天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点实验室
- 作品数：165 被引量：662H指数：13
- 相关作者：蒋树海蔡兴旺魏晓琨刘珍利范婷更多>>
- 相关机构：天津大学药物科学与技术学院北京联合大学生物化学工程学院浙江大学宁波理工学院生物与制药工程系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学医药卫生更多>>
- N^+离子注入诱变选育中性蛋白酶高产菌株及发酵条件的研究被引量：12
- 2008年
- 对产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.398进行离子注入诱变,从正突变率较高的注入剂量30~50×1014ions/cm2范围内,筛选出一株高产菌株ZC-7。该菌株在优化了的摇瓶培养基中,培养42h,产酶可达16900U/mL。在7L发酵罐上控制pH6.0~7.0,溶氧10%~20%,以32℃~40℃~30℃变温发酵42h,酶活力最高可达19680U/mL,为初始菌株的2.1倍。
- 赵丛张敏王建玲杜连祥
- 关键词：中性蛋白酶离子注入诱变选育
- DL-ATC对TS1138菌株酶法生产L-半胱氨酸的影响被引量：1
- 2008年
- 以假单胞菌(Pseudomonas sp.)TS1138菌株为供试菌株,研究了在转化DL-ATC生产L-半胱氨酸过程中,DL-ATC对产酶和转化的影响.结果表明:DL-ATC对TS1138菌株产酶具有诱导作用,产酶培养中必须适量添加.从L-半胱氨酸的产量和DL-ATC转化率两个方面综合考虑,酶法生产L-半胱氨酸的最适DL-ATC为9 g.L-1,采用间歇流加DL-ATC方式可使L-半胱氨酸的产量提高56.25%.
- 李梅黄磊怀利华陈宁
- 关键词：DL-ATC酶活力L-半胱氨酸
- 嗜碱芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶基因启动子的克隆及应用被引量：2
- 2008年
- 利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(EU130686)。此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框。对启动子片段进行功能缺失的分析结果表明,TSS上游105 bp片段具有明显启动子活性,但以长为414 bp～619 bp时活性更为显著。此外,对PB92碱性蛋白酶的信号肽分析结果表明,此信号肽具有典型分泌型(Sec-type)信号肽结构。将PB92碱性蛋白酶基因启动子和信号肽序列克隆入pBE2,构建成表达载体pBEAC,并以其为载体实现了植物甜蛋白monellin基因在枯草芽孢杆菌1A751中的高效表达。
- 陈坤黎明成堃杜连祥张同存路福平
- 关键词：TAIL-PCR信号肽
- 卡尔费休滴定法测水简易装置的改进被引量：5
- 2005年
- 用带橡皮塞的导管将滴定管的上口与锥形瓶连接构成一个密闭的滴定装置,将此装置应用于卡尔费休容量法测定水含量,在滴定过程中所有试剂与外界完全隔开,防止了滴定过程中空气中水蒸气的干扰,滴定终点明显,且能稳定8 h以上.用该装置对甲醇样品中的水进行测定,回收率为100.4%～100.9%,测定结果的相对标准偏差小于0.25%.
- 戴玉杰路福平王敏赵俊
- 关键词：橡皮塞导管滴定法上口甲醇容量法
- 表皮生长因子受体干扰序列与白细胞介素24融合蛋白的原核表达被引量：1
- 2009年
- 目的:在大肠杆菌中表达表皮生长因子受体干扰序列(EGFRi)与白细胞介素24(IL-24)的融合蛋白。方法:人工合成肿瘤细胞表面受体特异性结合位点EGFRi核苷酸序列,应用重叠延伸PCR技术将其与IL-24基因连接,其间引入一段柔软短肽编码基因;将融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达条件进行优化;用His.Bind纯化试剂盒对表达产物进行纯化,SDS-PAGE进行鉴定。结果:酶切和测序结果证实EGFRi-IL-24融合基因的原核表达载体构建正确;在IPTG浓度为0.8mol/L、28℃诱导10h的条件下,可溶性融合蛋白表达量最高;表达产物的相对分子质量与预期值一致,为22000;经纯化得到了均一的融合蛋白。结论:获得大肠杆菌表达的融合蛋白EGFRi-IL-2,可用于活性分析。
