蒋芳萍
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成熟心肌细胞对早期胚胎或胚胎干细胞定向分化诱导作用的研究
- 目的：拟证实成熟心肌细胞对早期胚胎或胚胎干细胞(ESCs)定向分化存在特殊的诱导作用，为建立一套简单实用的胚胎干细胞移植技术提供理论依据。 方法：分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞，以DAPI(4'6-联眯-2-苯基吲哚)染核...
- 蒋芳萍
- 关键词：早期胚胎胚胎干细胞定向分化
- 文献传递
- 昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养方法被引量：7
- 2008年
- 背景：目前已经建立了数百个小鼠的胚胎干细胞系，这些细胞系大多数来源于129，C57BL/6J和BALB/C品系的小鼠，而昆明株小鼠的胚胎干细胞建系的成功率很低。目的：探寻昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的方法，以期提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的成功率。设计、时间及地点：以细胞为对象的观察性实验，于2006—04/2007—06在重庆市神经病学重点实验室完成。材料：昆明白小鼠3．5d和4d胚龄的囊胚。方法：分别将昆明白小鼠3．5d和4d胚龄的囊胚培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，四五天后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，分别采用2．5g/L胰蛋白酶-0．4g/L乙二胺四乙酸与1g/L胰蛋白酶-0．2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械离散胚胎干细胞集落。主要观察指标：观察集落的生长情况，通过碱性磷酸酶染色、OCT-4染色、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定。结果：①4d胚龄胚胎的贴壁率、内细胞团出现率及克隆形成率高于3，5d胚龄（P〈0．05）。②采用1g/L胰蛋白酶-0.2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min并辅以机械作用，分离克隆胚胎干细胞效果较好。③胚胎干细胞呈集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性，悬浮培养胚胎干细胞能得到囊状胚体。结论：采用4d胚龄的囊胚和1g/L胰蛋白酶-0．2g/L乙二胺四乙酸室温作用2～4min，并辅以机械作用的消化方法，有助于提高昆明小鼠胚胎干细胞建株的能力。
- 李卫东张晓刚常静蒋芳萍
- 关键词：干细胞成纤维细胞细胞分离
- 心肌细胞裂解液或心肌细胞对胚胎干细胞定向分化的诱导作用
- 目的探讨心肌组织微环境中诱导胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的相关因素。方法收集小鼠3.5d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,5～6d后取内细胞团接种在滋养层上分离培养出ESC。取4～5代ESC,先将E...
- 李卫东张晓刚蒋芳萍常静
- 文献传递
- 心肌细胞或心肌组织中的成纤维细胞对胚胎干细胞定向分化诱导作用的研究
- 目的了解心肌微环境对胚胎性干细胞(ESC)向心肌细胞分化的影响。方法通过酶消化法从SD大鼠乳鼠中分离出心肌细胞及心肌成纤维细胞,制备心肌细胞环境(含少量成纤维细胞)、心肌成纤维细胞环境。取胎龄为12～14天昆明小鼠胎鼠制...
- 蒋芳萍张晓刚丘彦李卫东常静
- 文献传递
- 与心肌细胞共培养的小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化被引量：4
- 2009年
- 目的探讨心肌细胞促进胚胎干细胞（ESCs）分化为心肌样细胞的诱导作用。方法收集小鼠3.5 d胚龄的囊胚,将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,4-5 d后取内细胞团接种在饲养层上分离培养出ESCs。取3-5代ESCs,先将ESCs悬浮培养形成2-3 d的拟胚体（EBs）,再与新生大鼠心肌细胞共培养诱导向心肌细胞分化,相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T（TnT）、α-肌动蛋白（α-actin）的表达。结果诱导第3天起可见自发性、有节律跳动的拟胚体出现,12 d时第2组约有93%的拟胚体出现节律性收缩,显著高于其他各组,均表达心肌细胞特异性蛋白cTnT、β-actin,心肌细胞直接接触诱导组其分化比率达56.5%,高于其他各组,并且分化的细胞形态较单一。结论心肌细胞和心肌细胞裂解液均可诱导ESCs向心肌细胞定向分化,且心肌细胞的诱导作用强于心肌细胞裂解液。
- 李卫东张晓刚常静蒋芳萍
- 关键词：胚胎干细胞共培养分化心肌细胞
- 成熟心肌细胞诱导胚胎干细胞定向分化为心肌样细胞被引量：8
- 2009年
- 目的:拟证实成熟心肌细胞对胚胎干细胞(ESCs)定向分化的诱导作用。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,以DAPI(4’6-联眯-2-苯基吲哚)染核作为细胞标记。取昆明小鼠3.5-4d的囊胚培养后分离出ESCs,以1和(或)2代的小鼠ESCs细胞团与心肌细胞共培养。录像动态观察ESCs向心肌细胞分化的情况;分别于共培养后3、7、14d对ESCs行肌钙蛋白T(cTnT)免疫荧光染色检测。结果:1代或2代的ESCs和/或细胞团与心肌细胞共培养约7d左右出现成节律搏动的心肌样细胞;最好实验批次,可计数到1/4以上的ESCs和/或ESCs细胞团出现节律性搏动。心肌细胞共培养体系中添加0.6%DMSO时,节律搏动的心肌样细胞分化率未见提高。心肌细胞诱导组,记录已搏动和未搏动ESCs诱导分化后心肌样细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;ESCs与心肌成纤维细胞共培养诱导组,分化的细胞cTnT蛋白荧光染阴性;0.6%DMSO诱导组约3%的细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;DMSO联合心肌细胞诱导组,结果与单纯心肌细胞诱导组相似。结论:未经建系操作的ESCs可直接诱导分化为节律搏动的心肌细胞;成熟心肌细胞与ESCs共培养状态下,成熟心肌细胞是ESCs定向分化较强的诱导因素。
- 蒋芳萍张晓刚丘彦李卫东常静
- 关键词：心肌细胞胚胎干细胞细胞分化
- 胚胎干细胞在心血管疾病治疗的初步研究
- 2008年
- 胚胎干细胞（ESC）是一种多潜能细胞,可在体外培养时保持未分化状态,并具有分化为特定体细胞的潜能,包括心肌细胞。ESC可提供大量分化的心肌细胞用于使受损的心肌层再生的治疗。目前ESC在心血管疾病治疗方面的研究仍处于基础环节,现将相关问题作一综述。
- 蒋芳萍张晓刚
- 关键词：心血管疾病治疗胚胎干细胞心肌细胞未分化ESC体细胞
