浙江海洋大学食品与医药学院浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心
- 作品数：22 被引量：87H指数：6
- 相关机构：广西民族大学化学化工学院广西林产化学与工程重点实验室广西民族大学化学化工学院广西民族大学海洋与生物技术学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省科技厅重大专项基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 沙蚕蛋白酶的荧光标记及细胞摄取机制研究
- 2019年
- 该文利用FITC对沙蚕蛋白酶(NAP)进行荧光标记,并通过薄层色谱法、红外光谱法、紫外光谱法及荧光光谱法对标记物进行表征,紫外分光光度法计算标记度。通过测定NAP与FITCNAP的酶促反应动力学参数来比较NAP在标记前后的活性,同时应用MTT法考察NAP标记前后对NCI-H1299细胞毒性的影响。流式细胞术研究NCI-H1299细胞摄取FITC-NAP的机制,荧光显微镜定性观察NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取。结果表明,每分子标记物约含1.78分子FITC,其最佳荧光激发波长为490 nm、发射波长为515 nm;荧光标记后NAP的活性未受到显著影响; NCI-H1299细胞对FITC-NAP的摄取与药物浓度、作用时间呈正相关;氧化苯砷组的荧光强度低于FITC-NAP组且有极显著差异(P<0.01),因此NAP的摄取机制为内吞。进一步研究发现, NCI-H1299细胞摄取NAP受到网格蛋白依赖性内吞和小窝/脂筏蛋白介导的内吞共同作用。荧光显微镜观察发现,随着时间的增加,更多的细胞摄入FITC-NAP,且主要分布在细胞膜及细胞质中,细胞核中未见分布。
- 杲亚许丁国芳丁国芳余方苗黄芳芳唐云平陈艳陈锐
- 关键词：FITC荧光标记细胞摄取药物动力学
- 青蛤免疫调节肽的酶解制备工艺研究被引量：7
- 2018年
- 为研究酶法制备具有免疫调节作用的青蛤多肽,以青蛤肉为原料,分别采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行酶解,以小鼠巨噬细胞RAW 264.7的相对增殖率为指标,筛选出最佳酶种,再通过单因素试验和L_(16)(4~5)正交试验确定该酶的最佳酶解条件。结果表明:最佳酶种是胃蛋白酶,最佳酶解条件为p H2、温度42℃、料液比1︰10(g/m L)、加酶量1 600 U/g、时间8 h,所得酶解产物对RAW 264.7细胞的相对增殖率为76.15%。该工艺研究为青蛤免疫调节多肽的分离纯化及开发具有免疫调节作用的功能食品提供试验依据。
- 叶盛旺杨最素李维唐云平余方苗丁国芳
- 关键词：青蛤酶解免疫调节肽单因素试验正交试验
- 沙蚕提取物药理活性的研究进展
- 2016年
- 沙蚕是一种生活在潮间带的环节动物,在我国沿海均有广泛分布。研究发现,从沙蚕体内分离纯化获得的活性物质沙蚕毒素和沙蚕蛋白酶均表现出很好的药理活性。本文就沙蚕的药理活性进行综述,为开发利用沙蚕研究提供理论依据。
- 贾盈露闫海强丁国芳徐银峰杨最素
- 关键词：沙蚕药理活性
- 文蛤寡肽对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用被引量：1
- 2018年
- 目的:研究文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用。方法:建立高脂饲料致小鼠慢性肾损伤模型,通过MMO灌胃30 d后,测定小鼠肾脏指数,检测小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)浓度,以及小鼠肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,计算小鼠动脉粥样硬化指数(atherosclerosis index,AI),苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肾脏病理学改变,免疫组化法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转录生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达量。结果:MMO组与模型组比较,小鼠肾脏指数,血清中TG、TC、LDL-C浓度及AI显著下降,HDL-C浓度显著升高,肾组织匀浆中SOD、GSH-Px活力显著升高,MDA含量显著降低,HE染色观察肾组织结构明显好转,免疫组化结果显示MMO可降低肾损伤小鼠α-SMA、TGF-β1蛋白表达水平。结论:MMO对高脂饮食诱导的小鼠肾损伤有较为明显的修护作用。
- 王佳佳叶蕾杨最素余方苗丁国芳
- 关键词：高脂饲料肾损伤
- 长鳍金枪鱼多肽的酶解制备工艺研究被引量：4
- 2018年
- 通过酶解法制备具有对H_2O_2诱导的张氏肝细胞保护作用的长鳍金枪鱼多肽。以长鳍金枪鱼下脚料为原料,采用胰蛋白酶进行酶解,以张氏肝细胞的相对增殖率为指标,通过单因素试验和响应面优化试验确定该酶的最佳酶解条件, HE染色观察张氏肝细胞形态变化。结果表明,最佳酶解条件为:料酶解pH 7.28,酶解温度45.29℃,时间5.05 h,所得酶解产物对张氏肝细胞的相对增殖率为53.1%。HE染色显示长鳍金枪鱼多肽对H_2O_2诱导的张氏肝细胞起一定保护作用。该工艺研究为长鳍金枪鱼多肽的分离纯化及开发护肝功能食品提供试验依据。
- 艾杨洋丁国芳丁国芳余方苗唐云平陈锐
- 关键词：长鳍金枪鱼增殖率护肝
- 青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用被引量：20
