张晴晴
- 作品数：14 被引量：35H指数：3
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- Smoothened shRNA载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的构建并筛选Smoothened(SMO)基因的RNAi表达质粒,了解Hedgehog信号通路影响乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导转染乳腺癌MCF-7细胞。转染后48 h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中SMO基因mRNA的转录水平,筛选有效的SMO RNAi质粒,Western blot检测SMO蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测SMO短发夹状RNA(shRNA)对cyclinD1 mRNA表达的影响。结果 4个SMO shRNA表达载体SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3和SMO shRNA-4经测序鉴定证明插入正确。转染48 h后,与MOCK组相比,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4组SMO mRNA表达量均下降(P=0.015、0.002、0.000),其中转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞中SMO mRNA表达水平低于SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3组(P=0.007、0.000、0.046)。SMOshRNA-4干扰抑制效率为87%。Western blot可检测到SMO在MCF-7中的表达,干扰片段SMO shRNA-4的抑制效果较好。转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),转染SMO shRNA后cyclinD1 mRNA表达下降(P=0.000)。结论已成功构建并筛选出SMO基因的RNAi表达质粒,SMO shRNA对乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用,Hedgehog信号通路可通过活化cyclinD1诱导细胞恶性增殖。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：SMOOTHENEDSHRNA增殖CYCLIND1
- 整合素α5β1与纤连蛋白在人尸检标本动脉粥样硬化斑块局部的表达及意义被引量：7
- 2017年
- 目的 探讨人动脉粥样硬化斑块局部整合素α5β1与纤连蛋白的表达情况,分析二者与动脉粥样硬化发生发展的关系.方法 收集尸检标本120例,分别取主动脉及冠状动脉.采用免疫组织化学EnVision两步法染色检测CD68、肌动蛋白、整合素α5β1与纤连蛋白在冠状动脉组织中的表达情况.依据弹力纤维染色及美国国立卫生研究院设计的Scion Image（60.1）软件的检测结果确定冠状动脉狭窄程度,并分为A组（0～25%）、B组（26%～50%）、C组（51%～75%）、D组（76%～100%）4组.结果 （1）整合素α5β1可表达于内皮细胞胞质、泡沫细胞胞质、单核巨噬细胞胞质、平滑肌细胞胞质以及钙化灶周边.整合素α5β1在已经穿越内弹力板处的平滑肌细胞的表达高于中膜平滑肌细胞.整合素α5β1在不同狭窄程度冠状动脉平滑肌的表达呈现随着狭窄程度的升高而降低的趋势.（2）纤连蛋白表达于泡沫细胞胞质、单核巨噬细胞胞质、平滑肌细胞胞质（尤其穿过内弹力板处的平滑肌细胞胞质呈现较高表达）及钙化灶周边.（3）整合素α5β1与纤连蛋白表达的相关性：二者在动脉粥样硬化组平滑肌细胞及钙化灶周边的表达均呈明显正相关性（P〈0.01）.结论 动脉粥样硬化发生发展过程中整合素α5β1与纤连蛋白参与调控平滑肌细胞向内膜的迁移,促进动脉粥样硬化斑块局部钙化的发生、发展.动脉粥样硬化后期,整合素 α5β1不参与加重冠状动脉狭窄程度.
