尹肖云
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：解放军第309医院更多>>
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- 白血病相关蛋白16亚细胞定位的研究
- 2010年
- 目的:研究白血病相关蛋白LRP16基因编码蛋白在真核细胞内的亚定位分布。方法:将LRP16全长基因序列(长型/L型)与LRP16天然缺失体编码序列(短型/S型)融合到绿色荧光蛋白pEGFP真核表达载体的N端,转染鼠成纤维NIH3T3、人乳腺癌MCF-7细胞株,观察绿色荧光的分布;采用细胞免疫荧光染色(CIF)方法和激光共聚焦显微镜进一步鉴定内源性LRP16蛋白在上皮起源性肿瘤乳腺癌MCF-7、宫颈癌Hela,人胚肾293T细胞株的亚细胞分布。结果:绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFPL型在NIH3T3细胞系中以细胞浆型分布为主,在MCF-7中以细胞核型分布为主,绿色荧光融合蛋白LRP16-pEGFPS型在真核细胞内呈核浆均匀分布;CIF染色结果表明内源性LRP16(长型/L型)蛋白在MCF-7、Hela和293T细胞中分别亚定位于细胞核。结论:LRP16是在上皮起源性肿瘤细胞中作为核因子参与其进展,野生型LRP16(长型/L型)前82个氨基酸在决定LRP16亚定位方面发挥关键作用。
- 尹肖云王晓礽孟元光伍志强韩为东
- 关键词：绿色荧光蛋白亚细胞定位乳腺癌
- 白血病相关蛋白16与角蛋白18相互作用的鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:验证白血病相关蛋白(LRP)16与角蛋白(KRT)家族成员KRT18之间的相互作用关系。方法:PCR扩增KRT18及其结构域缺失体基因片段,构建KRT18全长及其结构域真核表达载体,通过体外GST pull down实验和体内免疫共沉淀实验验证LRP16/KRT18的相互作用,并鉴定其作用的结构域。结果:构建了KRT18及其结构域重组子,GST pull down实验证明LRP16与KRT18在体外存在相互作用,它们的特异结合区域位于KRT18的C端,KRT18能够与LRP16的C端结构域相互作用;免疫共沉淀实验表明内源性LRP16与KRT18的C端在体内存在特异结合。结论:KRT18与LRP16存在相互作用,为进一步研究KRT18影响LRP16的亚细胞分布及调控LRP16核功能执行的作用机制奠定了基础。
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- 关键词：蛋白相互作用免疫共沉淀
- PTEN基因和P53基因在子宫内膜癌中的表达及意义被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨PTEN基因和P53基因在子宫内膜癌中的表达及临床意义,为子宫内膜癌的治疗提供参考依据。方法:用免疫组化法检测50例子宫内膜癌患者PTEN基因缺失和P53基因突变情况,并分析两者与子宫内膜癌不同病理变化的相关性。结果:PTEN缺失24例,缺失率48.00%,进一步研究显示PTEN缺失与细胞分化程度和肌层浸润情况密切相关(P<0.05),P53突变32例,缺失率64.00%,并进一步研究显示P53突变与FIGO分期,细胞分化程度和肌层浸润情况密切相关(P<0.05)。结论:PTEN基因缺失和P53基因突变与子宫内膜癌发生和发展密切相关,以PTEN基因和P53基因为靶点的生物治疗在进展期内膜癌中的治疗价值值得进一步深入研究。
- 尹肖云乔丽雅王红英张秦杨夕粉王振国
- 关键词：PTENP53子宫内膜癌
- 角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:通过构建LRP16绿色荧光蛋白(GFP)融合子,观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位,研究角蛋白18(Cytokeratin18,KRT18)对LRP16亚细胞定位的影响,并利用Western-blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证。方法:构建真核表达载体pEGFP-LRP16,经脂质体介导pEGFP-LRP16质粒单独转染,与携带KRT18基因的Flag-pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞,荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化。Western-Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰(siRNA)技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响。