华南理工大学生物科学与工程学院生物技术系
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- FLASH结合p53并增强其转录活性被引量：3
- 2021年
- 肿瘤抑制蛋白p53作为一种重要的转录因子,参与细胞周期调节、细胞凋亡、细胞衰老以及DNA修复等生物学过程。p53在不同生理条件下发挥相应的功能离不开众多辅因子的协助,这些辅因子可以调节p53的修饰状态、细胞亚定位,以及p53的稳定性等。因此,鉴定p53结合蛋白质对进一步理解p53在体内的信号调控网络具有重要生物学意义。本文利用酵母双杂交实验技术筛选出1个新的p53结合蛋白质,FADD样白细胞介素1β转化酶相关巨蛋白(FADD-like interleukin-1β-converting enzyme associated huge protein,FLASH)。免疫共沉淀分析证实了FLASH与p53之间存在相互作用,并进一步阐明了这两个蛋白质之间相互作用的结构域基础。p53可同时与FLASH-N1(aa1~200)和FLASH-C1(aa1534~1780)相互作用。此外,FLASH-N、FLASH-C都能与p53-C(aa293~393)相互作用。通过报告基因研究FLASH对p53转录活性的影响,结果表明,FLASH全长以及FLASH-M(aa921~1533)能够增强p53的转录活性。综上所述,FLASH能够结合p53并增强其转录活性。
- 陈小雁熊真真尤姗姗石晓钟
- 关键词：转录活性
- CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化被引量：4
- 2009年
- 根据南极假丝酵母脂肪酶calb的成熟多肽序列,人工合成了由毕赤酵母(Pichia pastoris)偏爱密码子组成的calb基因序列(仅成熟肽)。将该基因克隆至穿梭质粒pGAPZαΑ中,获得的重组质粒pGAPZαA-calb经线性化后转入毕赤氏酵母GS115菌株,构建成组成型表达CALB的酵母工程菌株。酵母转化子在YPD培养基上传代10次后,其外源基因未丢失。经摇瓶发酵4天后,CALB水解活力为14.5U/ml。经脱盐和阴离子交换两步纯化后,其纯度达到了95%以上,目的蛋白的含量达到了220mg/L。
- 朱艳飞杨博
- 关键词：LIPASECANDIDA毕赤酵母组成型表达
- FLASH结合早幼粒细胞白血病蛋白Ⅳ并增强p53的SUMO修饰
- 2024年
- FLASH/CASP8AP2为基因组中一个独特的基因,参与多个细胞调控过程,包括细胞凋亡、组蛋白基因pre-mRNA的加工、转录调控以及细胞周期进程等。临床医学研究表明,FLASH是急性淋巴细胞白血病的一种预后标志物,还是多种癌细胞存活的关键因子。因此,对FLASH功能的深入研究有望为相关疾病治疗提供新的视角。我们先前鉴定FLASH为p53的结合因子,并发现其能够增强p53的转录活性。在此基础上,本文阐述了FLASH和p53相互作用的分子机制。研究结果表明,p53 K386突变显著降低其与FLASH(aa 51~200)和FLASH-SIM(aa 1534~1806)的结合强度。然而,GST沉降分析仅能检测到SUMO与FLASH-SIM而不是FLASH(aa 51~200)之间的相互作用。在细胞中过量表达FLASH增强了整体性SUMO1修饰以及p53的SUMO1修饰,这可能是FLASH增强p53转录活性的一种作用机制。由于PML NB为细胞内SUMO的亚细胞反应器,而PMLⅣ亚型能够特异性地增强p53的SUMO修饰,我们在此分析了FLASH与PMLⅣ之间的相互作用,并鉴定了二者相互作用的结构域基础:FLASH-N3A(aa 501~802)和FLASH-C2(aa 1807~1981)均能与PMLⅣ(aa 228~633)结合。进一步的研究显示,PMLⅣ能够增强FLASH调控的整体性SUMO修饰和p53的SUMO修饰,即二者在功能上存在协同性。FLASH与肿瘤抑制因子p53和PMLⅣ之间的相互作用,丰富了对其功能的认识,有望揭示FLASH在肿瘤发生过程中的作用机制,为癌症的诊断和治疗提供新的思路。
- 王梦妮熊真真王之盈吴建华石晓钟
- 关键词：P53
