李贞
- 作品数：10 被引量：33H指数：2
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：兵团博士基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学更多>>
- 小反刍兽疫病毒重组抗原间接ELISA检测及初步应用被引量：2
- 2010年
- 为了建立一种快速、特异、敏感的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)血清学检测方法,本研究将PPRV血凝蛋白(H)和核蛋白(N)克隆至pET28a(+)载体进行诱导表达,并将2种蛋白Ni柱纯化后包被ELISA反应板,建立起检测PPRV特异性抗体的间接ELISA法。结果表明在E.coli BL21(DE3)中表达出2种PPRV蛋白,将2种重组蛋白纯化后按照1:1比例混合,制备PPRV鸡尾酒抗原,成功建立了特异性强、敏感性高的PPRV间接ELISA法;最后用建立的方法对新疆伊犁、塔城、阿勒泰和喀什边境地区采集的325份山羊、789份绵羊和132份牛血清进行了抗体检测,检测结果显示均为阴性,提示在我国新疆边境地区反刍动物尚未发生PPRV感染,但需要及时进行免疫接种以建立预防PPRV从国外传入的免疫带。本研究建立的PPRV间接ELISA法为该病毒的检测提供基础,也为该病的科学防控提供参考。
- 孟庆玲才学鹏倪伟任艳李贞刘佳旭乔军
- 关键词：小反刍兽疫间接ELISA竞争ELISA
- 上转换荧光生物传感
- 换荧光是一类长波激发,短波发射的反斯托克斯发光现象.近年来上转换荧光在生物、化学传感领域获得了长足发展.上转换荧光材料(upconversion phosphors,UCPs)可在近红外光区被激发(如980 nm),从而...
- 李贞肖艳刘志洪
- 关键词：生物传感器
- 荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究
- 2010年
- 利用RT-PCR技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增IFN-γ(ccIFN-γ)基因,克隆至pMD18-T载体进行测序。测序结果表明,ccIFN-γ基因全长501bp,编码166个氨基酸,其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列,后面147氨基酸残基构成成熟肽,其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。二级和三级结构预测发现,ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋,中间由无规卷曲连接,折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE分析,表达出与预期大小(20.6KDa)相符的重组蛋白,占菌体蛋白18.6%。Western blot检测证实表达的融合蛋白为牛IFN-γ,这为进一步开展重组ccIFN-γ生物学活性的研究奠定了基础。
- 李贞陈创夫乔军任艳张辉杨明峰刘佳旭倪伟
- 关键词：荷斯坦奶牛Γ-干扰素基因原核表达
- 奶牛乳房炎防治的新进展被引量：14
- 2011年
- 奶牛乳房炎是高产奶牛最常见的疾病,对奶业的发展危害严重。近年来,国内外学者对该病开展了大量的研究工作,作者对奶牛乳房炎的研究进展作一综述,为该病的科学防治提供有益的参考。
- 李国华李贞乔军陈创夫
- 关键词：奶牛乳房炎
- 金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。
- 杨明锋陈创夫曹旭东刘君王正荣李贞乔军
- 关键词：乳房炎金黄色葡萄球菌小鼠免疫原性
- 链球菌GapC基因重组痘苗病毒的构建及筛选与鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了研制链球菌性奶牛乳房炎的有效疫苗,首先用PCR方法扩增出停乳链球菌的GapC基因。其次将GapC基因连接到pSC11穿梭质粒上,构建pSC11-GapC重组穿梭质粒。然后在脂质体的介导下将pSC11-GapC转染已感染痘苗病毒的BHK-21细胞,使之与痘苗病毒基因在BHK-21细胞内进行同源重组,得到GapC重组痘苗病毒,用rVV-GapC表示。最后用蓝斑法连续筛选5次rVV-GapC重组毒,再用PCR和Western blot分别检测rVV-GapC的重组和表达情况。结果显示,PCR电泳检测到目的条带,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性99%,Western blot试验证明GapC蛋白在重组毒中进行了表达。rVV-GapC构建成功。重组痘苗病毒的构建为链球菌性奶牛乳房炎疫苗的研究奠定基础。
- 李国华李贞乔军陈创夫才学鹏孟庆玲丁波
- 关键词：痘苗病毒
- 金黄色葡萄球菌FnBP重组牛痘病毒的构建与鉴定研究
- PCR技术从致奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌SHZ1株基因组中扩增出FnBP基因，构建重组转移质粒pSC11-FnBP，利用脂质体转染法将重组转移质粒转染已感染牛痘弱毒株病毒的BHK-21细胞中，蓝白斑筛选重组牛痘病毒.利用...
- 李贞陈创夫乔军胡圣伟
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌保护性抗原基因重组牛痘病毒的构建与鉴定研究
- 金黄色葡萄球菌是一种能感染多种动物的常见革兰氏阳性球菌。病原学调查表明，金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的重要病原之一，对奶牛养殖业的危害较重。为了有效预防奶牛乳房炎的发生，目前迫切需要研究有效的金黄色葡萄球菌疫苗。为此，...
- 李贞
- 关键词：金黄色葡萄球菌奶牛乳房炎保护性抗原基因重组牛痘病毒
- 奶牛IL-6基因克隆与原核表达被引量：1
- 2010年
- 目的:克隆新疆地区奶牛il-6基因,获得原核表达IL-6蛋白。方法:根据GenBank上牛IL-6的序列,用premier5.0软件设计一对引物。以牛肺巨噬细胞提取的RNA反转录产物(cDNA)为模板扩增出567bp的条带,克隆到pBS-T载体,测序正确后,提取质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化DE3菌,经IPTG诱导表达。以表达产物免疫小白鼠血清为一抗检测表达产物的反应原性。结果:成功克隆了新疆地区奶牛il-6基因,克隆部分编码188个氨基酸与GenBank公布的序列100%同源,表达出46kDa的融合蛋白,免疫印迹检测显示原核表达牛IL-6有免疫原性。结论:新疆地区奶牛在IL-6的基因序列上与其他地方牛无差异,原核表达奶牛IL-6蛋白为在奶牛乳房炎疫苗中的佐剂效果研究打下了基础。
- 杨明锋王正荣陈创夫李贞曹旭东乔军
- 关键词：奶牛IL-6细胞因子原核表达
- 金黄色葡萄球菌感染小鼠乳房炎模型的建立被引量：12
- 2011年
- 取25只分娩8～10d的昆明系小鼠随机分成5组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水(pss)组和不同剂量金黄色葡萄球菌(1.0×102cfu/50μL、1.0×103cfu/50μL、5.0×103cfu/50μL)试验组,经乳头导管对第4对乳腺50μL/只注射,24h后观察结果,一侧乳腺甲醛固定制作切片观察组织病理变化,另一侧冰上研磨后取匀浆用高盐甘露醇鉴别培养基进行细菌计数,检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,试验组随着注射细菌数量的增加,病理变化加重,分离到的金黄色葡萄球菌数量显著增加,乳腺匀浆中TNF-α含量明显升高。结果表明,注射1.0×103cfu组可以引起较典型的小鼠乳房炎,且病理变化适中,适合用来建立金黄色葡萄球菌小鼠乳房炎模型。
- 杨明锋陈创夫王正荣张科李贞曹旭东乔军
- 关键词：金黄色葡萄球菌小鼠
