申硕
- 作品数：17 被引量：44H指数：4
- 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学历史地理更多>>
- 柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
- 2020年
- 目的 原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法 逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果 重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论 成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。
- 靳卫平卢佳吴杰胡岗周金戈王文辉王泽鋆孟胜利申硕
- 关键词：原核细胞多克隆抗体VP1
- 柯萨奇病毒A组16型动物模型及其在疫苗研究中的应用被引量：3
- 2015年
- 柯萨奇病毒A组16型（ coxsackievirus A16， CVA16）属于小核糖核酸病毒科的肠道病毒属（Enterovirus），其病毒颗粒呈20面体立体对称的球形结构，直径23～30 nm，由内部的核酸和衣壳蛋白质组成，无脂质包膜［1］。其核酸为单股正链RNA，全长约7410个核苷酸。 RNA 两端为5′-和3′-非编码区（ UTRs），中间的开放阅读框（ ORF）编码一个多聚前体蛋白，经蛋白酶水解为P1、P2和P3三个前体蛋白。 P1进一步酶解为VP1、VP2、VP3和VP4，共同组成病毒衣壳［2］，VP1含病毒主要的中和抗原决定簇［3］。
- 邓咪陈晓琦申硕
- 关键词：柯萨奇病毒A组16型动物模型单股正链RNA蛋白质组成疫苗
- 登革病毒疫苗研究进展被引量：1
- 2012年
- 登革病毒属黄病毒属,可通过蚊虫传播,感染人体后可引发一系列临床症状,从轻微发热到严重的并发症,称为登革热、登革出血热以及登革休克综合征。过去50年,全球登革热感染病例增加了约30倍。目前,全球热带、亚热带地区约占世界2/5的人口存在感染风险。由于缺乏有效的治疗药物,疫苗研究已成为登革热疾病防控的重心。然而,由于缺乏对病毒致病机理及病毒感染免疫应答深入的了解,候选疫苗的研发受到阻碍。但经过几十年的努力,疫苗研究取得了明显进展。目前正在研究的登革病毒疫苗依托各种技术平台,种类多样,对正处于临床前研究及临床试验阶段的不同类型疫苗进行阐述。
- 李鹏飞申硕
- 关键词：登革病毒免疫动物实验
- 柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4
- 2018年
- 目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Westernblot(WB)和间接免疫荧光试验(indirectimmunofluorescence assay,IFA)鉴定抗体。结果CVA6VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。
- 陈静陈静李鹏飞吴杰孟胜利申硕
- 关键词：VP1VP2原核表达多克隆抗体
- 杆状病毒-昆虫细胞技术在人用重组蛋白疫苗生产中的应用被引量：1
- 2013年
- 杆状病毒-昆虫细胞表达系统是生物领域四大表达系统之一。近年,随着Cervarix誖、Provenge誖和FluBlok誖的批准上市,杆状病毒-昆虫细胞表达系统的发展也取得了里程碑式的重大突破。同时,随着技术的快速发展,杆状病毒-昆虫细胞技术平台在疫苗研发和生产中的应用日益广泛而深入。本文拟对杆状病毒-昆虫细胞技术的起源、发展及其在人用重组蛋白疫苗生产中的应用作一综述。
- 王伟善吴浩飞申硕杨晓明
- 关键词：昆虫细胞疫苗重组蛋白质类
- 肠道病毒71型抗原ELISA定量检测方法的建立及应用被引量：10
- 2016年
- 目的建立肠道病毒71型（EV71）抗原ELISA定量检测方法,用于EV71疫苗生产工艺中抗原定量检测。方法选取抗EV71单克隆抗体作为包被抗体,HRP标记抗EV71多克隆抗体作为酶标二抗,建立EV71抗原ELISA定量检测方法。该方法经系统验证后,应用于定量检测2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的抗原含量。结果验证结果显示,该方法的线性范围为3.125~50.000 U/m L,样品回收率为92.0%~110.0%,变异系数小于8.8%;孵育时间及温度在一定范围内偏差的样品回收率为100.8%~113.8%;检测其他肠道病毒中抗原其A值均小于cut-off值;试剂于37℃孵育3 d后的检测样品回收率为101.4%~112.4%;2BS及Vero细胞基质EV71疫苗生产工艺过程样品的适用性检测中,抗原回收率为92.1%~114.9%。结论建立并验证EV71抗原ELISA定量检测方法,其准确度、精密度、耐用性均优良,特异性强、稳定性好,适用于不同细胞基质的EV71疫苗及多价手足口病疫苗生产工艺过程的质量控制。
