王海伟
- 作品数：48 被引量：45H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 表达A型口蹄疫病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建被引量：3
- 2012年
- 为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coli BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P1-2A-2B-3C基因的重组AdEasy-1。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rAd-A09。经PCR检测,该重组腺病毒在传代过程中目的基因稳定存在,病毒滴度在第8代时可达到108.5TCID50/mL。间接免疫荧光检测和western blot分析表明,rAd-A09在AD-293细胞中产生FMDV的结构蛋白VP0、VP1和VP3。该重组腺病毒的构建为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。
- 宋姗姗王海伟周国辉于力
- 关键词：A型口蹄疫病毒重组腺病毒衣壳蛋白
- 单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用
- 本发明公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用。本发明首先公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明所述口蹄疫病毒血清型共享性表位是七个...
- 于力周国辉王海伟杨德成
- O型泛亚谱系口蹄疫病毒cDNA感染性克隆的建立被引量：10
- 2009年
- 本研究采用RT-PCR技术将O型口蹄疫病毒(FMDV)O/YS/CHA/05株全长基因组分4个cDNA片段进行克隆、拼接,构建了具有感染性的FMDV cDNA克隆pOKT7-O/YS/CHA/05。将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05在细胞外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞,经培养可见典型的细胞病变(CPE)。同时,将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,同样也观察到典型的CPE。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记,即在病毒核酸的3510位人工消除了XbaⅠ酶切位点。免疫电镜观察和间接免疫荧光试验进一步表明,拯救出了FMDV。病毒生长比较试验表明,拯救病毒与亲本病毒具有相似的增殖特性。本研究构建了O型口蹄疫病毒的感染性克隆并获得了拯救病毒,为深入研究FMDV的致病机理以及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。
- 杨德成涂亚斌王海伟周国辉于力
- 关键词：口蹄疫病毒全长CDNA病毒拯救
- 分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系及其应用
- 本发明公开了分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系及其应用。本发明首先公开了一株分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系，其微生物保藏编号为CGMCC No.13293。本发明还公开了由所述杂交瘤细...
- 于力周国辉王海伟杨德成
- 文献传递
- 脑心肌炎病毒IRES置换不影响口蹄疫病毒的复制和毒力被引量：1
- 2015年
- 内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换FMDV的IRES,构建并拯救出含有EMCV IRES的嵌合病毒(r FMDV-EIRES)。一步生长曲线结果显示r FMDV-EIRES无论是在鼠源BHK-21细胞还是在猪源IBRS-2细胞中的复制能力均与亲本病毒相近。另外,r FMDV-EIRES对乳鼠的致病力与亲本病毒也相同。以上研究结果表明,虽然EMCV IRES与FMDV IRES一级序列存在显著差异,但二者的置换并不影响FMDV的复制和毒力,该结果有助于加深IRES在微RNA病毒复制和致病性功能的认识。
- 高荣远杨德成孙超周国辉王海伟于力
- 关键词：内部核糖体进入位点口蹄疫病毒病毒拯救
- 分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体10B10的杂交瘤细胞系及其应用
- 本发明公开了分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体10B10的杂交瘤细胞系及其应用。本发明首先公开了一株分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体10B10的杂交瘤细胞系，其微生物保藏编号为CGMCC No.13841。本发明进一步公开了所...
- 于力周国辉王海伟杨德成
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒RFLP 1-4-4 L1C株的分离鉴定及其遗传演化分析被引量：4
- 2022年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RFLP 1-4-4 lineage1C(L1C)变异株自2020年在美国出现以来,给养猪业造成了严重的经济损失。我国目前尚无RFLP 1-4-4 L1C变异株的报道。为了解我国PRRSV RFLP 1-4-4株的流行情况,本研究对我国15个省219份疑似PRRSV感染的临床样品进行了PRRSV ORF5基因的RT-PCR检测与测序。结果显示,41份(18.72%)为PRRSV阳性样品,其中有1份来自黑龙江省样品中的PRRSV ORF5基因为1-4-4模式。将该样品经PAM分离病毒并经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离到一株RFLP模式为1-4-4的PRRSV,命名为HLJ-80。采用PCR对分离病毒的全基因组分段扩增并测序拼接后显示其基因组全长15013 nt,利用MegAlign软件分析分离病毒与PRRSV 6株代表株的全基因组序列、ORF基因序列的同源性及其NSP2的氨基酸序列;利用MEGA6.0软件分析分离株ORF5基因序列并绘制其系统发生树(ML法);采用RDP4分析分离株全基因组序列的重组事件。全基因组序列的同源性分析结果显示,HLJ-80株与NADC30株的同源性最高,为93.3%,与其他代表株的同源性均低于90%。除ORF2基因外,其余基因序列均与NADC30株同源性最高(90.6%~99.3%)。ORF5基因的遗传进化树显示,HLJ-80株属于RFLP 1-4-4 L1C株。NSP2氨基酸序列分析结果显示,与VR-2332株相比,HLJ-80株NSP2存在131个氨基酸(111+1+19)的不连续缺失,缺失位置与NADC30株一致。上述结果表明,HLJ-80株与NADC30株的亲缘关系较近。重组分析结果显示,HLJ-80株有可能与PRRSV 2014-81株、SD53-1603株高度同源的病毒株重组而来。将本研究中的41株分离株ORF5基因序列,及GenBank中1996年~2021年我国3125条共计3166条北美洲型PRRSV ORF5基因序列,按照PRRSV RFLP 1-4-4模式和L1C分支谱系分类,并分析我国RFLP 1-4-4 L1C株在时间和地理上的分布;将2016年~2021年GenBank中7个国家全部北美洲型PRRSV ORF5基因序列(共计1918条),按照PRRSV RFLP分类,分析2016年以来我�
- 田笑笑黄昕怡夏大松王海伟田志军蔡雪辉安同庆
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- A型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 2024年
- 为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间
- 周函蓉苏世博孙明霞蒙靓杨巍史鑫琪李鑫安同庆蔡雪辉王海伟孟凡丹
- 关键词：单克隆抗体
- 口蹄疫病毒3C蛋白酶切割宿主蛋白PCBP2被引量：3
- 2014年
- 口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著降低。为鉴定FMDV 3Cpro是否具有切割PCBP2蛋白的功能,本研究采用免疫共沉淀试验和激光共聚焦检测显示,FMDV 3Cpro和PCBP2在细胞内存在相互作用,并且共定位于细胞质中。进一步研究显示,FMDV 3Cpro能够切割PCBP2,而且具有剂量依赖性。此外,FMDV 3Cpro活性位点突变(H46Y)试验结果表明,FMDV 3Cpro的蛋白酶活性是切割蛋白PCBP2所必需的。FMDV 3Cpro切割PCBP2靶位点序列的鉴定及FMDV 3Cpro切割PCBP2的生物学意义有待深入研究。
- 杨春梅黄丽王海伟于会彬李一经蔡雪辉于力唐丽杰翁长江
- 关键词：口蹄疫病毒
- 单克隆抗体10B10识别的口蹄疫病毒血清型共享性抗原表位及其应用
- 本发明公开了单克隆抗体10B10识别的口蹄疫病毒血清型共享性抗原表位及其应用。本发明首先公开了单克隆抗体10B10识别的口蹄疫病毒血清型共享性抗原表位，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明所述单克隆抗体10B...
- 于力周国辉王海伟杨德成
