许智慧
- 作品数：77 被引量：216H指数：9
- 供职机构：解放军302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种利用血清痕量基因组DNA进行HLA基因分型的方法
- 一种以血清为样本，利用血清痕量基因组DNA进行HLA基因分型的方法。采用少量血清裂解提取DNA，设计特异性引物运用巢式PCR技术，经两轮巢式PCR可以成功利用PCR产物片段的大小经电泳分辨出HLA-A的三种基因型。本发明...
- 徐东平刘妍许智慧李晓东钟彦伟戴久增王琳王耀
- 新型中药制剂肃毒星对乙型肝炎病毒体外复制的抑制作用研究被引量：6
- 2014年
- 目的观察新型中药制剂肃毒星对野生和恩替卡韦(ETV)耐药乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。方法以不同浓度(0、0.0005﹑0.001﹑0.005﹑0.01mg/ml)的肃毒星分别处理HepG2.2.15细胞(D基因型/ayw亚型野生HBV稳定复制细胞系)和HepG2.A64细胞(C基因型/adr亚型ETV耐药HBV稳定复制细胞系),作用时间4d。采用酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中HBsAg和HBeAg含量的变化;提取细胞内病毒核心颗粒,采用实时荧光定量PCR方法检测两种细胞内HBV DNA复制水平的变化。观察不同作用时间下,药物对HBV DNA的抑制作用。结果肃毒星对HepG2.2.15细胞和HepG2.A64细胞内HBV DNA复制和HBsAg、HBeAg的分泌均有明显抑制作用,且具有药物剂量和时间依赖性,最高浓度(0.01mg/ml)的肃毒星对HepG2.2.15细胞内病毒的抑制率达到80.83%,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别达51.00%和64.05%;而对HepG2.A64细胞内HBV DNA抑制率为65.18%,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为32.85%和73.86%。随肃毒星作用时间延长,其对HepG2.2.15细胞HBV DNA的抑制效果增强,但未显示对HepG2.A64细胞内ETV耐药型HBV株病毒抑制率增强的效果。结论体外细胞培养实验中,肃毒星不仅可有效抑制野生HBV复制和抗原分泌,而且对ETV耐药HBV的复制和抗原分泌也具有很好的抑制作用。
- 姚伟明刘妍思兰兰许智慧李鹏高卜绿萍兰金初徐东平
- 一种乙型肝炎病毒复制中间体核心颗粒DNA的提取方法
- 本发明提供一种乙型肝炎病毒（HBV）复制中间体核心颗粒DNA的新的提取方法。本方法利用抗原抗体特异性结合的原理，以免疫共沉淀的方法从转染HBV基因组的HepG2细胞中纯化核心颗粒，洗涤后裂解核心颗粒，释放其中的复制型HB...
- 徐东平刘妍姚伟明许智慧李晓东
- 文献传递
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究被引量：4
- 2013年
- 目的评价乙肝病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。方法 385例研究对象包括116例轻中度慢性乙肝(CHB-M)患者,123例重度慢性乙肝(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,统计A1846T变异的发生率。挑选代表性A1846T变异株HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中,并通过定点突变获得野生型对照。BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平;用PCR分别扩增含nt1846变异型和野生型的HBVCP区片段,构建pGL3-CP双荧光素酶真核报告表达载体,转染HepG2细胞,分析检测A1846T变异对荧光素酶表达的影响。结果 HBV A1846T变异发生率随疾病程度加重依次增高,CHB-M、CHB-S和ACLF患者的变异检出率分别为31.03%、42.27%和55.48%(P<0.01)。A1846T变异株的复制力、分泌的HBsAg水平和核心启动子活性较野生株分别提高了320%、28%和85%,常见的CP区A1762T/G1764A双联变异株分别较野生株提高了67%、9%和72%,A1846T变异对提高病毒复制力的影响更强。结论 A1846T变异可显著增加HBV复制力,提高HBsAg表达水平,增强启动子活性,顺式激活下游基因转录表达,提示该变异可能与慢性乙肝重症化发生机制相关。
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 关键词：肝功能衰竭启动区DNA复制
- C基因型阿德福韦酯耐药HBV稳定复制表达细胞系
- 本发明构建了一种耐阿德福韦酯乙型肝炎病毒（HBV）稳定复制表达细胞系，病毒来源于中国阿德福韦酯耐药慢乙肝患者，为我国流行的C基因型HBV株，其DNA聚合酶/逆转录酶区含有核苷酸类似物阿德福韦酯耐药突变位点。本发明通过筛选...
