林维平
- 作品数：20 被引量：52H指数：3
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金天津市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌的分离和鉴定被引量：5
- 2008年
- 从天津塘沽盐碱土壤中分离一株产碱性蛋白酶的嗜碱芽孢杆菌HAP，并对其进行了表型分类和16S rDNA序列分析。结果表明，HAP是一株革兰氏阳性芽孢杆菌，菌体大小（0．7—0．9）μm×（2-3）μm，该菌可利用木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、甘露醇，发酵型糖代谢产酸；可以水解酪素、淀粉，但不能水解酪氨酸；能够利用柠檬酸盐；其酶活力为1．22×10^4U／mL。结合系统发育学分析将HAP鉴定为嗜碱芽孢杆菌（Bacillus alcalophilus）。
- 孙同毅邵伟光高志芹林维平路福平于小勇王新斌
- 关键词：嗜碱芽孢杆菌RDNA
- 小鼠ameloblastin基因重组慢性病毒表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建表达小鼠ameloblastin基因的慢性病毒表达载体,生产有感染及表达能力的病毒,为进一步研究ameloblastin基因在牙釉质形成中的功能奠定基础。方法:利用RT-PCR的方法从出生后1d钟状期小鼠牙胚组织totalRNA中扩增ameloblastin编码区cDNA,并克隆到pCRII-TOPO载体中,再亚克隆到pNL-IRES2-EGFP中。将病毒三质粒系统转染293T细胞,收集病毒,并鉴定病毒感染及表达能力。结果:通过酶切和PCR的方法鉴定ameloblastin基因已成功的构建入慢性病毒表达载体pNL-IRES2-EGFP中,经293T细胞生产的病毒感染人牙髓干细胞(DPSCs),DPSCs有较强荧光发出,并可稳定表达ameloblastin基因。结论:成功的构建了慢性病毒表达载体,并获得有感染及表达能力的病毒。
- 刘晓影林维平高文风赵小娟高志芹
- 关键词：AMELOBLASTIN转染
- 温度预锻炼和Ca^(2+)对温度胁迫下黄连膜脂过氧化及保护酶活性的影响被引量：2
- 2012年
- 为了明确温度预锻炼和Ca2+对温度胁迫下黄连生理指标的影响,以2年生黄连为材料,以25℃为对照,设计2组试验,探索温度胁迫下黄连膜脂过氧化及保护酶活性的变化。结果表明:在低温(-5～15℃)或高温(35℃)胁迫下,黄连丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)含量增加,Pr(蛋白质)含量降低;超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性在低温胁迫下升高,在高温胁迫下降低,而过氧化氢酶(CAT)活性在低温和高温胁迫下都升高;进行12h温度预锻炼或CaCl2溶液浇灌,可以有效降低黄连MDA和Pro增加量,促使黄连Pr含量上升、SOD和POD活性升高。在受试的3个CaCl2浓度中,以100mmol/L CaCl2对膜系统的保护作用最佳。这表明,温度预处理和Ca2+能在一定程度上降低温度胁迫对黄连的伤害,可作为提高黄连抗逆性的一种途径。
- 武敬亮田桂香林维平
- 关键词：温度胁迫膜脂过氧化保护酶黄连
- 大肠杆菌TrpA-E和Trp operon的克隆与表达
- 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，而且在医药、食品、化工、畜牧业及农业等领域有着极其广泛的用途，其中L-色氨酸(L-Trp)作为人体必需的八种氨基酸之一，是氨基酸输液、口服氨基酸制剂所必需的成分。由于国内外饲料工业发展迅速，...