- 陈晓琦王继麟季雅琦郭长福杨明游磊叶程肖慧明平刚张海峰李月影王泽鋆李秀玲申硕
- 关键词：肠道病毒71型抗原酶联免疫吸附试验手足口病
- 围妊娠期女性新型冠状病毒肺炎疫苗接种的专家共识被引量：7
- 2021年
- 在最初的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)疫苗3期临床试验中,妊娠及哺乳期女性并未被纳入,导致目前有关COVID-19疫苗接种在妊娠和哺乳期女性中的有效性和安全性方面的数据极有限。自2020年底以来,国内外相关政府部门、学术协会等对COVID-19疫苗的接种已经发布了一些共识或指导意见,其中包括对妊娠期、哺乳期或计划妊娠(自然或借助辅助生殖技术)的女性,但由于发布时间有先后等原因,对于上述特殊时期女性接种COVID-19疫苗的意见并不一致。本专家共识在参考国内外最新研究进展、相关机构推荐和我国相关政策规范,经过各位专家讨论后形成,其目的是对我国计划妊娠、妊娠期及哺乳期女性接种COVID-19疫苗提供指导性意见。
- 无李艳辉梁静汪宏波凌斌况燕杜欣徐亚辉吴小华卫兵陈晓军李小毛申硕陈红
- 关键词：疫苗妊娠期哺乳期疫苗接种免疫预防
- 柯萨奇病毒A组2型及5型的研究进展被引量：7
- 2020年
- 柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2,CV-A2)和柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)均属小RNA病毒科肠道病毒属,是柯萨奇病毒A组成员,可在全球范围内引起疱疹性咽峡炎、无菌性脑炎和手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的暴发流行,且两种病毒在进化过程中可在核苷酸的多个区域与其他A类肠道病毒发生重组,感染后可引起中枢神经系统及其他严重、致死性疾病,严重威胁人类健康。本文就CV-A2和CV-A5的分类、形态及基因结构特征、感染所致疾病及实验室诊断、流行病学研究、预防与控制等方面作一综述。
- 禹玉婷胡岗靳卫平申硕
- 关键词：柯萨奇病毒流行病学
- 柯萨奇病毒A6型多克隆抗体的制备及鉴定
- 2020年
- 目的制备兔抗柯萨奇病毒A6型(Coxsackie virus A6,CVA6)多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法将杆状病毒-昆虫细胞表达系统中共表达的CVA6病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯化后免疫日本大耳白兔,制备其多克隆抗体;用CVA6-R69-XY-2016、CVA10-R97-XY-2016、CVA16-V217-XY-2016、EV71-V54-XY-2016及CVA6 Gdula毒株分别感染人恶性胚胎横纹肌瘤RD细胞,体外中和试验及ELISA法检测中和抗体和结合抗体效价,Western blot法及间接免疫荧光试验(indirect immunoinfluscent assay,IFA)检测抗体特异性。结果制备的兔抗CVA6 VLP多克隆抗体与CVA6-R69-XY-2016及CVA6 Gdula毒株的中和抗体效价均可达1024,多克隆抗体仅与这2种病毒的结构蛋白VP1、VP2及VP3产生特异性反应,仅在这2种病毒感染的RD细胞中产生明显的绿色荧光;经ELISA分析,其结合效价达1×10^7。结论成功制备了兔抗CVA6 VLP多克隆抗体,其特异性良好,可为CVA6血清型中和试验鉴别、病毒结构蛋白定性定量分析提供抗体试剂。
- 魏真妮孟晓丹陈静王文辉卢佳卢佳吴杰郭靖王泽鋆吴杰申硕
- 关键词：病毒样颗粒多克隆抗体
- COVID-19疫苗的研究进展被引量：6
- 2020年
- 新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)是由新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的一种新的传染病。阻止COVID-19流行最有效的方法就是研制安全有效的疫苗,目前国内外多家机构开展了COVID-19疫苗的研究,包括核酸疫苗、病毒载体疫苗、灭活疫苗、重组蛋白疫苗、减毒流感病毒载体疫苗等不同类型,并取得了快速进展。本文对COVID-19疫苗的类型、研究进展、存在的问题等进行综述。
- 陈静李波申硕范亚飞
- 关键词：疫苗