- 2019年
- 研究酶解法制备的青蛤多肽(Cyclina sinensis peptides,CSP)对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌能力及细胞因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。
- 叶盛旺杨最素李维唐云平黄芳芳张小军余方苗丁国芳
- 关键词：酶解RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用
- 文蛤寡肽对小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：10
- 2017年
- 对文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)在小鼠急性肝损伤中的保护作用进行研究。首先通过酶解、超滤、Sephadex G-25柱分离技术从文蛤中分离纯化出具有肝修复作用的文蛤寡肽,经检测该目标肽的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-Asp。然后建立四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠肝脏指数;检测小鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及甘油三酯(triglyceride,TG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;苏木精-伊红染色观察肝脏病理学改变;免疫组化法测定肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达量。结果表明:MMO组与模型组比较,小鼠肝指数显著降低(P<0.05);血清中ALT、AST、γ-GT活力显著降低(P<0.05),γ-GT活力最高降幅达到47.16%;SOD活力显著升高(P<0.05);TG、MDA水平显著降低(P<0.05),最高降幅分别达到31.88%和28.83%。;苏木精-伊红染色观察肝组织结构明显好转;TNF-α、NF-κB蛋白表达量显著降低。因此,MMO对CCl_4小鼠急性肝损伤有较为明显的保护作用。
- 王佳佳赵莎莎杨最素余方苗丁国芳
- 关键词：四氯化碳急性肝损伤
- 鮟鱇鱼皮营养成分分析与评价被引量：1
- 2019年
- 以鮟鱇鱼鱼皮为研究对象,对水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、矿物质元素含量及氨基酸、脂肪酸组成进行分析。结果表明:鮟鱇鱼皮水分含量为84.60%,干鱼皮中总蛋白含量为78.85%,脂肪含量为2.70%,灰分含量0.37%,含有7种人体必需氨基酸,占氨基酸总量的15.40%,脂肪酸中DHA、EPA总量为22.93%,有益于人体生长发育。上述分析结果表明,鮟鱇鱼鱼皮高蛋白、低脂肪,富含多种营养成分,具有良好的市场开发前景。
- 张文阎洁梅光明唐云平杨最素丁国芳
- 关键词：营养评价
- 响应面法优化青蛤降血压肽酶解制备工艺被引量：2
- 2018年
- [目的]采用响应面法优化青蛤降血压肽的酶解制备工艺。[方法]以青蛤肉为原料,木瓜蛋白酶为酶种,血管紧张素转换酶抑制率为指标,在单因素试验的基础上,选择pH、酶解时间和料液比为影响因素,进行3因素3水平的Box-Behnken试验设计,采用响应面法分析3个因素对青蛤降血压肽制备工艺的影响。[结果]木瓜蛋白酶酶解制备青蛤降血压肽的最佳工艺条件为pH 5.8、酶解时间8.4 h、料液比1∶3.1,该条件下酶解产物对血管紧张素转换酶抑制率达93.58%。[结论]该研究为青蛤的高值化利用和降血压肽的制备提供了新思路。
- 詹秋桂李杰煌施鹏飞雷鸣罗李王余方苗
- 关键词：青蛤木瓜蛋白酶降血压肽响应面法
- 绿侧花海葵(Anthopleura anjunae)寡肽制备的关键技术与抗前列腺癌作用研究被引量：2
- 2017年
- 本文探讨绿侧花海葵(Anthopleura anjunae)抗前列腺癌酶解寡肽制备与工艺优化。以绿侧花海葵肉为原料进行酶解,筛选最佳蛋白酶,通过正交实验优化酶解条件,并通过超滤、阴离子交换层析、G-25凝胶过滤和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,通过LC-MS和氨基酸序列测定鉴定寡肽的氨基酸序列,并以MTT法检测产物对前列腺癌细胞系DU-145增殖抑制率,以确定活性最强组分,最后通过倒置显微镜观察纯化肽的抗前列腺癌活性。结果表明,碱性蛋白酶为最佳酶种;工艺条件为:最适料液比1︰5、最适p H=11、最适加酶量2000U/g、最适温度35oC、最适酶解时间6h;经高效液相纯化得到由五个氨基酸组成的绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽,其氨基酸序列为:Tyr-Val-Pro-Gly-Pro(AAP-H);倒置显微镜结果显示经AAP-H作用24h后的DU-145细胞具有明显的凋亡形态学特征。结论:采用碱性蛋白酶酶解并通过超滤和色谱分离技术能从绿侧花海葵肉中制备抗肿瘤活性肽;且AAP-H对DU-145细胞的增殖抑制作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,AAP-H能明显抑制前列腺癌细胞DU-145增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。
- 吴宗泽丁国芳丁国芳余方苗唐云平贾盈露郑媛媛陈锐
- 关键词：酶解抗肿瘤寡肽
