凡静静
- 作品数：13 被引量：39H指数：4
- 供职机构：西北民族大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金国家民委科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 脑心肌炎病毒抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测。方法采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法;用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较;采用所建立的方法对1 475份人血清和1 309份猪血清进行检测。结果建立的双抗原夹心ELISA法的最佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为10%马血清或2%鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1∶400。该方法的批内和批间变异系数均小于10%;热稳定性较好;与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5%。应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8%和63.4%。结论已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段。
- 樊得英冯若飞李向茸张海霞凡静静沈心亮马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒抗体酶联免疫吸附测定
- 乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达
- 2012年
- 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV，旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体，利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。
- 冯若飞张晓媛林贵鸿乔自林凡静静李向茸张海霞樊得英马忠仁
- 关键词：乙型脑炎病毒绿色荧光蛋白真核表达
- 脑心肌炎病毒VP1基因真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2013年
- 为构建脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,通过RT-PCR扩增目的基因,酶切连接后将VP1基因克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体法转染重组质粒pEGFP-C1-VP1,提取CHO细胞的总RNA,用RT-PCR检测目的基因的转录情况,并利用免疫组织化学和Western-blot分析检测目的基因表达情况、VP1蛋白在细胞中的定位及其抗原性。PCR、酶切验证及测序结果证实,重组质粒构建成功,绿色荧光蛋白正常表达。提取试验组细胞的总RNA,进行RT-PCR,在900bp处扩增出了目的条带。免疫组织化学结果显示,VP1主要分布在CHO细胞的细胞膜中,少量存在于胞浆中。Western-blot分析结果证实,VP1能与兔抗EMCV抗体特异性结合。表明VP1蛋白在CHO细胞中表达良好,表达的蛋白具有反应原性。
- 凡静静冯若飞杨妍梅张海霞李向茸王丹谢晶莹马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因真核表达免疫组织化学
- 脑心肌炎病毒VP1基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫效果研究
- 脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus, EMCV)是新近发现的人可致多种动物和人出现脑炎、心肌炎和心肌周围炎症状的病毒,对人类生命健康和经济发展造成了较大的危害,但由于发现较晚,该病毒生物学...
- 凡静静
- 关键词：脑心肌炎病毒腺病毒免疫效果
- 文献传递
- 脑心肌炎疫苗研究进展被引量：1
- 2012年
- 脑心肌炎主要是由脑心肌炎病毒引起的一种急性传染病,危及多种动物和人,对人类生命健康和经济发展造成了较大的危害。国外对于该病已经有了有效的疫苗,对于该病毒的研究也主要集中在病毒的致病机制方面。国内还没有研制出安全有效的疫苗,而须采用进口疫苗,致使免疫猪的代价太大,因而难以推广。随着以疫苗免疫为主的防控措施逐渐受到关注,基因工程疫苗成为脑心肌炎疫苗研究的热点。论文就脑心肌炎疫苗的应用现状和新型疫苗的研发情况进行综述。
- 凡静静于国伟
- 关键词：脑心肌炎病毒分子结构疫苗
- 脑心肌炎病毒及其蛋白结构和功能研究进展被引量：10
- 2012年
- 脑心肌炎病毒(EMCV)是一种重要的人畜共患病病原,高危感染动物是猪,自然宿主是啮齿动物,人也可以感染这种病毒。也有研究报道,病毒可分解为前体蛋白P1、P2、P 3和L蛋白,最终切割成11个蛋白终产物,其中VP1蛋白存在主要抗原表位,具有良好的中和作用。目前尚不能阐明病毒感染后的发病机制,宿主感染病毒的影响因素等。因此,对病毒特性进行的研究有助于对该病的预防及控制,对病毒基因组及它所编码蛋白的结构与功能的研究对新型疫苗及动物机体的抗感染免疫机制的研究有重要的生物学作用。论文综述了脑心肌炎病毒基因组结构及其编码蛋白的结构和功能。
- 凡静静冯若飞马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒蛋白
- 脑心肌炎病毒VP1基因重组腺病毒的构建及对小鼠免疫效果的研究被引量：1
- 2017年
- 为构建脑心肌炎病毒(EM CV)VP1基因的重组腺病毒,以期为EMCV疫苗研制提供试验依据。扩增EMCV VP1基因并与载体p Yr-adshuttle-4连接构建p Yr-ads-4-VP1穿梭载体;穿梭质粒通过体外重组与腺病毒载体进行重组,获得p Ad-VP1-EG FP重组腺病毒载体,将此载体于H EK 293细胞中包装最终成功获得r Ad-VP1-EGFP重组腺病毒,并测定其TCID50;构建的重组腺病毒感染细胞后在基因水平、蛋白水平对VP1进行检测;最后通过对小鼠免疫重组腺病毒后进行EMCV攻毒试验,验证其免疫效果。结果显示,成功构建了EMCV VP1基因重组腺病毒r Ad-VP1-EGFP,测得其TCID50为10-8.5/m L;感染细胞后基因水平及蛋白水平均可检测到VP1基因的表达;重组腺病毒免疫小鼠后的存活情况表明,重组腺病毒对小鼠有较好的免疫效果,且二次免疫后保护率显著高于单次免疫。结果表明,本试验成功制备了EMCV基因重组腺病毒,且对小鼠具有较好的免疫效果,可为进一步开发EMCV基因工程疫苗奠定基础。
- 张海霞令瑛杨术伟凡静静李琼毅李向茸马玉梅包晓婧魏嘉马忠仁冯若飞
- 关键词：脑心肌炎病毒腺病毒免疫效果
- 脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：9
- 2013年
- 目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针，建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，且对体系进行优化；对该法进行灵敏性、特异性验证；采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测，并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好，以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995；灵敏性比普通PCR高100倍，且仅能特异性检出 EMCV；对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，该法灵敏性高、特异性好，可用于EMCV的检测及定量分析。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒实时荧光定量PCR
- 脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。
- 王丹冯若飞张海霞凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒环介导等温扩增技术
- 盖他病毒重组E2蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 参照GenBank中盖他病毒株E2蛋白氨基酸序列并进行密码子优化后,人工合成该基因,并将其定向克隆到表达载体pGEX-4T-1中,经酶切及测序鉴定均正确后,转化宿主菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。以该表达蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪盖他病毒抗体的E2-ELISA方法,并对临床血清样品进行检测。结果显示,重组表达的E2蛋白具有良好的抗原性和特异性。用建立的间接ELISA检测471份临床血清样品,检出抗体阳性119份,阳性率为25.27%。结果表明,本研究制备的重组E2蛋白具有良好的免疫原性,可应用于ELISA等相关检测方法的建立。
- 李向茸冯若飞刘俊林王丹杨妍梅凡静静张海霞马忠仁
- 关键词：E2蛋白原核表达间接ELISA