- 林维平
- 关键词：大肠杆菌L-色氨酸代谢工程关键酶
- 文献传递
- 大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株的构建与表达被引量：3
- 2010年
- 目的构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株,提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量。方法利用依赖于DpnⅠ酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b(+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性。结果 PCR扩增产物可见约7000bp的Trp OperonM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍。结论已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。
- 林维平刘晓影武敬亮高志芹孙同毅
- 关键词：色氨酸操纵子突变
- 大肠杆菌邻氨基苯甲酸合成酶编码基因trpED的克隆与表达被引量：4
- 2007年
- 目的:通过基因重组的方法获得在体外具有邻氨基苯甲酸合成酶活性的基因trpED,为进一步解除反馈抑制的基因改造寻找靶标。方法:分别构建重组质粒pBV220-trpE和pBV220-trpD;由于trpE和trpD存在翻译偶联现象,将其自大肠杆菌基因组中经PCR扩增得到,构建新的表达质粒pBV220-trpED。结果:SDS-PAGE显示,包含质粒pBV220-trpED的重组菌在相对分子质量约53000(trpE基因表达)和56000(trpD基因表达)处的蛋白表达量明显增多,且邻氨基苯甲酸合成酶活性是对照的3倍。结论:翻译偶联的存在直接影响蛋白活性的发挥;重组质粒pBV220-trpED的获得为进一步的基因改造,以提高色氨酸产量奠定了研究基础。
- 李剑欣郭长江刘云林维平张绪梅徐琪寿
- 关键词：色氨酸生物合成
- 一种新型移液架
- 本实用新型涉及一种新型移液架包括：底座、转动杆、连接杆、横梁和试管架，所述底座与转动杆一端通过轴承转动连接，转动杆另一端通过固定连接的方式与连接杆一端连接，连接杆另一端通过移动连接的方式与横梁连接，横梁两端通过脱拆连接的...
- 林维平
- 文献传递
- 大肠埃希菌trp operon的克隆与表达被引量：1
- 2008年
- 色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株。利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trp operon,转化大肠埃希菌DH5α,温度诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析并用比色法测定其活性。通过凝胶电泳观察PCR扩增产物大小约为7 kb,SDS-PAGE鉴定目的蛋白得到了高效表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了3.4倍和2.5倍。成功构建了重组质粒pBV220-trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的表达量和表达活性在大肠埃希菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定基础。
- 林维平刘晓影武敬亮高志芹孙同毅
- 关键词：TRPOPERON色氨酸克隆
- 一种新型移液枪
- 本实用新型涉及一种新型移液枪包括：控制钮、转轴、手柄、握柄、显示器、掌托、滑槽、套管、连接口和主体，所述控制钮与转轴固定连接，转轴与主体套接，手柄与主体顶端一侧固定连接，主体一侧与手柄对应面设有握柄，显示器固定连接于主体...
- 林维平
- 文献传递
- 基于三代测序的大秃马勃的rDNA ITS鉴定及其基因组生物信息学分析
- 2021年
- 【背景】马勃是著名的传统可食用药用真菌,具有多种药理作用,包括抗菌、抗炎、止咳、抗肿瘤和抑制细胞增殖等。目前关于马勃的研究多集中在活性物质的分离提取及其药理药效上,而对马勃基因组遗传信息知之甚少。【目的】获得马勃真菌的基因组遗传信息,挖掘潜在具有工业应用价值的功能基因。【方法】联合使用Illumina二代测序技术和PacBio三代测序技术进行基因组测序,并综合使用多种数据库进行基因组结构分析和基因注释,包括GO注释。基于基因组信息,使用rDNAITS序列进行马勃真菌物种鉴定,并使用dbCAN和antiSMASH进行碳水化合物活性酶和次级代谢物基因簇的鉴定。【结果】测序获得大小为46.04 Mb基因组,有11903个蛋白编码基因,包括6634个GO注释基因。基于基因组中的rDNA ITS序列信息将该菌鉴定为大秃马勃(Calvatia gigantea),分析了麦角甾醇和萜类合成相关基因25个,鉴定出317个碳水化合物酶和18个次级代谢物生物合成基因簇,并发掘出1个潜在的、可分泌的抗丹宁α-淀粉酶。【结论】获得一株马勃真菌基因组,并发掘出潜在的食品工业应用价值的抗丹宁α-淀粉酶和多个新的次级代谢物合成基因簇。这将为马勃真菌遗传进化、功能基因组学研究,以及其在食品工业应用和次级代谢物的药用价值开发提供重要的遗传信息基础。
- 史延华林维平侯典海
- 关键词：基因组
