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链间连接肽对单链双特异性抗体生物学活性的影响被引量：3: 2003年; 单链双特异性抗体(ScBsAb)是具有良好临床应用前景的基因工程抗体,但不同的链间连接肽(interlinker)对其生物学活性的影响尚有待深入研究. 设计并合成3种不同的链间连接肽序列,分别命名为Fc,HSA和205C′,并构建成单链双特异性抗体通用表达载体,以抗人CD3改形单链抗体(ScFv)和抗人卵巢癌单链抗体为基础,构建成单链双特异性抗体.SDS-PAGE及 Western blot结果表明,3种不同的链间连接肽对抗体的表达量无明显影响.在此基础上,进行ELISA及血液药代动力学测定,发现不同链间连接肽的单链双特异性抗体与相应抗原的结合活性及其在小鼠体内的清除相T_(1/2)存在一定差异,链间连接肽HSA可以显著延长抗体在体内的滞留时间.上述研究结果提示,链间连接肽序列将会影响单链双特异性抗体的抗原结合活性及其在体内的稳定性等重要的生物学特性.因此,筛选理想的链间连接肽序列对于构建单链双特异性抗体具有重要意义. 合适的链间连接肽可以赋予单链双特异性抗体更适于临床应用需求的生物学活性.; 方敏蒋欣杨志俞小淙尹长城李骅赵瑞张众林晴黄华樑; 关键词：单链双特异性抗体生物学活性基因工程肿瘤免疫

一种含（Arg)<Sub> 9</Sub>肽段的基于假单胞菌外毒素的重组免疫毒素: 本发明属于一种抗癌胚抗原的重组免疫毒素。具体地讲，涉及一种含9个精氨酸肽段(Arg)<Sub> 9</Sub>的基于假单胞菌外毒素的抗癌胚抗原的重组免疫毒素，编码连接外毒素和抗癌胚抗原连接肽的核苷酸序列，含有所述序列的表...; 何丹黄华樑杨慧林晴尹长城张众; 文献传递

导向治疗卵巢癌的基因工程双特异抗体: 目的:研究抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体(BHL-1)的体外活性以及初步的抗肿瘤作用。方法:以大肠杆菌为表达系统表达BHL-1,得到包涵体,经过包涵体变性、复性和纯化得到纯度大于95%的目的蛋白。应用ELISA及...; 张众方敏赵瑞张雪涛黄开瑜王飞杨东虎黄华樑; 文献传递

抗日本血吸虫膜蛋白单克隆抗体NP11-4轻链可变区基因的分离克隆及测序研究被引量：1: 2000年; 本文报告了从抗日本血吸虫单抗NP11- 4杂交瘤细胞株的基因组DNA中 ,用PCR技术扩增出抗体轻链可变区基因 ,并克隆至pUC19质粒中进行测序分析。研究表明 :该基因长 336bp ,编码 112个氨基酸 ,经结构分析及与抗体库中一般序列的比较 ,证实该序列为轻链可变区基因 ,属κ轻链SubgroupII亚类 ,由种系基因中的V与Jκ 2基因重排而成。; 俞小淙蒋欣尹长城张众林晴管晓虹黄华梁; 关键词：轻链可变区基因日本血吸虫单克隆抗体

大肠杆菌二硫键形成相关蛋白的结构、功能及其在基因工程表达外源蛋白上的应用被引量：17: 2002年; 大肠杆菌分泌蛋白二硫键的形成是一系列蛋白协同作用的结果 ,主要是Dsb家族蛋白 ,迄今为止共发现了DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、DsbE和DsbG。在体内 ,DsbA负责氧化两个巯基形成二硫键 ,DsbB则负责DsbA的再氧化。DsbC和DsbG负责校正DsbA导入的异常二硫键 ,DsbD则负责对DsbC和DsbG进行再还原 ,DsbE的功能与DsbD类似。除了直接和二硫键的形成相关外 ,DsbA、DsbC和DsbG都有分子伴侣功能。它们的分子伴侣功能独立于二硫键形成酶的活性并且对二硫键形成酶活性具有明显的促进作用。基于Dsb蛋白的功能特性 ,利用它们以大肠杆菌为宿主表达外源蛋白 ,特别是含有二硫键的蛋白 ,取得了很多成功的例子。本文简要介绍了这方面的进展。; 张众黄华樑; 关键词：大肠杆菌基因工程外源蛋白

