汪红俊
- 作品数：8 被引量：24H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 从Hep-2细胞克隆hVEGF165/VEGF121基因及序列分析被引量：1
- 2004年
- 目的 从Hep 2 (喉鳞癌细胞 )克隆hVEGF16 5、hVEGF12 1cDNA并重组到克隆载体中 ,用于下一步构建表达VEGF 16 5、VEGF 12 1的腺病毒载体。方法 设计和合成引物 ,提取Hep 2细胞的总mRNA ,进行逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,扩增出两个目的cDNA ,并将其重组到pGEM TEasy载体中送测序。 结果 从Hep 2细胞的总mRNA中反转录扩增得到 5 88bp和 4 5 6bp的片段 ,经重组送测序证实两基因分别与GenBank中的 [GI:1990 90 6 4 ]及[GI :6 6 310 2 8]提供序列完全一致。结论 从Hep 2细胞我们成功获得VEGF16 5、VEGF12 1的cDNA并构建其克隆载体可供进一步研究。
- 王帮河汪春兰何金生赵宇汪红俊曹东升
- 关键词：喉肿瘤内皮生长因子HEP-2
- 从Hep-2细胞克隆hFGF-2 cDNA及序列分析被引量：2
- 2005年
- 目的 从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法 设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果 经基因测序分析表明,从Hep 2细胞克隆的hFGF 2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G→A),其他序列则完全一致。结论 从Hep 2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF 2的基因片段。
- 王帮河何金生汪春兰赵宇汪红俊曹东升
- 关键词：成纤维细胞生长因子2DNA
- 人巨细胞病毒感染新生乳鼠原代培养脑神经细胞研究被引量：11
- 1999年
- 为了研究确定人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）体外感染Ｂａｌｂ／ｃ新生乳鼠原代培养脑神经细胞及其感染特征，制备和培养了新生乳鼠脑神经细胞并进行病毒感染。感染后每隔２～３天在倒置显微镜下观察活细胞培养物并摄影记录。在感染后第１～４周，取样进行苏木素－伊红（ＨＥ）染色及尼氏（Ｎｉｓｌ）染色。同时，用已知抗ＨＣＭＶ外膜蛋白的单克隆抗体进行免疫细胞化学染色，和地高辛标记的ＨＣＭＶ寡核苷酸特异性探针进行原位杂交，检测相应病毒核酸及胞内定位。结果在病毒感染后的第２周，受染细胞出现明显病变，表现为颗粒增多，折光性减弱。ＨＥ染色可见，受染神经细胞明显肿胀，胞浆及胞核均为嗜酸性，并可见到嗜酸性包涵体。Ｎｉｓｓｌ氏染色发现，胞核旁的尼氏小体变小，成粉末状，甚至消失。免疫细胞化学染色显示，受染神经细胞呈阳性反应。原位杂交结果证实，病毒核酸存在于受染细胞的胞浆及核内。这表明，ＨＣＭＶ能感染体外原代培养的新生乳鼠脑神经细胞，且病理特征与在人胚脑神经细胞观察到的基本模式一致。这种体外培养的细胞模型，可用于ＨＣＭＶ致中枢神经系统感染的研究。
- 王明丽陈贵海唐久来史百芬胡勇汪红俊李京培任斌
- 关键词：人巨细胞病毒HCMV脑神经细胞原代培养
- A亚型人呼吸道合胞病毒G基因的克隆、真核表达被引量：2
- 2006年
- 目的克隆A亚型人呼吸道合胞病毒(HRSV)G基因,构建G基因的真核表达载体,并进行表达和鉴定。方法自行设计引物,利用RTPCR技术,从感染HRSV的HEp2细胞中获得G基因片段,克隆到pGEMTeasy载体,经核酸序列分析,进一步亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),酶切鉴定后,脂质体法转染COS7细胞,RTPCR和Westernblotting鉴定基因转录和蛋白表达。结果真核表达载体pcDNA3.1(+)G的限制性内切酶分析结果与预期一致,基因序列分析显示没有发生无义突变。转染COS7细胞后,RTPCR检测到G基因有转录,Westernblotting分析观察到G蛋白特异性的表达条带。结论成功克隆A亚型HRSVG基因,并在真核细胞中获得表达。
- 李栋梁宋蔚汪红俊李群黄保军胡春松罗畅民何金生
- 关键词：呼吸道合胞体病毒
- 抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定被引量：2
- 1999年
- 目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。
- 黄升海史百芬王明丽张咏南胡勇汪红俊
- 关键词：呼吸道感染单克隆抗体RSV
- 重组腺病毒方法的改建被引量：3
- 2005年
- 目的对构建重组腺病毒的AdEasy载体系统的操作过程予以改进,使其更加简便、高效。方法将腺病毒骨架载体pAdEasy-1用电穿孔法转化大肠埃希菌BJ5183,获得含pAdEasy-1的大肠埃希菌BJ5183/p菌株。氯化钙法制备大肠埃希菌BJ5183/p感受态细胞,并转化含绿色荧光蛋白的穿梭载体,通过同源重组获得重组腺病毒质粒。以限制性内切酶PacⅠ酶切,得到重组腺病毒DNA分子,转染293细胞。结果293细胞出现细胞病变,荧光显微镜观察有绿色荧光。结论成功获得一种以AdEasy系统为基础的简便、高效构建重组腺病毒的新方法。
- 张梅何金生朱梅汪红俊
- 关键词：重组腺病毒绿色荧光蛋白
- 86例鼻咽癌放疗前后EB病毒VCA－IgA抗体检测报道被引量：1
- 1995年
- ８６例鼻咽癌放疗前后ＥＢ病毒ＶＣＡ－ＩｇＡ抗体检测报道李瑞珠，毕克菊，汪红俊，周爱华，李群Ｅ８病毒与鼻咽癌之间的免疫血清学关系以及ＥＢ病毒核壳抗原特异性免疫球蛋白Ａ（ＶＣＡ－ＩｇＡ）在鼻咽癌早期诊断的价值已被肯定［１，２，４，６，７］。本文对８６例鼻...
- 李瑞珠毕克菊汪红俊周爱华李群
- 关键词：鼻咽肿瘤放射疗法EB病毒
- 斑点-ELISA检测AFP被引量：2
- 2000年
- 目的 探讨硝酸纤维素膜为固相载体的酶免疫测定法检测甲胎蛋白 (AFP)。方法 以硝酸纤维素膜代替常规ELISA中的固相载体聚苯乙烯板 ,其余步骤按ELISA方法操作。结果 以AFP标准品作试验 ,进行方法学探索 ,测出最佳包被抗体浓度为 10 0mg·L-1,酶标抗体稀释度为 1∶40 0 0。不同来源不同孔径的硝酸纤维素膜无差异 ;同时发现包被过程中的封闭处理能减少非特异性反应 ;保存试验证明包被抗体的硝酸纤维素膜至少可保存 2周。结论 该法具有特异性强、重复性好、灵敏度高的特点 ,通过与常规ELISA检测血清标本AFP含量值的比较 ,表明该法可半定量测定AFP的含量 ,尤其适用于标本的初步筛选。
- 黄保军汪红俊李瑞珠
- 关键词：纤维素甲胎蛋白类硝酸纤维素膜ELISA