- 樊欣迎包乐媛朱婧刘翊杜连祥
- 关键词：白细胞介素24融合蛋白原核表达
- CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验被引量：9
- 2009年
- 构建一种高表达基质细胞衍生因子受体(CXCR4)的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),考察CXCR4对细胞定向迁移能力的影响。实验构建了pMSCV-CXCR4-IRES-GFP基因质粒,并通过逆转录病毒将其转入预先培养的MSCs中。分别采用流式细胞分析仪、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色法检测CXCR4在MSCs中的表达,并利用Transwell方法检测基质细胞衍生因子(SDF-1)对MSCs体外定向迁移的影响。流式细胞仪分析显示,转基因MSCs表面CXCR4的阳性率为46%,绿色荧光蛋白(GFP)阳性率为57%。RT-PCR进一步证实了CXCR4的表达。细胞迁移实验结果表明,CXCR4基因修饰促进了MSCs向SDF-1的定向迁移,当SDF-1浓度为50 ng/ml时,这种定向迁移能力较之对照组提高了近5倍。通过以上结果可以初步证实,MSCs表面CXCR4表达量在SDF-1/CXCR4介导的细胞迁移通路中发挥着重要作用,这为进一步研究MSCs的体内迁移和归巢提供了依据。
- 张悦欧来良程兆康贾小花高年发孔德领
- 关键词：间充质干细胞基质细胞衍生因子-1
- β-环糊精及其衍生物与醋酸可的松包结的表征
- 采用相溶解度法、差示扫描量热法及红外光谱法对β-环糊精（β-cyclodextrin,β-CD） 及其衍生物与醋酸可的松（Cortisone Acetate,CA）的包结进行了表征.相溶解图显示β-CD 衍生物对 CA ...
- 王敏马印虎孟婧垚申雁冰张立挺
- 关键词：Β-环糊精包结物
- 文献传递
- 融合蛋白EGFRi-IL-24的纯化及活性鉴定被引量：2
- 2009年
- 本研究的目的在于制备表皮生长因子受体干扰序列-白细胞介素24的融合蛋白(EGFRi-IL-24),并鉴定其抗肿瘤活性。利用pET-22b表达系统在大肠杆菌中表达重组融合蛋白EGFRi-IL-24,Ni-NTA亲和层析柱纯化表达产物。经检测表达的融合蛋白经纯化后纯度超过了90%,该融合蛋白对MCF-7细胞的体外抑制率最高达到72.1%。为进一步研究融合蛋白EGFRi-IL-24的生物学功能及临床应用奠定了基础。
- 樊欣迎包乐媛窦苓杜连祥路福平
- 关键词：肿瘤靶向治疗
- 高适应性面包酵母菌株的杂交选育被引量：7
- 2005年
- 为了改善耐高糖酵母在不同含糖量面团中的发酵力,首先制备了2 4 0株耐高糖酵母单倍体,通过高麦芽糖发酵筛选培养基筛选出了2 8株麦芽糖发酵性能良好的单倍体菌株,通过测定这些单倍体在无糖面团中的发酵力,发现9株单倍体菌株的发酵力优于或等于其亲本,其中4株为a型,5株为α型。通过它们之间的杂交得到2 0 0株杂交株,在无糖、中糖、高糖面团中测定这些杂交株的发酵力,获得4株在不同含糖量(0～30 % )面团中都具有高发酵力的高适应性面包酵母杂交株。研究表明,来自同一亲本单倍体之间的杂交有可能改善面包酵母的某些特征。
- 刘青姜天笑毕琳肖冬光
- 关键词：适应性杂交选育面包酵母发酵力培养基筛选高麦芽糖
- 分枝杆菌甾酮C_(1,2)位脱氢酶基因敲除的研究被引量：5
- 2007年
- 利用分枝杆菌对植物甾醇进行边链降解可产生4-AD(4-烯-雄甾-3,17-二酮)和ADD(1,4-二烯-雄甾-3,17-二酮),ADD由4-AD在C1,2位脱氢酶(ksdD)作用下脱氢产生,这两种物质在化学结构上高度相似,难以分离。首先扩增出部分ksdD基因,大小为631bp,并以此为基础构建打靶载体pUC19-MK。将pUC19-MK电转分枝杆菌感受态,通过同源重组敲除分枝杆菌染色体上正常的ksdD基因,使C1,2位脱氢酶失活,以达到4-AD大量积累的目的。结果通过初筛筛选出5株转化子,进行甾体转化实验,发酵144h时,1号转化子的4-AD生成率达到17.52%,比出发菌株提高了192%,而此时ADD的生成率仅为6.12%,比出发菌株降低了89.9%。
- 田琳李玉史文玉戴永鑫路福平王建玲杜连祥
- 关键词：同源重组打靶载体