- 刘妍徐东平李奇刘文李晓东王琳许智慧
- 文献传递
- HBsAg和抗HBs双阳性慢性HBV感染患者s区主要亲水区新增N-糖基化突变与肝细胞癌发生风险的相关性研究被引量：9
- 2016年
- 目的探讨临床HBsAg和抗HBs双阳性（简称双阳性）慢性HBv感染患者病毒S基因主要亲水区（MHR）新增N-糖基化突变与肝细胞癌（HCC）发生的相关性。方法纳入2009年7月-2015年6月在解放军302医院就诊的284例双阳性慢性HBV感染患者，通过巢式PCR方法扩增血清样本HBVs基因全序列并进行测序，分析MHR新增糖基化突变和其他临床指标与HCC发生的相关性并动态分析18例双阳性HCC患者临床确诊HCC前后S区新增N-糖基化的突变情况。结果多因素分析表明，患者年龄〉40岁、HBsAg〉中位数、HBeAg阴性和MRH新增N-糖基化突变是双阳性慢性HBV感染患者发展为HCC的危险因素（分别为OR=4．281，95％CI 1．843N9．941，P=0．001；OR=3．146，95％CI 1．633～6．060，P=0．001；OR=2．097，95％CI 1．010-4．357，P=0．047；OR=4．381，95％CI1．842—10．417，P=0．001），而丙氨酸氨基转移酶（AIT）、抗HBs〉中位数、抗HBe阳性和HBVDNA水平与HCC发生均无显著相关性。动态研究结果表明，18例双阳性HCC患者样本中有8例在发生HCC1-4年前已携有新增N．糖基化突变。结论在双阳性患者中HBVs基因MHR区新增N-糖基化突变与HCC发生密切相关，HBsAg和抗HBs双阳性叠加MH嘶增糖基化突变可作为慢性HBv感染患者HCC发生风险的预测指标。
- 乔艳许智慧卢姗姗李晓东黄鹏宇刘妍赵丽徐东平杨悦李进
- 关键词：乙型慢性突变N-糖基化
- 958例乙型肝炎患者HBV前C/BCP区变异检测及其意义分析被引量：10
- 2009年
- 目的检测不同病情乙型肝炎患者HBV前C/BCP区的变异特点并分析变异的意义。方法采用巢式PCR方法扩增399例轻中度慢性乙型肝炎、211例重度慢性乙型肝炎和348例慢性重型乙型肝炎患者的HBV前C/BCP区序列,PCR产物纯化后直接测序。分析10个热点变异位点及其插入/缺失变异情况,并进行统计学分析,比较这些变异对病情进展的影响。结果随着病情的加重,T1753、A1762、G1764、C1766、T1768、G1862、G1896、G1899等8个位点变异频率显著增加(P<0.01),其中5个位点的变异发生率呈现出轻中度慢性乙型肝炎<重度慢性乙型肝炎<慢性重型乙型肝炎的阶梯式上升特点。3组患者未检出突变的比率分别为27.82%、7.58%和2.01%,呈现阶梯式下降特点。此外,前C/BCP区多联变异和插入/缺失突变的发生率在病情加重时也明显增加(P<0.01),其中三联变异率依次为轻中度慢性乙型肝炎35.34%、重度慢性乙型肝炎53.56%、慢性重型乙型肝炎67.82%。结论乙型肝炎患者HBV前C/BCP区多个位点变异与慢性乙型肝炎的重症化进程相关,对乙型肝炎重症化发生机制的研究及其临床预警分析有积极意义。
- 任晓强许智慧刘志国梁兆玲李晓东李梵毛远丽王慧芬徐东平
- 关键词：基本核心启动子
- 乙型肝炎患者HBV前S/S蛋白特异性CTL表位变异分析被引量：4
- 2009年