- 于霄张晴晴王波孙雷
- 关键词：冠状动脉疾病动脉粥样硬化纤连蛋白类整合素Α5Β1钙质沉着症
- 乳腺癌干细胞亚群中MMP-9和BRMS1的表达及其临床病理意义被引量：9
- 2013年
- 目的探讨基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)和乳腺癌转移抑制因子1(breast cancer metastasis sup-pressor 1,BRMS1)在乳腺癌干细胞侵袭转移中的作用。方法采用免疫磁珠法从MCF-7乳腺癌细胞中分选出CD44+CD24-和非CD44+CD24-两组细胞亚群,RT-PCR法检测CD44+CD24-、非CD44+CD24-及未分选组中ALDH1 mRNA的表达水平。采用Western blot法分别检测MMP-9、BRMS1在两组细胞亚群中的表达;采用Transwell检测CD44+CD24-、非CD44+CD24-及未分选组中细胞亚群的迁移及侵袭能力;采用免疫组化SP法检测65例乳腺癌中MMP-9、BRMS1及ALDH1蛋白的表达。其中乳腺癌伴淋巴结转移组40例,非转移组25例。结果 ALDH1 mRNA水平在CD44+CD24-细胞亚群中的表达明显高于未分选组及非CD44+CD24-组;CD44+CD24-细胞亚群迁移及侵袭能力均高于未分选组及非CD44+CD24-组(P<0.05);在分选出的CD44+CD24-细胞亚群中MMP-9和ALDH1的表达高于非CD44+CD24-细胞亚群,而BRMS1的表达低于非CD44+CD24-细胞亚群,两者差异均有显著性(P<0.05);MMP-9和ALDH1在乳腺癌伴淋巴结转移组中的表达高于非转移组,且两者表达呈正相关,BRMS1在乳腺癌伴淋巴结转移组中的表达低于非转移组,与MMP9及ALDH1的表达呈负相关(P<0.05)。结论 MMP-9和BRMS1在乳腺癌干细胞侵袭转移中可能发挥重要作用。
- 王丽霞毛俊陶雅军马威张晴晴王波范姝君李连宏
- 关键词：乳腺癌干细胞MMP-9BRMS1ALDH1
- ALDH1、Notch4和Numb在乳腺病变中的表达及其与乳腺干细胞发育及病变的相关性研究
- 研究背景和目的：随着肿瘤起源研究的深入，人们认识到肿瘤干细胞可能由正常干细胞或其前体细胞转化而来。肿瘤组织中可能存在极少数具有无限自我更新潜能并形成异质肿瘤所有成分的细胞-肿瘤干细胞。乳腺癌组织中已分离出具有强致瘤性的乳...
- 张晴晴
- 关键词：乳腺干细胞
- 文献传递
- 下调Smoothened基因抑制乳腺癌干细胞生长的相关机制被引量：2
- 2013年
- 目的利用短发夹RNA（shRNA）下调Smoothened（SMO）基因的表达，研究SMO对乳腺癌干细胞增殖的影响。方法设计针对人SMO基因的shRNA，转染人乳腺癌MCF-7细胞系，G418筛选出稳定下调SMO基因的细胞株。体外：活细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞增殖的变化，流式细胞仪检测CIM4＋／CD24-乳腺癌干细胞比例，悬浮球培养检测乳腺球形成的能力，Westernblot检测SMO、GLIl及Oct4的表达。体内：每3天检测各组裸鼠成瘤情况，免疫组织化学SP法检测SMO的表达，Westernblot检测SMO、GLIl及Oct4蛋白的表达。结果21d后筛选出稳定下调SMO基因的MCF-7细胞。CCK8结果显示下调SMO基因可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖。流式细胞仪显示下调SMO基因后，CD44＋／CD24-细胞和乳腺癌干细胞球形成的比例明显降低。下调后裸鼠的肿瘤生长速度下降。免疫组织化学检测显示阴性对照组中SMO阳性表达比例为5／5，SMO．shRNA组阳性比例为2／5。两组肿瘤组织中SMO的蛋白表达水平分别为0．72±0．17和0．21±0．09，GLIl的蛋白表达水平分别为1．21±0．21和0．47±0．12，Oct4的蛋白表达水平分别为0．83±0．13和0．25±0．07。SMO、GLI-1和Oct4在SMO—shRNA组中的表达明显低于阴性对照组（P〈0．05）。结论下调SMO基因可以抑制乳腺癌干细胞的增殖。
- 毛俊范盼红马威张晴晴王波范姝君李连宏
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤干细胞
- 乳腺癌组织中EGF和ALDH1A1的表达及其临床意义被引量：3
- 2012年
