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河南省分子医学重点学科开放实验室: 作品数：58 被引量：123H指数：5; 相关作者：卢洁更多>>; 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院河南科技大学更多>>; 发文基金：河南省医学科技创新人才工程项目河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学政治法律更多>>

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毛细管电泳法拆分盐酸安非他酮: 2012年; 目的:建立一种用毛细管电泳拆分盐酸安非他酮对映异构体的色谱方法。方法:以60 cm×75μm石英毛细管柱为分离通道,通过考察影响拆分的因素,如手性选择剂的种类、浓度,缓冲溶液的pH,分离电压和柱温,确定最佳拆分条件。结果:安非他酮拆分的最优条件为浓度15 mmol·L-1羟丙基-β-环糊精作手性添加剂,50 mmol·L-1的磷酸盐(pH 3.5)背景缓冲液,工作电压20 kV,柱温25℃。确定毛细管电泳中先出峰的是S-盐酸安非他酮。结论:该方法试样用量少、高效、快速、操作简单,环境污染少,可用于盐酸安非他酮的拆分,并为盐酸安非他酮的含量测定和单一对映体药理作用的研究奠定基础。; 周婕李颖慧裴文娟刘倩鲁阳芳张振中; 关键词：毛细管电泳盐酸安非他酮手性拆分选择性抑制剂手性药物手性添加剂

B72和hTERT的真核表达载体的构建与鉴定被引量：4: 2006年; 目的:构建同时表达B72和hTERT的真核表达载体。方法:根据GenBank中的序列,对B72、hTERT各设计一对两端带特定限制性酶切位点的引物,分别从乳腺组织、乳癌组织提取总RNA,进行RT PCR后,将2扩增产物分别克隆在pGEM T载体,然后双酶切各pGEM T载体,回收目的片段,将2目的片段再克隆至真核表达质粒pEGFP C3中,并对重组体进行PCR鉴定和测序分析。结果:PCR扩增片段与预期结果相符,B72/hTERT真核表达载体构建成功,插入片段测序结果与GenBank公布的基因一致。结论:成功构建B72/hTERT真核表达载体。; 丁丽赵国强范清堂; 关键词：HTERT 真核表达载体

Survivin特异性siRNA真核表达载体的构建: 2007年; 目的构建Survivin特异性siRNA真核表达载体,为以Survivin基因为靶点、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)为手段的白血病和其它恶性肿瘤基因治疗的基础和临床应用提供良好的技术手段。方法根据GeneBank数据库提供的Survivin基因所有变异体的共同核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链siRNA,再转化为能表达其小发卡结构RNA(small hairpinRNA,shRNA)的DNA序列,并与载体pSINsi-hU6定向连接,构建受控于启动子U6的真核表达载体pSIN/shRNA1、pSIN/shR-NA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定。结果构建Survivin特异性siRNA真核表达载体pSIN/shRNA1、pSIN/shR-NA2,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致。结论Survivin特异性siRNA真核表达载体构建成功。; 王业生孙玲赵国强范清堂王琰岳保红夏彬朱慧雅; 关键词：SURVIVIN基因小干扰RNA 真核表达载体

免疫印迹检测人胸大肌肌钙蛋白I推断较晚期死后经过时间被引量：9: 2006年; 目的研究人死后骨骼肌肌钙蛋白I(Skeletal troponn in I,sTnI)的变化规律,探讨较晚期死后经过时间推断方法。方法以人胸大肌为研究对象,利用免疫印迹(W estern b lot)结合图象分析技术半定量检测不同离体时间内人胸大肌sTnI的含量,观察其与离体时间的关系。结果人胸大肌sTnI含量随离体时间延长而逐渐下降,与离体时间的对数值呈近似的线性关系:Y=11 972.5-4 761.9 lgX,相关系数r=0.989;离体5d的人胸大肌仍可检出sTnI。结论检验人死后骨骼肌(胸大肌)sTnI的含量有望成为用于推断人体较晚期死后经过时间的新技术。; 郑旭东张益鹄支献民张胜力郭克民葛秀峰张书红; 关键词：免疫印迹死后变化

