新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室 作品数:35 被引量:105 H指数:6 相关作者: 李静 唐红 郭延华 宋志强 郭燕 更多>> 相关机构: 石河子大学 新疆生产建设兵团 四川农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室开放课题 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 经济管理 更多>>
牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立 被引量:4 2010年 【目的】为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法。【方法】重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达;Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度。【结果】重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7%,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测,检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55%。【结论】以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础。 钟发刚 黄新 王新华 李娜关键词:牛病毒性腹泻病毒 ELISA 牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及其主要抗原表位区的分段表达 被引量:5 2009年 应用RT-PCR方法扩增了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆玛纳斯分离株的E2基因,应用软件对序列进行分析,预测了可能存在的抗原表位;分别扩增了包含预测抗原位点的片段(1~118)-(144~340)-(100~300)-(1~345),并将其克隆到pMD18-T Si mple载体中;将重组质粒pMD-(1~118)、pMD-(144~340)、pMD-(100~300)、pMD-(1~345)的HindⅢ+BamHI双酶切产物分别插入pET28a(+),构建了原核表达载体pET-(1~118)、pET-(144~340)、pET-(100~300)、pET-(1~345)。将这些原核表达载体分别导入BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE分析,结果显示,4个重组质粒在BL21(DE3)中均成功表达,表达融合蛋白的分子质量分别为18.6、28.2、29.2和43.9 ku,与预测蛋白质分子质量一致,Western-blot分析结果表明,28.2、29.2和43.9 ku的融合蛋白可被牛抗BVDV阳性血清识别。 黄新 王新华 钟发刚关键词:牛病毒性腹泻病毒 E2基因 克隆 抗原表位 乳及乳制品中朊蛋白及其安全性研究进展 被引量:2 2010年 朊蛋白(prion proteins,PrP)是近年来确认的引起人畜共患病的新型蛋白质类传染源,其在乳及乳制品中的存在直接关系到乳产品安全和人类健康。本文对朊蛋白生物学特点、乳及乳制品中朊蛋白的来源和含量以及安全性进行了综述,以便为乳制品加工和安全评价提供参考。 管峰 石国庆 赵进 杨利国关键词:朊蛋白 乳制品 安全性 电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞条件的优化 被引量:3 2015年 为优化获得绵羊诱导性多潜能干细胞(iPS cell)的诱导条件,通过4-D电转染仪,将含有人Oct4、Sox2及Klf4、c-Myc及lin28基因的3个质粒共转染绵羊成纤维细胞,从EH-100、EN-150、CZ-167、CA-137电转程序筛选出适合绵羊成纤维细胞的电转染程序;探讨不同细胞密度、质粒质量浓度、质粒质量浓度比及维生素C对诱导性多潜能干细胞克隆形成的影响。结果表明,采用EH-100电转程序,在细胞密度为5×106 mL-1、质粒质量浓度比为1∶1∶1、质粒总质量浓度为0.1mg·L-1、培养液中添加维生素C的质量浓度为0.05mg·L-1时,AP染色阳性(AP+)克隆形成的效率可达到14.0%。