- 目的研究表皮生长因子(EGF)与乙醛脱氢酶(ALDH1A1)在正常乳腺组织及乳腺癌组织中的表达及意义,探讨EGF在乳腺癌干细胞演进过程中的作用。方法采用RT-PCR和免疫组化方法分别检测24例正常乳腺组织和45例乳腺浸润性导管癌组织中EGF和ALDH1A1的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,乳腺癌中EGF与ALDH1A1的mRNA水平高表达,在正常乳腺组织中低表达或不表达,两组比较P<0.01。免疫组化结果显示,EGF在正常乳腺与乳腺癌中的表达分别为20.8%和75.6%,ALDH1A1在正常乳腺与乳腺癌中的表达分别为16.7%与66.4%,乳腺癌中EGF与ALDH1A1蛋白水平表达明显高于正常组织(P<0.01)。EGF与ALDH1A1两者在乳腺癌中表达存在正相关(P<0.05)。EGF的表达与发病年龄、肿瘤大小、组织学分型、有无淋巴结转移、PR表达无相关性,与ER表达呈正相关(P<0.01);ALDH1A1的表达与发病年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移、ER、PR表达无相关性,与组织学分型呈正相关(P<0.05)。结论 EGF与ALDH1A1在乳腺癌组织中的表达高于正常乳腺组织,EGF与乳腺癌干细胞的发生发展关系密切。
- 毛俊张晴晴李连宏王波范姝君于晓棠
- 关键词：乳腺肿瘤表皮生长因子肿瘤干细胞
- Hedgehog信号通路在乳腺癌CD_(44)^+ CD_(24)^-细胞中激活被引量：1
- 2011年
- 目的了解Hedgehog信号通路在乳腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫磁珠法从无血清培养的乳腺癌悬浮细胞中分选CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞,分别接种于NOD/SCID鼠乳腺脂肪垫内,观察成瘤情况。采用real-time RT-PCR技术检测Hedgehog信号通路分子SMO和GLI1在CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞中的表达情况。结果分选出的CD44+CD24-细胞约占细胞总数的2.25%,SMO mRNA和GLI1 mRNA在CD44+CD24-细胞中的表达均高于其在非CD44+CD24-细胞中的表达(P均<0.05)。CD44+CD24-组乳腺癌发生率为100%(3/3),发生肺转移、淋巴结和肺转移、肝脏和淋巴结转移各1只;非CD44+CD24-细胞组乳腺癌发生率为50%(2/4),未见有转移发生。结论在乳腺癌CD44+CD24-细胞中Hedgehog信号通路分子表达增强,其与乳腺癌的浸润转移关系密切。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：HEDGEHOG信号通路乳腺肿瘤
- 一种法医解剖刀具及其刀具存放装置
- 本发明公开了一种法医解剖刀具及其刀具存放装置，涉及解剖用具技术领域，解决了解剖刀具的刀头和刀柄是一体的，且刀具的具体分别在刀头而刀柄近乎统一，法医在工作时需要携带大量刀具十分不方便，且携带刀具的装置仅仅为一个盒子，物特定...
- 于霄孙雷张军张晴晴韩庚洁
- 个体化人文关怀策略的应用分析——以急诊抢救室危重患者为例被引量：2
- 2021年
- 当面对突发、危重、预后不良的疾病时,急诊室的患者及家属往往会进入焦虑、恐惧、迷茫的不良情绪中。抢救室空间封闭、医护人员工作压力大、医患沟通紧急简短、医疗费用高等诸多因素对医患心理产生不利影响。不同群体对人文关怀的需求不同,因此,除了满足患者医疗服务需求外,还必须满足不同群体的精神、情感需求。分析不同群体不良心理的成因,并给出个体化的人文关怀方案,为改善紧张的医患关系,构建和谐医患环境提供帮助。
- 田辉张晴晴
- 关键词：急诊抢救室医患关系
- 在乳腺癌干细胞中Hedgehog信号通路相关基因表达增强被引量：1
- 2011年
- 目的了解Hedgehog信号通路在乳腺癌发生发展中的作用。方法用免疫磁珠法从无血清培养的乳腺癌悬浮细胞中分选CD44+CD24-细胞和非CD44+CD24-细胞,用real-time RT-PCR法检测Hedgehog信号通路主要分子SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在细胞中的表达,用免疫组织化学法检测上述因子在乳腺癌组织中的表达。结果分选出的CD44+CD24-细胞约占乳腺癌悬浮细胞总数的8.25%,分选出的CD44+CD24-细胞表达干细胞标志蛋白ALDHA1和Oct-4;SHH、PTCH1、SMO和GLI1 mRNA在CD44+CD24-细胞中的表达均高于其在非CD44+CD24-细胞中的表达(P<0.05);SMO和GLI1蛋白在三阴性乳腺癌的表达均高于非三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。结论在乳腺癌干细胞CD44+CD24-细胞中Hedgehog信号通路被激活,抑制癌症干细胞中Hedgehog通路的活化可能会降低或阻止乳腺癌的复发及化疗耐受。
- 陶雅军毛俊张晴晴李连宏
- 关键词：HEDGEHOG信号通路乳腺癌
