高是影响其发生的独立危险因素,提示原发性干燥综合征并发血小板减少患者体内存在明显的免疫功能紊乱。 代宛蓉 张宇 马莉关键词:原发性干燥综合征 血小板减少 淋巴细胞亚群 免疫学指标 苯亚急性染毒对大鼠造血系统的影响及其机制 被引量:1 2016年 目的探讨苯亚急性染毒对大鼠造血系统的影响及其机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、苯低剂量组、苯中剂量组和苯高剂量组,每组6只。苯低、中、高剂量组分别按照体质量给予200、400、800 mg/kg苯溶液灌胃,空白对照组未经任何处理,溶剂对照组给予等量玉米油灌胃;均1次/d,连续处理28天。采用全自动血细胞分析仪检测血常规,处死大鼠后计算肝脏、脾脏系数,观察股骨病理改变及骨髓、外周血细胞形态改变;采用单细胞凝胶电泳法检测骨髓及外周血细胞DNA损伤情况,记录尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)。结果苯低、中、高剂量组白细胞均低于空白对照组和溶剂对照组,苯高剂量组红细胞均低于其余各组,苯中、高剂量组血红蛋白均低于其余各组(P均<0.05);各组间血小板比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组肝脏、脾脏系数比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。空白对照组、溶剂对照组股骨病理改变及骨髓、外周血细胞形态改变基本一致;苯低、中、高剂量组股骨病理显示造血组织面积减小,骨髓、外周血细胞有较多中毒颗粒、空泡,随着苯染毒剂量的增加,上述改变越明显。苯低、中、高剂量组骨髓及外周血细胞TM和OTM依次升高,且均高于空白对照组、溶剂对照组(P均<0.01)。结论苯亚急性染毒对大鼠骨髓具有毒性损伤作用,且呈浓度依赖性,可能与其导致外周血、骨髓细胞发生DNA损伤有关。 张越时 郑丹 杨国珍 万秀方 龚骏杰 王永红 张亚莉关键词:苯 亚急性染毒 骨髓细胞 DNA损伤 单细胞凝胶电泳 四种酶处理液化异常精液对精子形态学影响的评估 被引量:2 2020年 目的分别通过胰蛋白酶、糜蛋白酶、透明质酸酶、菠萝蛋白酶对精液进行处理,观察液化情况,记录液化时间,染色后镜下观察对精子形态的影响。方法每例精液标本均分别设立为五组,即对照组(不加处理因素)、胰蛋白酶组、糜蛋白酶组、透明质酸酶组、菠萝蛋白酶组,观察精液液化情况、并记录液化时间。筛选出液化正常精液标本30例,液化异常精液30例,待标本完全液化后,瑞氏染色,选择两名有经验的工作人员双盲法按照第五版《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》所规定的方法,分别记录头部、颈部和中段、主段的畸形率,对精子形态进行分析。结果液化异常精液组中加入四种酶后,各酶处理组精液液化时间较对照组显著缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。正常液化精液组:加入胰蛋白酶后,头部畸形率明显升高,出现大头、小头、锥形头、梨形头等;加入透明质酸酶后精子颈部和中段、主段畸形率明显升高,颈部和中段出现粗或不规则,主段出现断裂,成角弯曲,卷曲等,主段、颈部和中段,差异均有统计学意义(P<0.01)。液化异常精液组:加入胰蛋白酶后,主段出现断裂,成角弯曲,卷曲等,差异有统计学意义(P<0.01);加入透明质酸酶后颈部和中段畸形率、主段畸形率明显升高,颈部和中段出现粗或不规则,主段出现断裂,成角弯曲,卷曲等,主段、颈部和中段,差异均有统计学意义(P<0.01)。其余各酶处理组各部畸形率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论通过加入糜蛋白酶或菠萝蛋白酶来缩短精液液化时间,改善精液液化情况,进一步提高液化异常精液精子形态学分析的可靠性。 王世君 彭晓枫 张梅关键词:精液检查 基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建 2022年 目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。 崔古贞 花登雄 鲍江舰 张馨月 洪伟 吴道艳 向松 谷俊莹 陈峥宏XPD基因在氢醌致U937细胞DNA损伤修复中的作用 被引量:2 2017年 目的探讨XPD基因在氢醌(HQ)致U937细胞DNA损伤修复中的作用。方法选择5、10、20、40、80μmol/L HQ分别对U937细胞染毒12、24、48 h,根据各浓度下U937细胞活性,选择10、20、40μmol/L HQ染毒24、48 h进行后续实验。