结果:成功构建pEGFP-LRP16融合载体,荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主,在NIH3T3细胞呈浆型分布为主。与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆。Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能。结论:KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆,是影响LRP16亚细胞分布的关键因子。为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了基础。
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- 关键词：绿色荧光蛋白LRP16乳腺癌
- 分化抑制蛋白N端保守域结构预测及其基因突变体的构建
- 2008年
- 目的:对分化抑制蛋白(Id)家族的N端序列进行保守性结构分析,并构建其基因突变体。方法:用ClustalX(1.81)软件对Id蛋白家族中的3个成员(Id1～Id3)的N端序列进行同源性分析,用Swiss-PdbViewer3.7(SP5)软件模拟高同源区域中关键性氨基酸突变前后的三维结构模型;用PCR方法将突变点引入Id序列,再通过重叠PCR方法扩增出全长编码序列,酶切与测序确证突变序列的准确性。结果:Id1～Id3蛋白的N端存在一个由11个氨基酸残基形成的高度保守的环-螺旋(Loop-Helix)结构,将其中最保守的丝氨酸与亮氨酸分别突变为甘氨酸与缬氨酸,将突变后的Id基因序列重组到pGEX原核表达载体中。结论:在Id1～Id3蛋白N端识别了一个保守的Loop-Helix结构,为深入研究其协同的功能特征提供了结构依据;突变其中的丝氨酸为研究Id蛋白潜在的磷酸化修饰及相应功能特征的改变奠定了基础。
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- 关键词：分化抑制因子突变三维结构建模
- LRP16基因过表达对卵巢癌细胞HO8910生长及E-钙黏着素的影响
- 2009年
- 目的:探讨过表达肿瘤相关基因LRP16对卵巢癌细胞株HO8910生长的影响。方法:将含有LRP16基因真核表达载体pcDNA3.1-LRP16及空载体质粒转染卵巢上皮癌细胞株HO8910使其稳定过表达,用MTT法测各组细胞生长曲线,用Western blot方法检测E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白的表达。结果:LRP16基因过表达对HO8910细胞增殖无影响,LRP16基因过表达的HO8910细胞的E-钙黏着素(E-cadherin)蛋白表达水平明显下降。结论:LRP16基因对卵巢上皮癌细胞HO8910的增殖无影响,但使E-钙黏着素(E-cadherin)表达明显下降。
- 龙海红韩为东孟元光赵亚力伍志强田丽媛尹肖云陈美霞
- 关键词：LRP16基因上皮性
- 雄激素受体功能表位表达载体的构建被引量：2
- 2008年
- 目的:构建雄激素受体(AR)功能表位表达载体,为深入研究AR与LRP16体外相互作用机制奠定基础。方法:用真核表达质粒pCMV-AR为模板进行常规PCR扩增,产物纯化后将连入pGEM-T载体,挑取阳性克隆扩增培养后测序并进行酶切鉴定;回收酶切后AR目的片断最终与BamHⅠ/XhoⅠ双酶切的pcDNA3.1(+)载体相连接。结果:测序结果表明四个AR功能表位表达载体插入片段与GenBank中报道的序列完全一致。结论:在克隆AR基因的基础上,成功构建了一组雄激素受体AR功能表位表达载体,可以用于AR与LRP16在体外转录翻译方面的研究。
- 尹肖云孟元光赵亚力韩为东杨洁姜凡
- 关键词：基因表达谱
- Id蛋白N末端突变体真核表达载体的构建及其三维空间模型预测
- 2008年
- 目的:构建Id家族蛋白N末端突变体的真核表达载体,并模拟其突变前后的三维空间模型。方法:用带有突变的引物从质粒中扩增出两段突变序列,用拼接PCR的方法将两段突变序列合成一条N末端包含两个突变点的Id序列。应用Swiss-PdbViewer3.7(SP5)软件模拟其突变前后的三维结构模型。结果:构建了一系列Id家族N末端突变体的pcDNA3.1(+)真核表达载体。预测出其三维结构的变化。结论:构建Id蛋白家族N末端突变的pcDNA3.1(+)真核表达载体,为进一步研究Id蛋白N末端结构的生物学功效奠定基础。
- 姜凡伍志强赵亚力杨洁尹肖云韩为东
- 关键词：分化抑制因子突变三维结构建模
- 人类白血病相关性基因LRP16及与肿瘤关系的研究进展被引量：2
- 2008年
- 尹肖云孟元光赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16基因雌激素