- 目的比较慢性重型乙型肝炎(CSHB)与慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S/S蛋白特异性细胞毒性T细胞(CTL)表位变异的差异,探讨乙型肝炎重症化和慢性化的机制。方法对262例乙型肝炎患者的血清样本进行HLA-A2分型;用巢式PCR扩增血清HBV前S/S基因并对PCR产物进行序列测定;根据HBV前S/S基因序列,用VirusBlast软件鉴定患者感染的HBV基因型;用VectorNTI软件对目前已知的13个HLA-A2限制性前S/S蛋白特异性CTL表位进行序列分析。结果123例(46.9%)患者HLA-A2阳性,其中CSHB71例,CHB52例。CTL表位变异分析结果如下:(1)两组间所有患者进行比较,患者S177-185和S338-347表位变异发生率有显著差异(P<0.05);(2)两组间HBVB基因型患者进行比较,患者S131-139、S183-191和S204-212表位变异发生率有极显著差异(P<0.01);(3)两组间HBVC基因型患者进行比较,CSHB组患者的S131-139表位较CHB组患者有增高(P=0.05)。结论某些HBV前S/S蛋白特异性CTL表位在CSHB与CHB患者间变异有明显差异,受病毒基因型影响,CTL表位变异可能与乙型肝炎的重症化和慢性化机制相关。
- 许智慧任晓强刘妍王耀李晓东戴久增李乐姚增涛钟彦伟徐东平
- 各种恩替卡韦耐药HBV株鉴定及替诺福韦酯对其抑制力分析被引量：7
- 2013年
- 目的分析临床分离的不同形式恩替卡韦(ETV)耐药HBV株的病毒复制力并探讨替诺福韦酯(TDF)对其的抑制力。方法从4例ETV治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中提取并扩增HBV反转录酶(reverse transcriptase,RT)基因,克隆测序分析其基因型耐药变异特点。选取代表性野生型和ETV耐药型HBV克隆株,构建pTriEx-HBV(C)1.1倍重组表达载体。提纯质粒转染HepG2细胞系,5d后检测上清中HBVDNA产生量,分析不同变异形式ETV耐药变异株体外复制力水平及TDF对其抑制力。结果 4份血清中共得到16种含不同HBVRT区变异形式的克隆株,10种与ETV耐药有关,另有6种与拉米夫定耐药有关。表型分析显示:与野生株相比,ETV耐药变异株复制力水平均有所下降,其中rtT184I+M204I变异株复制力最低,是野生株的19.3%,rtM204I+M250L基础上出现补偿突变(rtL80I、rtV173L和rtL180M)的变异株复制力较高,存在相同补偿突变的前提下,rtM204I基础上的耐药变异较rtM204V基础上的复制力低。TDF对各种类型ETV耐药变异病毒的复制力均有较强抑制作用(96.11%～99.90%)。结论与野生株相比,不同变异形式的ETV耐药变异株体外复制力均下降,TDF可有效抑制ETV耐药变异株复制,将是治疗ETV耐药患者的一种很好的选择。
- 李艳乐刘妍许智慧王晓陈丽戴久增姚增涛江玲张连峰徐东平炎研究室
- 关键词：乙型肝炎病毒突变抗病毒药抗药性
- 一种新的HBV表型耐药研究方法的建立
- 2013年
- 目的:探索建立一种快速、简便、经济的HBV表型耐药分析方法。方法:将野生型pTriEx-HBV1.1表达载体转染HepG2细胞,5h后给予不同浓度的LAM、ADV及ETV处理,隔天换药1次,换药2d后收集培养上清及细胞,用Dnase处理后,real-timePCR检测HBVDNA的水平。结果:上清及细胞内核心颗粒HBVDNA的水平下降2～3个数量级,最大抑制率达98%,EC50值接近。结论:以上清病毒定量代替核心颗粒,建立了基于real-timePCR的HBV表型耐药分析方法,有利于HBV临床治疗的耐药监测。
- 朱华苏何玲刘永明刘青波马义丽许智慧钟彦伟徐东平
- 关键词：肝炎病毒乙型REAL-TIME