取10、20、40μmol/L HQ染毒24、48 h U937细胞,分别设为HQ低、中、高浓度组,另取未染毒U937细胞作为空白对照组,采用单细胞凝胶电泳检测各组细胞尾矩(TM)、Oliv尾矩(OTM),采用Western blotting法检测各组XPD蛋白相对表达量。结果与空白对照组比较,HQ低、中、高浓度组染毒24、48 h TM和OTM均明显增大(P均<0.05);与同组染毒24 h比较,HQ低、中、高浓度组染毒48 h TM和OTM均明显增大(P均<0.05),染毒48 h HQ低、中、高浓度组TM和OTM依次升高(P均<0.05)。与空白对照组比较,HQ低、中、高浓度组染毒24 h XPD蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),且HQ高浓度组明显高于HQ低浓度组(P均<0.05);染毒48 h,HQ高浓度组XPD蛋白相对表达量明显高于空白对照组及HQ低、中浓度组(P均<0.05),但空白对照组及HQ低、中浓度组两两比较差异均无统计学意义(P均>0.05);HQ各浓度组染毒48 h XPD蛋白相对表达量与染毒24 h比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 XPD基因表达上调可促进HQ致U937细胞DNA损伤修复。 王永红 李攀登 肖芸 万秀方 郑丹 温缘缘 赵雪 张亚莉 杨国珍关键词:DNA损伤 氢醌 XPD基因 DNA修复 亚砷酸钠所致L-02人肝细胞损伤与p14ARF表达下调及MDM2、 p53表达增加有关 被引量:4 2020年 目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)致L-02人肝细胞损伤过程中p14可变读框(p14ARF)、鼠双微基因2(MDM2)和p53的表达变化。方法用(0、5、10、15、20、25)μmol/L NaAsO2分别处理L-02细胞48 h,相差显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞增殖,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测p14ARF、MDM2和p53 mRNA及蛋白表达。结果与对照组相比,随着NaAsO2浓度增加,染砷组L-02肝细胞增殖活性逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,p14ARF mRNA及蛋白水平逐渐降低,MDM2 mRNA及蛋白水平逐渐升高,p53 mRNA水平变化不明显,p53蛋白水平逐渐升高。结论NaAsO2所致L-02肝细胞损伤可能与p14ARF表达下调及p53、MDM2表达的上调有关。 王甜 赵哲仪 穆银贵 谢婷婷 罗昭逊关键词:L-02肝细胞 P53 胃癌组织中α肌动蛋白4表达及其对胃癌AGS细胞迁移的影响 被引量:1 2021年 目的探讨胃癌(GC)组织中α肌动蛋白4(ACTN4)的表达及其对GC细胞系AGS细胞迁移的影响。方法采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库预测ACTN4在GC中的表达及ACTN4与GC淋巴结转移、肿瘤分期之间的相关性,采用Kaplan-Meier Plotter数据库对ACTN4表达水平在GC中的预后价值进行评估;取对数生长期的GC细胞系AGS、MKN45、HGC-27、MGC803、胃正常黏膜细胞系GES-1与20例GC患者的GC组织及其癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞系和组织中ACTN4 mRNA及蛋白表达;慢病毒构建GC ACTN4敲低模型,采用划痕实验检测AGS细胞迁移能力。结果数据库数据分析发现ACTN4在GC组织中高表达且表达水平与GC淋巴结转移及肿瘤分期呈正相关(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析表明ACTN4与GC预后不良呈正相关(P<0.05);ACTN4在AGS细胞系中高于GES-1、在GC组织中高于癌旁组织(P<0.05),敲低ACTN4后GC细胞系AGS的迁移能力减弱(P<0.05)。结论ACTN4在GC中高表达且促进AGS细胞的迁移。 