说明,优化后的电转染方法和培养方案可有效提高绵羊诱导性多潜能干细胞的制备效率。 王聪慧 赵帅 张译元 王立民 李炜杰 赵兴旺 丁新平 张银国 周平关键词:电穿孔转染 新疆石河子地区隐性乳房炎致病菌调查及分离鉴定 被引量:8 2014年 针对新疆石河子地区不同牛场(A牛场、B牛场)7—9月奶牛隐性乳房炎的发病情况以及主要致病菌进行调查,采用CMT法和体细胞分析仪(SCC)法相结合,随机抽取122头处于泌乳期的奶牛,对2种检测方法均为阳性的奶牛再进行致病菌的分离与鉴定。结果表明,新疆石河子地区A牛场、B牛场7—9月奶牛隐性乳房炎阳性率分别为86.1%、44.0%,阳性乳区率分别为41%、26%。SCC法检测结果显示,A牛场0-30万个/mL占8.3%,31万-60万个/mL占22.2%,61万-100万个/mL占18.1%,101万-200万个/mL占20.8%,200万以上个/mL占30.6%;B牛场0-30万个/mL占30%,31万-60万个/mL占32%,61万-100万个/mL占12%,101万-200万个/mL占14%,200万个/mL以上占12%。采用CMT和SCC检测仪相结合的方法提高了隐性乳房炎检出率,且隐性乳房炎的检测由定性检测转向了定量检测。由以上结果可见,新疆石河子地区7—9月是奶牛隐性乳房炎的高发季节。 刘长彬 钟发刚 卢春霞 康立超 李永刚 姜志涛 刘岗 罗小玲关键词:奶牛 隐性乳房炎 高发季节 致病菌 四种璃眼蜱ITS2基因的序列分析 被引量:3 2012年 对采自新疆准噶尔盆地的亚洲璃眼蜱指名亚种、亚东璃眼蜱、残缘璃眼蜱和盾糙璃眼蜱进行总DNA提取,PCR扩增和测序,并从GenBank中下载的6种硬蜱ITS2序列,应用软件分析ITS2片段长度、变异位点、G+C含量和进化关系。结果显示,亚洲璃眼蜱指名亚种和亚东璃眼蜱的ITS2序列长度均为1458bp,全序列存在3个变异位点(A、G转换)和2个碱基缺失\插入,同源性达99%,残缘璃眼蜱和盾糙璃眼蜱的ITS2全长均为1561bp,存在12个变异位点,同源性达99%;12种硬蜱的ITS2序列中G+C含量较高,为61.2%-62.7%。系统进化分析表明亚洲璃眼蜱指名亚种和亚东璃眼蜱、残缘璃眼蜱和盾糙璃眼蜱分别处在两个分支上,这两个分支分别与嗜驼璃眼蜱和小亚璃眼蜱聚为一支。璃眼蜱属、革蜱属和扇头蜱属聚为一大支,血蜱属单独构成一大支。 张艳艳 刘继荣 薄新文 王开胜 王光雷关键词:ITS2 准噶尔盆地 准噶尔盆地媒介蜱区系考察与群落组成的研究 被引量:2 2012年 媒介蜱与人类疾病关系密切,可以携带和传播多种重要病原。准噶尔盆地是我国第2大盆地。地处新疆北部,是我国虫媒疫病的自然疫源地。为了掌握准噶尔盆地蜱类区系分布动态和群落结构特征,按照地理生态区划和不同生境类型,选择了6个生态区、16个生境类型、48个考察位点,进行蜱类标本的采集和分类鉴定,采用群落生态学技术方法,分析不同生境条件下蜱类群落的丰富度、均匀度和多样性。研究不同生态区的群落组成结构。结果在该地区共采获蜱类标本19466枚,隶属5属21种,以草原革蜱、亚洲璃眼蜱指名亚种和银盾革蜱为优势蜱种。不同生境类型的蜱类,群落组成亦不相同,草原革蜱和银盾革蜱多栖息于林区牧场和荒漠草原,而亚洲璃眼蜱指名亚种和亚东璃眼蜱是高温低湿的种类,是噶尔盆地沙漠中的优势蜱种;而且在同一生境中,动物寄生蜱比游离蜱丰富,这与宿主动物的放牧和调运有关。结果表明,准噶尔盆地蜱类群落丰富、区系分布广泛,但不同地理景观和生境类型的群落结构存在较大差异。 刘继荣 张艳艳 薄新文 安那斯·代肯 刘志强关键词:区系分布 群落结构 准噶尔盆地 利用CRISPR-Cas9技术获得绵羊FecB基因定点突变的研究 多胎性基础母羊的经济性状有着重要的影响,目前已发现多个绵羊品种由于FecB基因座外显子7上一个A-G突变,明显增加了产羔数.本实验的利用CRISPR-Cas9与Oligo Donor DNA注射技术对绵羊FecB基因进行... 王立民 李伟 周平关键词:绵羊 FECB基因 定点突变 捻转血矛线虫Hc38基因RNA干扰效果 被引量:2 2009年 荣光 赵军明 王新华 薄新文关键词:捻转血矛线虫 基因功能 RNAI DSRNA FIRE 羔羊口蹄疫母源抗体和免疫抗体消长情况的观察(初报) 被引量:1 2008年 李静 刘让 邢玫 张鲁安 周亚 陈少平 袁立刚 蒲敬伟 陆敬文 张怀生 李岩关键词:口蹄疫 抗体消长 母源抗体 羔羊 二价灭活疫苗 防制工作