重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室 作品数:41 被引量:106 H指数:6 相关作者: 姚莉 韩晓凤 夏飞 徐晓明 邓莉 更多>> 相关机构: 第三军医大学高原军事医学系 第三军医大学基础部 重庆大学生物医学工程联合学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达 2012年 目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。 王瑞敏 星懿展 郭海英 何龙 杨恬 连小华 查何 彭惠民关键词:JNK 毛囊 毛囊周期 小鼠 PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量:42 2008年 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 胡晓红 彭惠民 刘昕 黄正根 袁科关键词:DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR LncRNA H2k2促进高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的研究 被引量:1 2020年 该研究主要探讨lncRNA H2k2对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRTPCR检测lncH2k2在正常及糖尿病肾病小鼠肾脏组织中的表达,以及高低糖培养的系膜细胞中的表达;FISH与qRT-PCR检测lncH2k2的亚细胞定位;qRT-PCR检测lncH2k2过表达质粒及siRNA的转染效率;EdU检测转染lncH2k2过表达质粒或siRNA后系膜细胞增殖的变化。结果表明,lncH2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及高糖培养的系膜细胞中的表达升高,且lncH2k2主要分布于系膜细胞的细胞质中。在低糖培养的系膜细胞中转染lncH2k2过表达质粒后,与低糖培养的系膜细胞相比,过表达lncH2k2的低糖培养的系膜细胞增殖能力显著提高,并且将qRT-PCR检测筛选出的一条lncH2k2 siRNA转染到高糖培养的系膜细胞内,与高糖培养的系膜细胞相比,敲低lncH2k2后系膜细胞增殖能力显著降低。研究结果揭示,lncRNA H2k2在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及系膜细胞中表达显著,lncRNA H2k2促进了系膜细胞增殖,这些结果表明,lncRNA H2k2可能参与了糖尿病肾病的发生发展。 廖雨滋 陈雯韵 孙艳 彭睿 张政关键词:糖尿病肾病 长链非编码RNA 肾小球系膜细胞 增殖 腺病毒介导人ATF6基因修饰对体外细胞增殖凋亡的实验研究 2015年 目的:构建携带人活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)的重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 si RNA,并探讨内质网应激(ER Stress,ERS)时其对人软骨肉瘤细胞SW1353增殖凋亡的影响。方法:将ATF6基因序列与靶向ATF6的si RNA序列分别克隆到p Ad Track-cmv和p SES-HUS穿梭质粒上,然后分别与腺病毒骨架质粒p Ad Easy-1在大肠杆菌BJ5183感受态中同源重组,得到腺病毒重组质粒p Ad-ATF6和p Ad-ATF6 si RNA,通过脂质体介导在HEK293细胞中进行包装和扩增。通过RT-PCR和Western blot检测病毒效果。流式细胞仪法(flow cytometry,FCM)、MTT法及Western blot检测ERS状态下ATF6对SW1353细胞增殖凋亡的影响。结果:成功获得了重组腺病毒Ad-ATF6和Ad-ATF6 si RNA。RT-PCR和Western blot结果表明,重组腺病毒能有效的感染细胞。FCM检测结果表明,ERS条件下,ATF6感染组S期细胞比例明显升高,凋亡率明显降低(P=0.000);Ad-ATF6 si RNA感染组S期细胞比例明显降低,凋亡率明显上升(P=0.000)。MTT与Western blot实验结果与FCM结果一致。结论:ERS状态下,ATF6能促进SW1353细胞的增殖,抑制其凋亡。 韩晓凤 李美玲 夏飞 张鹏 郭风劲关键词:重组腺病毒 沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能 2011年 目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。 陈俊霞 高娟 朱军 姜蓉关键词:核糖核酸酶抑制因子 膀胱癌细胞 肿瘤生长 腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制 2015年 目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,Ha Ca T细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,Ha Ca T细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况。结果:1Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt10b处理组高表达Wnt10b蛋白;2Ha Ca T细胞经Ad-GFP-Wnt10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;3Wnt10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组。结论:Wnt10b能促进Ha Ca T细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱。 陶元 王瑞敏 唐萄 杨恬 彭惠民 郭海英 星懿展关键词:HACAT细胞 迁移 siPERK对BMP2介导软骨细胞分化中增殖凋亡的影响 目的:探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)... 李美玲 夏飞 邓莉 伍志盟 郭风劲关键词:PERK 腺病毒科 软骨细胞分化 临床医学七年制普通生物学、细胞生物学及医学遗传学教学改革初探 本文旨在探讨适合临床医学七年制普通生物学、细胞生物学及医学遗传学的教学内容和教学方法.根据七年制的培养目标和学生的实际情况,通过调查研究后,协调上述三门课程的教学内容,减少与其它学科的重复,体现学科发展前沿,作重为临床医... 彭惠民 陈俊霞 郭风劲 蒲淑萍关键词:高等医学教育 普通生物学 细胞生物学 医学遗传学 教学改革 文献传递 ATF4重组慢病毒对C2C12细胞增殖和凋亡的影响 目的:构建人活性转录因子4(activating transcriptional facror4,ATF4)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中ATF4基因慢病毒修饰对BMP2诱导... 夏飞 伍志盟 李美玲 邓莉 郭风劲关键词:慢病毒 C2C12 分化 细胞增殖凋亡 Nrf2重组慢病毒对C2C12细胞增殖、凋亡和分化的影响 2017年 目的:研究Nrf2对C2C12细胞向成骨细胞分化过程增殖、凋亡和分化的影响。方法:分别构建和包装Nrf2(nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2)过表达及靶向Nrf2和活性转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的siRNA重组慢病毒颗粒;在骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导下,设立不同病毒感染组处理C2C12细胞,检测各处理组C2C12细胞的增殖、凋亡及成骨相关标志基因的表达。结果:FCM结果显示,BMP2+Lv-Nrf2组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05),BMP2+Lv-si Nrf2组细胞凋亡率高于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05),BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05)并同时低于BMP2+Lv-siATF4组(P<0.05);蛋白免疫印迹检测结果与FCM凋亡结果一致;免疫细胞化学检测结果显示,实验组BMP2+Lv-Nrf2组中骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达增高,而BMP2+Lv-si Nrf2组中两种蛋白表达均降低(P<0.05),联合处理组BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4中两种蛋白表达低于对照组和BMP2+Lv-Nrf2组(P<0.05)。结论:上述结果表明,在BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,Nrf2可抑制C2C12细胞的凋亡,促进其向成骨分化,同时,可挽回因ATF4蛋白减少而产生的细胞凋亡,但对C2C12细胞的骨向分化没有影响。 伍志盟 邓莉 胡勤 郭风劲关键词:NRF2 慢病毒 成骨分化