杜洪 夏英 金泳 韦四喜 夏万松 李红羽 袁婷 黄海关键词:胃肿瘤 计算生物学 迁移 嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域活性位点分析 2022年 【背景】嗜热Ⅱ型内含子是一类由内含子RNA和内含子编码蛋白(intron encoded protein,IEP)组成且在高温条件下能够在染色体上高频移动的反转录转座子,目前已被开发为高效基因打靶工具Thermotargetron,阐明其活性催化位点,对深入研究其“归巢”机制及开发新型遗传工具具有重要意义。【目的】筛选嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点,并获得失活反转录功能的内含子编码蛋白突变体。【方法】先利用生物信息学技术分析并筛选可能影响Tel3c/4c-RT反转录功能的关键氨基酸位点;然后对筛选到的关键氨基酸位点进行定点突变,并以Thermotargetron质粒为基础构建失活反转录功能的突变型嗜热Ⅱ型内含子打靶系统;最后以大肠杆菌lacZ基因为例,通过蓝白斑计数分析突变型Thermotargetron系统的打靶效率,体内验证Tel3c/4c-RT结构域关键活性位点突变对嗜热Ⅱ型内含子打靶效率的影响。【结果】共筛选到15个可能影响反转录活性的氨基酸位点,包括D194、I195、S196、G197、C198、F199、Q241、G242、R274、Y275、A276、D277、D278、L324和G325。其中,当G242和R274这2个位点突变后,嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c的“归巢”效率几乎完全丧失,表明G242和R274是影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的最核心催化位点。【结论】筛选并获得影响嗜热Ⅱ型内含子Tel3c/4c-RT结构域反转录功能的关键催化位点,为深入研究嗜热Ⅱ型内含子的“归巢”机制及其功能应用开发奠定了良好的基础。 花登雄 王鑫鑫 陈峥宏 洪伟 汪依航 俞青凤 谷俊莹 崔古贞关键词:大肠杆菌 外阴阴道念珠菌病发病机制及抗生物膜治疗的研究进展 2023年 外阴阴道念珠菌病是一种主要由白念珠菌引起的症状性阴道炎症,有近40%的患者会复发,部分患者甚至发展为复发性外阴阴道念珠菌病。该文讨论了白念珠菌的致病机制,并概括了外阴阴道念珠菌病抗生物膜治疗的最新进展。 张欢欢 莫非 刘艺清 丁文静 渠巍(审校)关键词:外阴阴道念珠菌病 白念珠菌 宿主免疫 生物膜 长基因间非编码RNA963不同可变剪接体在胃癌细胞系中的表达和作用 被引量:1 2021年 目的探讨长基因间非编码RNA963(LINC 00963)不同可变剪接体(V)在胃癌(GC)细胞系中的表达和作用。方法取对数生长期的GC细胞系AGS、MKN45、HGC-27、MGC803及胃正常黏膜细胞系GES-1,采用常规聚合酶链式反应(PCR)扩增LINC 00963、扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和克隆测序验证LINC 00963存在于GC中的多个可变剪接体,采用荧光定量PCR检测上述细胞中LINC 00963 V表达量、5′cDNA末端快速扩增技术(5′RACE)分析LINC 00963 V的转录起始位点、美国国家生物技术信息中心(NCBI)开放阅读框查找器初步分析不同V蛋白编码能力;取对数生长期GC HGC-27细胞,采用基因沉默技术敲低LINC 00963-V1,设对照(si-NC)组和敲低组(si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b),免疫印迹分析各组HGC-27细胞中BCL2相关X凋亡调节因子(Bax)、BCL2凋亡调节因子(Bcl-2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达。结果克隆测序及琼脂糖凝胶电泳明确LINC 00963基因至少存在3个未见报道的V,分别命名为LINC 00963-V1、V2及V3;实时荧光定量PCR结果显示,与GES-1细胞系相比,LINC 00963-V1、V2在HGC-27细胞系中高表达(P<0.05);5′RACE探寻到多个转录起始位点,开放阅读框分析显示新发现的V蛋白编码能力较弱;与si-NC组相比,si-V1-a、si-V1-b及si-V1-a+b组HGC-27细胞Caspase-3表达增高、Bcl-2表达降低,si-V1-a组和si-V1-b组Bax表达增高(P<0.05)。结论LINC 00963存在3个及以上未见报道的V,其中V1在GC细胞系中高表达且有抑制肿瘤细胞凋亡相关基因表达的作用。 杜洪 夏万松 韦四喜 夏英 金泳 李红羽 袁婷 黄海关键词:胃肿瘤 基因表达 开放阅读框