志贺菌对喹诺酮类药物耐药分子机制的研究被引量：10: 2004年; 目的研究志贺菌对喹诺酮类药物耐药性及其耐药基因gyrA和parC的变异。方法对73株临床分离的志贺菌及标准株51573进行吡哌酸(PI)、氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)4种药物的药敏试验,对其DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因N末端编码区分别进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,对grA基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对parC基因进行RFLP及单链构象多态性(SSCP)分析。结果标准株51573对4种喹诺酮类药物均敏感;73株临床分离的志贺菌属细菌对PI、CIP、NOR、OFL的耐药率分别为79.5％、60.3％、41.1％和36.9％;67株(91.8％)菌株对喹诺酮类药物敏感性降低,其中gyrA基因突变率为91％,parC基因突变率为7.5％,6株临床敏感株及标准株51573均未检测出以上两基因突变。结论志贺菌对喹诺酮类药物耐药严重;靶基因突变是其耐喹诺酮类药物的主要机制之一,以DNA旋转酶gyrA基因突变为主,拓扑异构酶ⅣparC基因突变次之。; 朱静媛段广才郗园林; 关键词：志贺菌喹诺酮类药物耐药分子拓扑异构酶肠道传染病

新型键合纤维素手性固定相拆分氯西加酮对映体被引量：2: 2012年; 目的:建立一种用新型键合纤维素手性固定相拆分氯西加酮对映异构体的高效液相色谱方法。方法:使用Chiralpak IB(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为正己烷-无水乙醇(90︰10),流速0.8 mL.min-1,检测波长230 nm,柱温30℃;通过对比氯西加酮和添加了苏式氯西加酮的氯西加酮色谱图,判断先流出物的构型。结果:氯西加酮对映体在新型键合直链纤维素衍生化合物手性固定相上能够完全分离,分离度为1.79;先流出物为苏式氯西加酮。结论:本方法可方便地实现氯西加酮对映体的分离。; 周婕刘倩苏楠张振中; 关键词：手性固定相纤维素对映体拆分抗癫痫新药手性柱

用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测幽门螺杆菌的分子流行病学研究被引量：3: 2003年; 代敏段广才范清堂郗园林代丽萍李倩施侣元; 关键词：幽门螺杆菌分子流行病学

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原被引量：1: 2003年; 目的 :寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法 :应用SDS PAGE和Westernblot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果 :卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS PAGE后显示 14条蛋白带 ,其中相对分子质量为 5 30 0 0、310 0 0、2 5 0 0 0、16 0 0 0、110 0 0是主带 ;相对分子质量为 5 30 0 0和 340 0 0的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应 ;10 80 0 0、94 0 0 0、6 5 0 0 0的条带可与血吸虫病患者血清反应 ;5 80 0 0、5 30 0 0、4 30 0 0的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。 370 0 0的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别 ,而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论 :卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为 370 0 0的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原。; 张灯王中全崔晶范清堂毛福荣晋雪香; 关键词：并殖吸虫病成虫抗原免疫印迹

幽门螺杆菌外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因原核表达系统的构建与鉴定被引量：1: 2007年; 目的:构建表达幽门螺杆菌(Hp)的外膜蛋白omp22和黏附素hpaA融合基因的重组蛋白质候选菌株,为Hp疫苗研究提供依据.方法:用PCR方法扩增出带3个甘氨酸残基柔韧接头的融合基因omp22-hpaA,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中转化大肠杆菌(E.coliTB1),用IPTG诱导目的基因表达,SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,Western Blot鉴定其免疫原性.结果:测序结果显示,omp22-hpaA融合基因片段由1326bp组成,为编码440个氨基酸残基的多肽,接头序列GGTGGAGGC已成功地插入omp22-hpaA融合基因中;SDS-PAGE结果显示表达产物相对分子质量约为53ku,融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的20%.结论:成功克隆并构建了omp22-hpaA融合基因原核表达系统.; 黄学勇段广才范清堂郗园林黄志刚宋春花; 关键词：幽门螺杆菌克隆基因表达

旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析被引量：3: 2009年; 目的鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白。方法应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24h的ES抗原的蛋白组分进行分析。结果SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62kDa～14.88kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28kDa～14.27kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02kDa)。T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21kDa～14.37kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71kDa～14.51kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同。2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11kDa～22kDa、25kDa～64kDa及100kDa～144kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12kDa～21kDa及25kDa～90kDa,所对应的pI分别为4～9.5与4.5～9.6。T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13kDa～16kDa、18kDa～22kDa及40kDa～55kDa,所对应的pI分别为4～7、3.8～6.2及5～9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10kDa～15kDa、17kDa～25kDa及29kDa～55kDa,所对应的pI分别为4.7～6.5、4.6～6及5～7。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同。; 张胜力崔晶范清堂王中全; 关键词：旋毛虫肌幼虫可溶性抗原 SDS-PAGE

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