付炜
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用量子点标记小鼠胚胎干细胞的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨应用量子点(Quantum dots,Qdots)体外标记胚胎干细胞进行长期跟踪的可行性。方法以Qtracker 655标记小鼠未分化胚胎干(ES)细胞和小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞,标记后倒置荧光显微镜和流式细胞仪动态观察细胞内Qdots的变化。丝裂霉素、秋水仙素或Verapamil处理标记Qdots的胚胎干细胞,观察细胞内Qdots含量与细胞增殖及多药耐药泵的关系。结果Qdots可以标记ES细胞,标记效率可达到90%以上。标记24h后细胞内Qdots含量较MEF细胞明显下降,至72h仅5%左右的ES细胞Qdots标记呈阳性。细胞增殖抑制实验显示,ES细胞内Qdots含量下降与细胞增殖关系不大。用Verapamil抑制多药耐药泵的功能,也不能阻止胞内Qdots含量的降低。结论Qdots不能长期标记未分化ES细胞,ES细胞内Qdots含量的迅速降低并非单由细胞增殖过快造成,而且与迅速地被排出细胞有关,但这一排出与多药耐药泵无关。
- 皮庆猛付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：细胞标记胚胎干细胞量子点
- 胚胎干细胞标志CD31、SSEA-1在小鼠胚胎发育和成体组织中表达的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的观察胚胎干细胞表面标志CD31、SSEA-1在小鼠胚胎发育过程中不同阶段的表达及在新生鼠、成体骨髓、睾丸中的表达情况,为进一步利用它们作为分子标志从胚胎及成体组织中分离多潜能性干细胞奠定基础。方法本实验选用129/SV系小鼠。孕10.5天、14.5天、18.5天的胚胎各取3例,新生鼠、6周龄成年鼠骨髓、成体睾丸各取3例,0.3%胶原酶消化获得单细胞悬液,经抗体染色标记后,通过流式细胞仪分析CD31、SSEA-1的表达情况。结果胚胎第10.5天、14.5天、18.5天和新生鼠中均有CD31、SSEA-1的表达,阳性细胞量随胚胎发育呈下降趋势。成年鼠骨髓和睾丸组织中也有CD31、SSEA-1阳性细胞存在,含量低于胚胎中的数量。结论 CD31、SSEA-1在小鼠个体发育过程以及成体组织中都有不同程度的表达,阳性细胞比率随个体发育而降低。
- 王书军付炜张文杰
- 关键词：胚胎骨髓睾丸
- 类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系。方法小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养。扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、SSEA1和Flk-1)的表达情况。分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达。将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力。Oct-4/GFP转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率。结果在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1。残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志。残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤。单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力。结论残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力。
- 皮庆猛付炜石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化全能性白血病抑制因子
- 类胚体中残留未分化胚胎干细胞的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨类胚体中残留未分化胚胎干细胞(ESC)的特性。方法小鼠R1和Oct-4-GFP转基因ESC细胞株,体外类胚体分化20d后消化打散,重新给予ESC常规培养液培养。观察类胚体中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光染色检测和观察残留细胞表面标志物及体外再次分化能力。将残留细胞扩增后注射入裸鼠背部皮下和大腿肌肉内,6周后注射部位取材进行大体和组织学检查。结果分化20d的类胚体中存在残留未分化ESC,生长形态呈克隆样,表达SSEA1、CD31、CD9和Oct-4等未分化ESC标志;细胞能反复传代,并可在体外再次分化和残留。残留细胞注射部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织。结论胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化全能ESC,残留细胞在体内、外可再次分化,并能在体外分化中再次残留。
- 付炜皮庆猛石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化
- 以PECAM-1为标志去除残留未分化胚胎干细胞的研究
- 2014年
- 目的 以血小板内皮细胞黏附分子-1（Platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1）为标志,去除小鼠胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）中残留未分化的细胞,以去除其致瘤性,为ESCs在研究中的安全应用提供思路。方法 将小鼠R1胚胎干细胞株在撤去白血病抑制因子的培养基中悬浮培养6 d,体外自发分化形成类胚体,消化打散后,以PECAM-1为标志进行磁珠分选,得到阳性与阴性细胞群体,分别以2×10^6个/点注射入裸鼠背部皮下,6-8周后观察畸胎瘤形成情况,组织学分析瘤体构成。结果 裸鼠背部成瘤结果显示,PECAM-1^＋细胞群注射8个点中7个成瘤,成瘤率87.5%;而PECAM-1^-细胞群注射8个点中1个成瘤,成瘤率12.5%。PECAM-1^＋细胞群与PECAM-1^-细胞群成瘤率具有统计学差异（P=0.01）。结论 应用PECAM-1可去除体外分化过程中的残留未分化ESCs,并去除其致瘤性。
- 王玲唐郑雅付炜张文杰
- 关键词：胚胎干细胞血小板内皮细胞黏附分子-1
- 诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞被引量：1
- 2009年
- 目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF),诱导血管前体细胞向血管平滑肌细胞和血管内皮细胞分化。免疫荧光染色鉴定诱导分化后细胞的相关标志表达;流式细胞仪分析诱导分化后细胞的分化效率和纯度。结果流式细胞仪分析显示,在分化第4天类胚体中有50%左右的细胞表达Flk-1,经分选的Flk-1阳性细胞通过进一步诱导,可以得到(95.9±3.5)%α-SMA阳性的血管平滑肌细胞和(59.1±4.8)%CD31阳性的血管内皮细胞。结论成功应用流式细胞分选法从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实验为组织工程化血管构建中种子细胞来源提供了新途径。
- 皮庆猛岳伟付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞FLK-1平滑肌细胞
- 诱导多能干细胞体内外分化残留特性的初步研究
- 目的:探讨诱导多能干细胞体内外分化残留特性,评估其作为组织工程种子细胞的致瘤性风险.
方法:小鼠Oct-4-GFP诱导多能干细胞(iPSCs)体外类胚体分化20天或者裸鼠皮下注射6-8周形成畸胎瘤后消化打散,重...
- 付炜王书军张文杰周广东刘伟曹谊林
- 关键词：诱导多能干细胞畸胎瘤分化