一种趋化小肽与双特异抗体的融合蛋白: 本发明涉及一种趋化小肽与抗肿瘤×抗CD3双特异抗体的融合蛋白，其特征在于由CC家族趋化因子SLC(Secondary lymphoid tissuechemokine，次级淋巴组织趋化因子)的N末端十八肽、(GGGGS)...; 黄华樑宋景震王祥斌春雷朴锦华张众林晴; 文献传递

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体的生物学活性研究被引量：5: 2005年; 背景与目的目前,常规疗法已难以提高卵巢癌患者的生存率,已有实验数据及临床前试验结果表明,双特异性抗体能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,为其临床前试验及应用提供实验依据。方法观察BHL-I介导的外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)与靶细胞SKOV3结合、MTT法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)增殖及PBL对靶细胞SKOV3杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBL分泌hIFN-γ、hTNF-α变化。结果BHL-I介导的花环形成率(15.7%)显著高于对照组(11.1%)(P<0.01);在抗原存在下,BHL-I显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤(P<0.01),且杀伤率与花环形成率呈正相关(r=0.946);杀伤过程中上清液中hIFN-γ、hTNF-α显著增高(P<0.01)。结论BHL-I能介导PBL和SKOV3结合并活化PBL特异杀伤效应,杀伤可能与其hIFN-γ、hTNF-α表达增高有关。; 杨介钻张众马骊姚新生周明乾王祥斌王小宁; 关键词：卵巢癌细胞株

双特异抗体COC183B_2×anti-CD28对卵巢上皮癌细胞杀伤效力的研究被引量：1: 2002年; 目的 :检测双特异抗体 (bispecificantibody ,BsAb)COC183B2 ×anti CD2 8在体外介导预激活的外周血单个核细胞 (PBMC)对卵巢上皮癌细胞系SKOV3的杀伤效力。方法 :在大肠杆菌中对用基因工程方法构建的COC183B2 ×anti CD2 8进行诱导表达 ,用ELISA方法测定表达产物与卵巢癌抗原和CD2 8抗原结合的活性后 ,与SKOV3和预激活的PBMC共孵育。 6h后用非放射性细胞毒分析试剂测定预激活的PBMC对SKOV3细胞毒性作用 ,并在镜下观察SKOV3的形态学改变。结果 :ELISA结果显示 ,COC183B2 ×anti CD2 8可与卵巢癌抗原和CD2 8抗原双向结合 ;细胞毒性试验显示 ,在体外COC183B2 ×anti CD2 8能介导预激活的PBMC特异杀伤SKOV3细胞 ;4h时镜下可见玫瑰花环形成 ,12h可见肿瘤细胞溶解。结论 :COC183B2 ×anti CD2; 顾莹冯捷周志勇张众李小平林晴叶雪黄华粱; 关键词：卵巢上皮癌双特异抗体外周血单个核细胞细胞毒性试验生物治疗

一种大肠杆菌通用的高效可溶表达载体系统: 本发明涉及一种可在大肠杆菌中以可溶形式高效表达外源蛋白的新型通用载体，这种通用载体是建立在大肠杆菌促折叠相关蛋白FkpA的基础之上的融合和共表达载体；一种用于高效可溶表达抗膀胱癌单链抗体(PG)的表达载体pTFP1以及用...; 张众黄华樑王飞宋丽萍周志勇林晴; 文献传递

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张众